鄧芳, 高修安, 許麗綿, 劉瑜
(1.佛山市婦幼保健院中醫(yī)科,廣東佛山 528000;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院不孕不育科,廣東廣州 510405)
不孕癥是育齡期女性的常見疾病之一,近年來,隨著女性社會地位的提高而伴隨而來的各種壓力的增大,以及全面二孩政策的開放等,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢[1-3]。體外受精與胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)作為輔助生殖技術(shù)的重要組成部分雖解決了部分女性不孕癥的難題[4],但也存在妊娠成功率較低的問題。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,IVF-ET的活產(chǎn)率僅為10.9%[5];而大部分患者出現(xiàn)反復(fù)種植失敗、IVF-ET 術(shù)后早期妊娠丟失、生化妊娠或自然流產(chǎn)等[6]。因此,如何改善反復(fù)IVF-ET失敗患者妊娠結(jié)局已成為生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)問題。李娜等[7]的文獻(xiàn)研究認(rèn)為,胚胎植入受多因素影響,過程復(fù)雜,成功植入的重要因素為良好的胚胎質(zhì)量和子宮內(nèi)膜容受性。子宮內(nèi)膜容受性是指內(nèi)膜發(fā)生結(jié)構(gòu)、形態(tài)的變化,內(nèi)膜間質(zhì)增生,使子宮內(nèi)膜處于著床狀態(tài),允許囊胚定位、粘附并穿入,良好的子宮內(nèi)膜容受性是妊娠的關(guān)鍵因素[8]。中醫(yī)治療在輔助生殖方面具有顯著優(yōu)勢[2]。本研究主要觀察反復(fù)IVF-ET失敗患者在進(jìn)入周期前給予穴位注射和中藥周期療法治療后的最終妊娠結(jié)局及其調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜容受性的作用機(jī)制,現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。
1.1研究對象及分組選取2017年3月~2019年3月在佛山市婦幼保健院及廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中醫(yī)不孕不育門診就診的,且反復(fù)IVF-ET失敗,子宮內(nèi)膜容受性差(子宮內(nèi)膜過薄或過厚、子宮內(nèi)膜形態(tài)欠均、子宮血流灌注差),擬繼續(xù)行胚胎移植的患者,共70 例。根據(jù)患者就診先后順序,采用隨機(jī)數(shù)字表將患者隨機(jī)分為治療組和對照組,每組各35 例。本研究符合醫(yī)學(xué)倫理學(xué)要求并通過佛山市婦幼保健院及廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會的審核批準(zhǔn)。
1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)
1. 2. 1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參照文獻(xiàn)[9],反復(fù)IVFET失敗是指移植失敗3 周期及以上且累計(jì)移植至少4 個優(yōu)質(zhì)胚胎而未獲得成功妊娠者。
1.2.2 中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)國家技術(shù)監(jiān)督局頒布的《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)·中醫(yī)臨床診療術(shù)語:證候部分》[10]和羅元愷主編的《實(shí)用中醫(yī)婦科學(xué)》[11]制定不孕癥的辨證標(biāo)準(zhǔn)。①腎虛證:久婚不孕,月經(jīng)后期或閉經(jīng),經(jīng)少質(zhì)稀,經(jīng)色淡紅,伴腰膝酸軟,性欲減退,耳鳴頭暈,舌淡苔少,脈沉細(xì)。②腎虛肝郁證:久婚不孕,月經(jīng)先后不定期,經(jīng)前乳房脹痛,行經(jīng)下腹痛,經(jīng)少色黯,伴有血塊,腰膝酸軟,煩躁易怒,舌暗苔薄白,脈弦。③腎虛痰濕證:久婚不孕,月經(jīng)后期或閉經(jīng),形體肥胖,月經(jīng)量少,帶下量多,面色?白,腰膝酸軟,頭暈胸悶,舌苔白膩,脈滑。④腎虛血瘀證:久婚不孕,月經(jīng)后期,經(jīng)少色紫,有血塊,下腹脹痛,腰膝酸軟,頭暈耳鳴,舌紫,邊有瘀點(diǎn),脈沉澀。
1. 3納入標(biāo)準(zhǔn)①符合反復(fù)IVF-ET 失敗的西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)和不孕癥的中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn);②月經(jīng)周期規(guī)則,內(nèi)分泌無異常;③助孕周期前3個月內(nèi)無口服避孕藥史;④近1年內(nèi)無流產(chǎn)、分娩史,無宮內(nèi)節(jié)育器放置或盆腔感染史;⑤有妊娠結(jié)局及新生兒出生記錄;⑥自愿參加本研究并簽署知情同意書的患者。
1.4排除標(biāo)準(zhǔn)①年齡<20 歲或>40 歲的患者;②染色體異常的患者;③伴有生殖道發(fā)育畸形、盆腔結(jié)核、子宮肌瘤或腺肌癥、輸卵管積水等盆腔器質(zhì)性病變的患者;④伴有盆腔炎、子宮內(nèi)膜炎、陰道炎、宮頸炎等婦科炎性疾病患者;⑤精神異常及合并其他內(nèi)科、外科疾病的患者;⑥失訪及未能獲得妊娠結(jié)局的患者。
1.5治療方法
1.5.1 治療組 給予穴位注射聯(lián)合中藥周期療法治療。(1)穴位注射。在胚胎移植前3個月,于月經(jīng)周期第7天開始,每天早上同一時間給予人胎盤組織液針(湖南一格制藥有限公司生產(chǎn),批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字S43020001;規(guī)格:2 mL/支)4 mL注射雙側(cè)子宮穴(位于下腹部,臍中下4 寸,前正中線旁開3 寸)。具體操作方法:常規(guī)消毒皮膚后進(jìn)針,在得氣后(患者自覺下腹部局部脹痛即可),緩慢推注人胎盤組織液左右每穴各2 mL,連續(xù)注射14 d,共治療3 個月經(jīng)周期。(2)中藥周期療法。①腎虛證:經(jīng)后期擬天癸補(bǔ)腎方(藥物組成:熟地黃15 g、菟絲子15 g、山茱萸15 g、當(dāng)歸10 g、白芍10 g、巴戟天15 g、女貞子15 g、香附10 g、炙甘草5 g)以補(bǔ)腎養(yǎng)血滋陰;經(jīng)間期原方基礎(chǔ)上加桃仁10 g、益母草10 g 以活血化瘀,促進(jìn)卵子排出;經(jīng)前期原方基礎(chǔ)上加桑寄生20 g、川續(xù)斷15 g以補(bǔ)腎助孕。②腎虛肝郁證:經(jīng)后期擬補(bǔ)腎調(diào)肝湯(藥物組成:熟地黃15 g、菟絲子15 g、山茱萸15 g、柴胡15 g、香附10 g、茯苓15 g、當(dāng)歸10 g、山藥15 g、炙甘草5 g)以補(bǔ)腎疏肝養(yǎng)血;經(jīng)間期原方基礎(chǔ)上加桃仁10 g、益母草10 g以活血化瘀,促進(jìn)卵子排出;經(jīng)前期原方基礎(chǔ)上加桑寄生20 g、川續(xù)斷15 g以補(bǔ)腎助孕。③腎虛痰濕證:經(jīng)后期擬補(bǔ)腎啟宮方(藥物組成:熟地黃15 g、菟絲子15 g、山茱萸15 g、陳皮10 g、法半夏8 g、川芎10 g、蒼術(shù)15 g、茯苓15 g、炙甘草5 g)以補(bǔ)腎燥濕化痰;經(jīng)間期原方基礎(chǔ)上加桃仁10 g、益母草10 g以活血化瘀,促進(jìn)卵子排出;經(jīng)前期原方基礎(chǔ)上加桑寄生20 g、川續(xù)斷15 g以補(bǔ)腎助孕。④腎虛血瘀證:經(jīng)后期擬補(bǔ)腎逐瘀方(熟地黃15 g、菟絲子15 g、山茱萸15 g、赤芍10 g、丹參10 g、川芎5 g、五靈脂10 g、路路通15 g、炙甘草5 g)以補(bǔ)腎活血化瘀;經(jīng)間期原方基礎(chǔ)上加桃仁10 g、益母草10 g以活血化瘀,促進(jìn)卵子排出;經(jīng)前期原方基礎(chǔ)上加桑寄生20 g、川續(xù)斷15 g 以補(bǔ)腎助孕?;颊咦越?jīng)期第7 天開始口服經(jīng)后方6 d,經(jīng)間方2 d 和經(jīng)前方6 d,即每個月經(jīng)周期口服中藥14 d,共治療3 個月經(jīng)周期。根據(jù)以上劑量將每日中藥制成免煎顆粒沖劑兩包(由廣東一方制藥有限公司統(tǒng)一制作),早晚各沖服1包。
1. 5. 2 對照組 給予口服維生素E 治療。用法:天然維生素E軟膠囊(浙江新昌制藥有限公司生產(chǎn),批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字H20003539;規(guī)格:100 mg/粒),口服,每次1 粒,每天2 次,早晚各服用1粒,共治療3個月經(jīng)周期。
1. 6觀察指標(biāo)①觀察2 組患者治療前和治療3 個周期后的著床窗口期雌二醇(E2)、孕酮(P)水平的變化情況。②觀察2組患者治療前和治療3個周期后的著床窗口期子宮內(nèi)膜厚度及內(nèi)膜形態(tài)的變化情況。子宮內(nèi)膜厚度的測量:約宮底下2 cm,取子宮正中矢狀面的最大直徑,子宮肌層與內(nèi)膜交界的距離。子宮內(nèi)膜形態(tài)分A、B、C型:子宮內(nèi)膜呈典型的“三線征”為A 型;三線征不明顯,內(nèi)膜回聲呈均一的等回聲為B型;內(nèi)膜回聲比肌層回聲高為C型。③觀察2組患者治療前和治療3 個周期后的卵巢和子宮內(nèi)膜血流動力學(xué)[動脈阻力指數(shù)(resistance index,RI)]的變化情況。④觀察2組患者治療前和治療3個周期后的著床窗口期人絨毛膜促性腺激素(HCG)檢查提示陰性后子宮內(nèi)膜血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的免疫組化檢測情況。⑤觀察2組患者的種植率和臨床妊娠率情況。種植率是指總孕囊數(shù)目占總移植數(shù)目的比率;臨床妊娠率是指臨床妊娠的周期數(shù)占移植周期的比率。
1.7統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,符合正態(tài)分布者組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),治療前后比較采用配對樣本t檢驗(yàn);不符合正態(tài)分布者采用非參數(shù)檢驗(yàn)(Mann-Whitney 檢驗(yàn))。計(jì)數(shù)資料用率或構(gòu)成比表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.12組反復(fù)IVF-ET失敗患者的脫落退出情況治療組有1例于第3月經(jīng)周期因妊娠退出試驗(yàn),實(shí)際第3周期著床窗口期進(jìn)行指標(biāo)檢測的患者有34例;對照組無退出病例,實(shí)際第3周期著床窗口期進(jìn)行指標(biāo)檢測的患者有35例。
2.22組反復(fù)IVF-ET失敗患者基線資料比較治療組患者的年齡最小21歲,最大39歲,平均年齡(31.34±4.84)歲;平均IVF-ET失敗次數(shù)為(3.74±0.70)次。對照組患者的年齡最小22 歲,最大38 歲,平均年齡(29.49±5.30)歲;平均IVF-ET失敗次數(shù)為(3.60 ± 0.74)次。2 組患者的年齡、IVF-ET 失敗次數(shù)等基線資料比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。
2.32組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療前后著床窗口期E2、P 水平比較表1 結(jié)果顯示:治療前,2 組患者著床窗口期E2、P 水平比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后,2 組患者的E2 水平和對照組的P 水平均無明顯變化(P>0.05),而治療組的P 水平明顯提高(P<0.05);組間比較,治療組的P 水平明顯高于對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。提示治療組可提高患者孕激素,而高孕激素水平可增強(qiáng)子宮內(nèi)膜的調(diào)節(jié)功能,有利于子宮內(nèi)膜容受性的建立。
表1 2組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療前后著床窗口期E2、P水平比較Table 1 Comparison of serum E2 and P levels in the implantation window of the repeated IVF-ET failure patients of the two groups before and after treatment (±s)
表1 2組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療前后著床窗口期E2、P水平比較Table 1 Comparison of serum E2 and P levels in the implantation window of the repeated IVF-ET failure patients of the two groups before and after treatment (±s)
①P<0.05,與治療前比較;②P<0.01,與對照組治療后比較
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2.42組反復(fù)IVF-ET失敗患者著床窗口期子宮內(nèi)膜厚度及A型內(nèi)膜所占比例比較
2. 4. 1 2 組反復(fù)IVF-ET 失敗患者治療前后著床窗口期子宮內(nèi)膜厚度比較 表2 結(jié)果顯示:治療前,2組患者著床窗口期子宮內(nèi)膜厚度比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后,2 組患者的著床窗口期子宮內(nèi)膜厚度均較治療前增厚(P<0.05),且治療組的著床窗口期子宮內(nèi)膜厚于對照組,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
2.4.2 2組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療后A型內(nèi)膜所占比例比較 表2結(jié)果顯示:治療后,治療組的A 型內(nèi)膜所占比例為67.65%(23/34),明顯高于對照組的37.14%(13/35),組間比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
表2 2組反復(fù)IVF-ET失敗患者著床窗口期子宮內(nèi)膜厚度及A型內(nèi)膜所占比例比較Table 2 Comparison of the endometrial thickness and the proportion of type A endometrium in the implantation window of the repeated IVF-ET failure patients of the two groups (±s)
表2 2組反復(fù)IVF-ET失敗患者著床窗口期子宮內(nèi)膜厚度及A型內(nèi)膜所占比例比較Table 2 Comparison of the endometrial thickness and the proportion of type A endometrium in the implantation window of the repeated IVF-ET failure patients of the two groups (±s)
①P<0.05,與治療前比較;②P<0.05,與對照組比較
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2.52組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療前后著床窗口期卵巢和子宮內(nèi)膜RI 比較表3 結(jié)果顯示:治療前,2 組患者著床窗口期卵巢和子宮內(nèi)膜RI 比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后,治療組患者著床窗口期卵巢和子宮內(nèi)膜RI 均較治療前明顯降低(P<0.05),而對照組均有降低趨勢,但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);組間比較,治療組的卵巢和子宮內(nèi)膜RI 均明顯低于對照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。提示治療組可使卵巢血流阻力降低,從而促進(jìn)卵子發(fā)育,同時可降低子宮內(nèi)膜血流阻力,改善子宮內(nèi)膜容受性。
表3 2組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療前后著床窗口期卵巢和子宮內(nèi)膜RI比較Table 3 Comparison of RI of ovaries and RI of the endometrium in the implantation window of the repeated IVF-ET failure patients of the two groups before and after treatment (±s)
表3 2組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療前后著床窗口期卵巢和子宮內(nèi)膜RI比較Table 3 Comparison of RI of ovaries and RI of the endometrium in the implantation window of the repeated IVF-ET failure patients of the two groups before and after treatment (±s)
①P<0.05,與治療前比較;②P<0.01,與對照組治療后比較
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2.62組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療前后子宮內(nèi)膜VEGF 表達(dá)比較子宮內(nèi)膜VEGF 表達(dá)部位主要位于腺上皮細(xì)胞,其次為間質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的胞漿。表4 結(jié)果顯示:治療前,2 組患者腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的VEGF表達(dá)水平比較,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后,治療組患者腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的VEGF表達(dá)水平均較治療前明顯提高(P<0.05),而對照組均有提高趨勢,但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);組間比較,治療組的腺上皮細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞的VEGF表達(dá)水平均明顯高于對照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
表4 2組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療前后子宮內(nèi)膜VEGF表達(dá)比較Table 4 Comparison of the endometrial VEGF expression level in the repeated IVF-ET failure patients of the two groups before and after treatment (±s)
表4 2組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療前后子宮內(nèi)膜VEGF表達(dá)比較Table 4 Comparison of the endometrial VEGF expression level in the repeated IVF-ET failure patients of the two groups before and after treatment (±s)
①P<0.05,與治療前比較;②P<0.01,與對照組治療后比較
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表5 2組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療后臨床種植率和妊娠率比較Table 5 Comparison of the implantation rate and pregnancy rate in the repeated IVF-ET failurepatients of the two groups after treatment
2.72組反復(fù)IVF-ET失敗患者治療后臨床種植率和妊娠率比較表5結(jié)果顯示:治療3個月經(jīng)周期后,治療組患者的種植率和妊娠率分別為39.68%(25/63)和62.50%(20/32),對照組分別為22.06%(15/68)和34.38%(11/32);組間比較,治療組的種植率和妊娠率均明顯高于對照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),提示治療組較對照組能提高種植率和妊娠率。
3.1從中醫(yī)腎虛理論探討子宮內(nèi)膜容受性子宮內(nèi)膜接受胚胎著床能力臨床常用子宮內(nèi)膜容受性來評估。子宮內(nèi)膜容受不良的臨床表現(xiàn)可見于中醫(yī)“不孕癥”和“胎元不固”等病證。根據(jù)中醫(yī)理論,腎為先天之本,主藏精和生殖,子宮能否發(fā)揮正常的生理功能均由腎之藏精功能決定。腎所藏之精可化為精血,精血濡養(yǎng)胞宮,則胞宮易于受孕;若腎之功能失常,腎精不足,沖任精血失充,胞宮內(nèi)膜失養(yǎng),胚胎著床缺乏物質(zhì)基礎(chǔ),則胞宮難于成孕。總之,沖任不固,胞絡(luò)、胞脈空虛,胎元不穩(wěn),均與腎虛有關(guān)。由此可見,子宮內(nèi)膜容受不良之根本為腎虛。
3.2穴位注射改善子宮內(nèi)膜容受性的作用機(jī)理穴位注射是一種復(fù)合性的治療方法,它結(jié)合針刺和藥物于一體,既可發(fā)揮穴位針刺作用,又能融合藥物的功效[12-13]。研究發(fā)現(xiàn),患者經(jīng)穴位注射后,該穴位發(fā)出針刺信號,從外周神經(jīng)傳入中樞神經(jīng),使腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)及神經(jīng)肽類發(fā)生變化,釋放生物活性介質(zhì),激發(fā)體內(nèi)神經(jīng)-內(nèi)分泌反應(yīng),產(chǎn)生相關(guān)的生物學(xué)效應(yīng)。該效應(yīng)實(shí)現(xiàn)穴位刺激對機(jī)體局部及相關(guān)系統(tǒng)的功能調(diào)節(jié)。這種調(diào)節(jié)機(jī)制,與腎氣-天癸-沖任-子宮軸的調(diào)節(jié)大致相同,有助于子宮內(nèi)膜規(guī)律地脫落,使內(nèi)膜與卵子同步發(fā)育,為著床做準(zhǔn)備。人胎盤又名紫河車,其功效為補(bǔ)腎、填精、溫陽、益氣、養(yǎng)血。本研究中使用的胎盤注射液為從人胎盤中提取,并經(jīng)酸水解后的混合物。不孕之癥,病位離不開胞宮,正如《神農(nóng)本草經(jīng)》所云:“女子絕孕十年無子,乃風(fēng)寒在子宮”,故本研究采用“近部取穴”法選取“子宮穴”進(jìn)行穴位注射。由于該療法綜合了穴位刺激和高濃度藥物的雙重作用,充分體現(xiàn)了“藥穴”的最大功效[14],因此,臨床上可取得較好的療效。
3.3中醫(yī)周期療法與子宮內(nèi)膜容受性的相關(guān)性中醫(yī)周期療法是根據(jù)月經(jīng)周期陰陽氣血消長變化的不同,參照中醫(yī)“腎-天癸-沖任-胞宮軸”理論,再結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)子宮內(nèi)膜周期性變化而提出的一種療法。月經(jīng)的來潮與腎中精氣密切相關(guān),腎精充盈到一定程度,則產(chǎn)生天癸,女性月經(jīng)如期來潮,從而具備生殖功能;腎中精氣衰竭,天癸隨之耗竭,人的生殖功能亦衰退。對于月經(jīng)周期而言,月經(jīng)過后,子宮及胞脈空虛,子宮藏而不瀉,蓄養(yǎng)陰精,該期為促進(jìn)排卵打好物質(zhì)基礎(chǔ);經(jīng)前期進(jìn)入陽氣漸長的階段,為孕卵的著床時期。因此,中藥周期療法就是根據(jù)月經(jīng)周期中不同階段腎氣的充盈的特點(diǎn),以補(bǔ)腎為基礎(chǔ),周期性服藥,促進(jìn)子宮內(nèi)膜增長,使卵泡與內(nèi)膜同步發(fā)育,從而達(dá)到調(diào)整月經(jīng)周期、幫助孕卵發(fā)育及著床的目的。
3. 4結(jié)論本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),對于IVF-ET 失敗患者,經(jīng)過穴位注射聯(lián)合中藥周期療法,可提高患者著床窗口期孕酮的水平,提高A 型內(nèi)膜所占比例,降低卵巢間質(zhì)動脈阻力指數(shù)(RI)和子宮內(nèi)膜RI,增加子宮內(nèi)膜腺上皮細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞的VEGF表達(dá),最終達(dá)到明顯提高患者種植率和妊娠率,改善患者妊娠結(jié)局的目的。因此,對于反復(fù)IVF-ET失敗的患者,采用穴位注射聯(lián)合中藥周期療法,可作為患者再次移植前調(diào)整子宮內(nèi)膜容受性的有效方案,值得臨床推廣應(yīng)用。