溫通減肚水凝膠貼的制備及質(zhì)量評(píng)價(jià)

張琦， 王美君， 何喆， 陳浩

（1.江西中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心，江西南昌 330004；2.江西中醫(yī)藥大學(xué)科技學(xué)院，江西南昌 330004；3.江西中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江西南昌 330004）

腹型肥胖作為一種慢性低度炎癥，可非特異性激活免疫系統(tǒng)，引發(fā)許多慢性疾病包括高血壓、Ⅱ型糖尿病等，影響患者的身心健康[1-2]。目前，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)治療腹型肥胖主要集中在胃腸道脂酶抑制藥（奧利司他）、胰腺激素及其他影響血糖藥（如二甲雙胍）、食欲抑制藥（如西布曲明）、作用于新靶點(diǎn)的減肥藥（如瘦素）、外科手術(shù)治療、基因治療等方面，但治療存在價(jià)格昂貴、治療靶向單一、不良反應(yīng)較大、新靶點(diǎn)的口服藥較少等缺點(diǎn)。因此，從中草藥中優(yōu)選出無(wú)刺激性而有效的中藥配方，已成為開(kāi)發(fā)減肚降脂藥物的主要途徑。

中藥水凝膠貼劑是由傳統(tǒng)中藥提取物與適宜的凝膠基質(zhì)混合后涂布于背襯材料上制備而成的一種中藥新型外用給藥系統(tǒng)。溫通減肚水凝膠貼是以水溶性高分子材料為主要成分的交聯(lián)聚合物，其高濃度載藥量，藥效穩(wěn)定持久以及輔料基質(zhì)與藥物可調(diào)可控，非常適宜中藥多組方、大劑量的給藥特點(diǎn)[3]。而溫通減肚水凝膠貼的中藥組合物由火麻仁、厚樸、枳實(shí)、決明子、蘆薈、荷葉等23 味中藥組成，方中含有大量揮發(fā)油類(lèi)成分，將其貼于脂肪堆積的腹部，經(jīng)皮擴(kuò)散，可溫經(jīng)理氣，暢達(dá)經(jīng)絡(luò)，通徹表里上下，達(dá)活血化瘀、潤(rùn)腸通便之效，從而改善患者體內(nèi)的新陳代謝，加快腹部脂肪的分解，可用于治療脾虛、痰濕、氣滯所致的單純性肥胖[4]。

本實(shí)驗(yàn)采用Plackett-Burman 設(shè)計(jì)，優(yōu)選出對(duì)貼劑性能影響顯著的基質(zhì)輔料，再應(yīng)用Box-Behnken響應(yīng)曲面設(shè)計(jì)法對(duì)輔料配方進(jìn)行優(yōu)化。以黏接力性能和外觀(guān)評(píng)分為質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)溫通減肚水凝膠貼進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，并通過(guò)對(duì)比C-松油烯、莰烯、桉葉油醇、右旋檸檬烯等成分的含量，對(duì)水凝膠貼進(jìn)行體外透皮研究，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料

1.1藥物與試劑火麻仁（批號(hào)：181202）、厚樸（批號(hào)：180514）、枳實(shí)（批號(hào)：180123）、決明子（批號(hào)：181211）、蘆薈（鮮）、荷葉（批號(hào)：181219）、紫草（批號(hào)：180617）、細(xì)辛（批號(hào)：180519）、艾絨（批號(hào)：181109）、干姜（批號(hào)：181006），由江西江中中藥飲片公司提供。中和的聚丙烯酸、水凝膠樹(shù)脂粉、冰片、甘油、羧甲基纖維素鈉（CMC）（常州市潤(rùn)洋化工有限公司）；甘羥鋁、乙二胺四乙酸（EDTA）二鈉鹽、聚維酮（PVPK120）、10%酒石酸水溶液、薄荷腦、聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）、體積分?jǐn)?shù)95%乙醇、氮酮（鄭州瓊岳化工產(chǎn)品有限公司）；二甲基乙內(nèi)酰脲（DMDMH）、丙二醇、羥苯乙酯、藥用級(jí)聚丙烯酸鈉（NP-700）等水凝膠輔料（淮北匯強(qiáng)高分子材料有限公司）；無(wú)水乙醇（濟(jì)南億驍化工有限公司）；純水，實(shí)驗(yàn)室級(jí)超純水器。

1.2儀器密度計(jì)、數(shù)顯恒溫水浴鍋、電子天平（上?？婆d儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、冷凍干燥機(jī)、電爐（上海岐耀儀器設(shè)備有限公司）；Physica MCR101 型流變儀、集熱式恒溫加熱磁力攪拌器、電熱鼓風(fēng)干燥箱（蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司）；CZY-G 型初黏性測(cè)試儀、BLD-200N 型電子剝離試驗(yàn)機(jī)（東莞普賽特檢測(cè)設(shè)備有限公司）。

1.3動(dòng)物SPF級(jí)昆明雄性小鼠60只，質(zhì)量18～22 g，購(gòu)自江西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心，動(dòng)物質(zhì)量合格號(hào)：SCXK（贛）2019-0015。

2 方法與結(jié)果

2.1溫通減肚水凝膠貼的制備[4-11]將處方量的增黏劑PVPK120、酒石酸水溶液、薄荷腦、冰片加入乙醇攪拌均勻制成水相。再將一定量的青黛粉和紫草油加入乙醇中，可得脫色后紫草油。將藥粉與一定量純凈水混合，攪拌均勻并將雜質(zhì)過(guò)濾，可得藥液。將艾絨、干姜、細(xì)辛放入輕油提取器中，采用水蒸氣蒸餾法提取5～9 h，得到艾絨、干姜、細(xì)辛揮發(fā)油。在甘油中加入各10 mL的細(xì)辛、干姜、艾絨揮發(fā)油稀釋液，以及HQ841（部分中和的聚丙烯酸）、EDTA 二鈉鹽、CMC、PVPP、甘羥鋁等制成甘油相。在甘油相中，依次加入5 mL 氮酮，脫色后紫草油、藥液和水相，攪拌15 min 后可得到水凝膠半固體，將半固體轉(zhuǎn)移置無(wú)菌敷貼進(jìn)行涂布，放置于40 ℃電熱鼓風(fēng)干燥箱中干燥2 ～4 h，再移置陰涼處固化3 ～4 h，即得。

2.2溫通減肚水凝膠貼評(píng)價(jià)方法的建立[12-15]以水凝膠貼的外觀(guān)性狀，初黏力、內(nèi)聚力和剝離強(qiáng)度等黏接力為評(píng)分指標(biāo)，對(duì)凝膠基質(zhì)的綜合性能進(jìn)行評(píng)分。其綜合評(píng)分＝（外觀(guān)性狀分值＋初黏力分值＋內(nèi)聚力分值＋剝離強(qiáng)度分值）/4，各指標(biāo)的檢測(cè)方法分別如下：

2. 2. 1 初黏力測(cè)試 用斜坡滾球法測(cè)定3 個(gè)試樣。將傾斜板調(diào)至15°，用消毒棉球清潔板面和鋼球，膠帶固定貼劑試品兩端。將鋼球放入儀器中，打開(kāi)開(kāi)關(guān)，測(cè)試鋼球是否在凝膠面上停留。取3片貼劑安排試驗(yàn)，若鋼球被全部或其中2片貼劑粘住，便將其號(hào)碼確定為該試品的初黏力。計(jì)算方法：初黏力分值=10×Mi/Mmax（Mi為所測(cè)初黏力的最小值，Mmax為最大值）。

2.2.2 內(nèi)聚力測(cè)試 通過(guò)測(cè)試凝膠基質(zhì)的交聯(lián)體系的穩(wěn)定度及其黏基力的強(qiáng)度，可確定凝膠貼的內(nèi)聚力大小。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)之前，先用酒精清潔試驗(yàn)板，然后將凝膠貼劑緊密貼于板上，并用重壓輥來(lái)回滾壓3次去除氣泡，將試驗(yàn)板豎直放置，在貼劑末端掛上250 g的砝碼，并記錄脫離時(shí)間。每次取3份凝膠貼進(jìn)行試驗(yàn)，計(jì)算平均脫離時(shí)間作為試驗(yàn)結(jié)果，以Tmax為滿(mǎn)分，其余按（Ti/Tmax）× 100計(jì)算分值（Ti為所測(cè)內(nèi)聚力的最小值，Tmax為最大值），滿(mǎn)分為100。

2.2.3 剝離強(qiáng)度測(cè)試 取3 份試樣進(jìn)行試驗(yàn)，采用180°剝離強(qiáng)度試驗(yàn)法測(cè)定[9]。將凝膠貼的黏性面與試驗(yàn)板黏接，并用重壓輥捻除氣泡，然后使試驗(yàn)板向左移動(dòng)到試驗(yàn)機(jī)的固定端。供試品的另一端空白貼180°對(duì)折夾持在固定端，最后試驗(yàn)板向右移動(dòng)，并以（300±10）mm/min 的速度將貼劑從試驗(yàn)板上勻速剝離，記錄下試驗(yàn)機(jī)顯示的力值，以上操作重復(fù)3次，計(jì)算方法：初黏力分值=10×Ni/Nmax（Ni為所測(cè)剝離強(qiáng)度最小值，Nmax為最大值）。

2.2.4 外觀(guān)性狀評(píng)分 外觀(guān)性狀評(píng)分指標(biāo)包括膏體光澤、污染性、無(wú)紡布的滲出度、皮膚親和力、氣味，每項(xiàng)占20 分，總計(jì)100 分。將每份試品的5項(xiàng)指標(biāo)得分相加即外觀(guān)性狀得分。

2.3 Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)

2.3.1 實(shí)驗(yàn)因素及水平的篩選 對(duì)凝膠貼劑的基質(zhì)輔料：PVPP（A）、酒石酸（B）、甘油（C）、HQ841（D）、CMC（E）和甘羥鋁（F）安排實(shí)驗(yàn)。篩選出對(duì)凝膠貼劑的綜合性能影響較大的因素，每個(gè)因素取最高、最低2 個(gè)水平，共12 組實(shí)驗(yàn)，響應(yīng)值為綜合評(píng)分，篩選結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3.2 Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析 按照表1進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，按“2.2”項(xiàng)評(píng)價(jià)方法計(jì)算綜合分值。用Design-Expert 8.0 進(jìn)行F檢驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。模型P值為0.031 2＜0.05，回歸模型有顯著性。因此基質(zhì)輔料對(duì)凝膠貼劑綜合性能的影響，從大到小排列為PVPP、CMC、酒石酸、甘油、甘羥鋁、HQ841，PVPP、CMC、酒石酸3個(gè)因素影響較顯著。

表1 溫通減肚水凝膠貼制備的Plackett-Burman實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 1 Plackett-Burman experimental design and results for preparation of Wentong Jiandu Hydrogel Patch

表2 溫通減肚水凝膠貼制備的Plackett-Burman方差分析Table 2 Plackett-Burman design using analysis of variance for preparation of Wentong Jiandu Hydrogel Patch

表3 溫通減肚水凝膠貼制備的響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案與實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 3 Design and results of response surface experiment for preparation of Wentong Jiandu Hydrogel Patch

表4 溫通減肚水凝膠貼制備的二次回歸F檢驗(yàn)Table 4 Quadratic regression F test for preparation of Wentong Jiandu Hydrogel Patch

2.4 Box-Behnken響應(yīng)曲面法實(shí)驗(yàn)

2.4.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)[16-17]根據(jù)“2.3”項(xiàng)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果，篩選出影響水凝膠貼性能的主要輔料為PVPP、酒石酸、CMC。自變量為PVPP 用量（A）、酒石酸用量（B）、CMC 用量（C），凝膠貼劑的外觀(guān)性狀分值（Y1）、初黏力分值（Y2）、內(nèi)聚力分值（Y3）、剝離強(qiáng)度分值（Y4）的綜合評(píng)分（Y）為響應(yīng)值進(jìn)行Box-Behnken實(shí)驗(yàn)，試驗(yàn)因素與工藝參數(shù)的設(shè)計(jì)及結(jié)果見(jiàn)表3。

2.4.2 模型擬合及F檢驗(yàn) 對(duì)表3 中的數(shù)據(jù)進(jìn)行模型擬合和F檢驗(yàn)，計(jì)算出的模型方程為Y=77.20-6.62A+2.00B-0.87C+5.75AB-2AC-6.75BC+10.15A2-1.60B2-2.85C2。R2＝0.886 4，表明預(yù)測(cè)結(jié)果與試驗(yàn)較吻合，可進(jìn)一步測(cè)定和分析貼劑的綜合性能。由表4 分析結(jié)果可知，模型P＝0.003 1＜0.05，模型顯著且與實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合，并且模型的失擬項(xiàng)P＝0.273 3＞0.05，差異并不顯著，說(shuō)明該二次多元回歸擬合方程可綜合預(yù)測(cè)此實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。各因素對(duì)水凝膠貼性能的影響次序?yàn)镻VPP＞CMC＞酒石酸，其中PVPP含量的影響最顯著。

2.4.3 響應(yīng)面優(yōu)化與預(yù)測(cè) 根據(jù)表3，繪制響應(yīng)曲面圖和二維等高線(xiàn)圖。圖1-b 的曲線(xiàn)較陡，說(shuō)明PVPP、CMC 對(duì)綜合性能的影響最明顯，與F檢驗(yàn)結(jié)果一致。等高線(xiàn)圖的形狀可反映出各因素之間的聯(lián)系，其中心點(diǎn)代表交互作用最強(qiáng)的位置。由等高線(xiàn)圖可以看出，AC與AB之間交互效應(yīng)顯著。以綜合評(píng)分最高的各輔料參數(shù)水平為優(yōu)化目標(biāo)，得出最佳配方為A＝50.78，B＝20.75，C＝3.28，即PVPP 120 50.78 g、酒石酸20.75 g、CMC 3.28 g。

圖1 PVPP、酒石酸和CMC用量對(duì)溫通減肚水凝膠貼劑性能影響的響應(yīng)面圖和等高線(xiàn)圖Figure 1 Response surface plots and contour maps for the effects of PVPP，tartaric acid and CMC dosage on the properties of gel patches

2. 4. 4 驗(yàn)證試驗(yàn) 根據(jù)基質(zhì)輔料最佳處方制備3 份水凝膠貼劑，按“2.2”項(xiàng)評(píng)價(jià)體系，得出各項(xiàng)性能的綜合分值。結(jié)果可看出，以最優(yōu)處方制備的水凝膠貼膏體光澤、無(wú)紡布的滲出度小、皮膚親和力強(qiáng)、氣味芳香、可反復(fù)揭貼且無(wú)污染物殘留，驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 溫通減肚水凝膠貼制備的響應(yīng)曲面設(shè)計(jì)法的驗(yàn)證Table 5 Verification of response surface design method for preparation of Wentong Jiandu Hydrogel Patch

2.4.5 溫通減肚水凝膠貼載藥量的考察[18]本研究在優(yōu)選出的輔料處方基礎(chǔ)上，參照“2.2”項(xiàng)，對(duì)凝膠貼劑的最大載藥量進(jìn)行了綜合測(cè)定（見(jiàn)表6）。由表6可知，載藥濃度的高低會(huì)對(duì)貼劑的綜合評(píng)分產(chǎn)生影響，當(dāng)貼劑載藥濃度逐漸增高時(shí)，初黏力、內(nèi)聚力都有所下降，且貼劑較硬、皮膚殘留量增多、氣味不佳。當(dāng)貼劑載藥濃度較低時(shí)，各項(xiàng)分值無(wú)顯著改變，但是不能充分發(fā)揮藥效。當(dāng)貼劑載藥量為12 g 時(shí)，其各項(xiàng)指標(biāo)的綜合評(píng)分最高，因此12 g為最佳載藥量。

表6 溫通減肚水凝膠貼載藥量的考察Table 6 Investigation of drug loading on Wentong Jiandu Hydrogel Patch

2.5溫通減肚水凝膠貼的性能研究

2.5.1 水凝膠黏彈性能 增黏劑可以增加貼劑基質(zhì)的黏附力，提高基質(zhì)內(nèi)聚力，減少皮膚黏附后的膏體殘留。本實(shí)驗(yàn)采用的增黏劑——PVPK120具有優(yōu)良的生物相溶性、穩(wěn)定性和多種有機(jī)、無(wú)機(jī)化合物復(fù)合的能力，與貼劑內(nèi)其他成分穩(wěn)定溶合。采用流變儀測(cè)定不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)（6%、8%、10%）增黏劑基質(zhì)材料的黏彈性參數(shù)，研究凝膠貼劑的內(nèi)在特性，從而測(cè)試出增黏劑的最佳含量。測(cè)試4個(gè)試樣，提前打開(kāi)水浴、空氣壓縮機(jī)、流變儀主機(jī)和電腦相關(guān)軟件，進(jìn)行初始化調(diào)整及設(shè)置溫度和測(cè)試參數(shù)。裝上P50 轉(zhuǎn)子，進(jìn)行“零差距”調(diào)節(jié)，加熱到指定溫度。裝樣并清除多余樣品，開(kāi)始測(cè)試。自動(dòng)保存好數(shù)據(jù)曲線(xiàn)，升高馬達(dá)，摘下轉(zhuǎn)子，清洗轉(zhuǎn)子和測(cè)試臺(tái)，以上操作重復(fù)4 次。最終將4 組數(shù)據(jù)整理在同一個(gè)曲線(xiàn)圖（見(jiàn)圖2）上保存。

G’表示基質(zhì)材料發(fā)生彈性變形的應(yīng)力，為彈性模量；G’’反映材料基質(zhì)的黏性大小，為黏性模量；Strainγ 表示振蕩實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)變大小，Pa 為線(xiàn)性黏彈區(qū)。由圖2可看出，每條不同的增黏劑體系都表現(xiàn)為G’>G’’，說(shuō)明不同的增黏劑體系均呈現(xiàn)固體性質(zhì)的特征。6%體系和10%體系的彈性模量和黏性模量都比8%體系小，因此，表明黏性過(guò)大或過(guò)小會(huì)影響載藥狀態(tài)和基質(zhì)的黏彈性?？瞻左w系（不載藥，添加8%增黏劑）與8%增黏劑體系的彈性模量基本一致，但8%增黏劑體系的黏性模量比空白體系大，說(shuō)明載藥之后會(huì)影響基質(zhì)的黏性。應(yīng)變逐漸提高，各體系的模量隨之降低，說(shuō)明應(yīng)變?cè)酱?，各體系的黏彈性可能越差。因此，選擇8%增黏劑體系，凝膠體系的載藥狀態(tài)最佳，結(jié)構(gòu)最穩(wěn)定。

圖2 不同含量增黏劑貼劑的黏彈性參數(shù)變化圖Figure 2 Variation of viscoelastic parameters of the Patch with different contents of tackifier

2.5.2 水凝膠增黏劑含量測(cè)試[18]按照“2.2”項(xiàng)，對(duì)不同含量增黏劑的水凝膠貼劑進(jìn)行性能測(cè)試。由表7可知，添加的增黏劑越多，水凝膠貼的初黏力越大，吸附在皮膚的黏性越大，剝離強(qiáng)度也越大，皮膚相容性越差。本實(shí)驗(yàn)采用藥典中的黏附力測(cè)定法，包含黏附力在內(nèi)的綜合測(cè)試與流變學(xué)特性參數(shù)考察實(shí)驗(yàn)相結(jié)合，直觀(guān)地評(píng)價(jià)了添加增黏劑后基質(zhì)的黏附性能，并通過(guò)了解基質(zhì)的內(nèi)在結(jié)構(gòu)性能參數(shù)，全面評(píng)價(jià)了基質(zhì)的綜合性能。綜合分析，暫定含量8%的增黏劑為最佳。

表7 不同含量增黏劑的貼劑綜合性能測(cè)定Table 7 Determination of comprehensive properties of the Patch with different contents of tackifier

2.6主要成分含量測(cè)定[19-20]

2. 6. 1 色譜條件 色譜柱為AcclaimTM120 C8HPLC Columns（150 mm× 2.1 mm，2.2 μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1% 磷酸緩沖液，梯度洗脫：0～20 min，25%～50%甲醇，體積流量1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：235 nm；進(jìn)樣量：15 μL；柱溫：35 ℃。

2.6.2 配制溶液

2.6.2.1 配制對(duì)照品溶液 將適量C-松油烯、莰烯、桉葉油醇、右旋檸檬烯分別用甲醇稀釋?zhuān)渲瞥珊?.528、0.574、0.618、0.632 mg/mL 的C-松油烯、莰烯、桉葉油醇、右旋檸檬烯儲(chǔ)備液。分別將3.2、2.5、3.4、3.6 mL 的C-松油烯、莰烯、桉葉油醇、右旋檸檬烯儲(chǔ)備液用甲醇定容，即得對(duì)照品溶液。

2.6.2.2 配制樣品溶液 將2 片凝膠貼劑去掉防黏層，剪碎置于燒杯中，稱(chēng)定甲醇100 mL，靜置10 h 后，超聲處理30 min，取提取液，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取濾液作為樣品溶液進(jìn)樣測(cè)定。

2.6.2.3 空白對(duì)照溶液的制備 取凝膠貼劑空白基質(zhì)的體外透皮接收液，過(guò)0.45 μm 微孔濾膜，取濾液即得。

2.6.3 專(zhuān)屬性考察 取對(duì)照溶液、樣品溶液、空白接受液適量，按“2.6.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定各成分含量，結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果發(fā)現(xiàn)空白接受液對(duì)指標(biāo)成分的測(cè)定無(wú)干擾。

2.6.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)考察 分別用甲醇稀釋至不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的對(duì)照品溶液。取各質(zhì)量分?jǐn)?shù)的對(duì)照品溶液10 μL，按照“2.6.1”色譜條件依次進(jìn)樣，測(cè)定C-松油烯、莰烯、桉葉油醇、右旋檸檬烯的峰面積（RSD），并以各成分的進(jìn)樣量（V/μL）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算回歸方程。結(jié)果見(jiàn)表8。

圖3 對(duì)照溶液（A）、樣品溶液（B）、空白對(duì)照溶液（C）的高效液相色譜（HPLC）圖Figure 3 HPLC chromatogram for control solution（A），sample solution（B），and blank control solution（C）

表8 溫通減肚水凝膠貼4種成分的回歸方程及相關(guān)系數(shù)Table 8 Regression equations and related coefficients of 4 kinds of constitutes in Wentong Jiandu Hydrogel Patch

2.6.5 供試品溶液含量測(cè)定 將供試品溶液用甲醇稀釋20倍后，以0.45 μm濾膜濾過(guò)，取濾液，取10 μL注入高效液相色譜儀中，按“2.6.1”項(xiàng)色譜條件進(jìn)行測(cè)定。并按外標(biāo)法公式計(jì)算供試品中C-松油烯、莰烯、桉葉油醇、右旋檸檬烯的含量：含量（cx）=cr×Ax/Arm，其中cx為供試品濃度，cr為對(duì)照品濃度；Ax為供試品峰面積，Arm為對(duì)照品峰面積。結(jié)果測(cè)得供試品中C-松油烯、莰烯、桉葉油醇、右旋檸檬烯的含量分別為（1.66 ± 0.04）%、（1.92±0.02）%、（2.36±0.03）%，（1.45±0.01）%。

2. 6. 6 精密度試驗(yàn) 取樣品溶液，配制成高、中、低濃度，一日內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣6 次，日間精密度每日進(jìn)樣6 次，連續(xù)進(jìn)樣3 d，分別測(cè)定C-松油烯、莰烯、桉葉油醇、右旋檸檬烯的峰面積。結(jié)果顯示各成分的RSD均在3%以下，表明儀器精密度良好。結(jié)果見(jiàn)表9。

2.6.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 室溫放置樣品溶液，分別于0、4、8、12、24 h 取樣測(cè)定，并記錄色譜圖。結(jié)果顯示C-松油烯、莰烯、桉葉油醇、右旋檸檬烯的RSD 為1.36%、1.59%、1.76%、0.35%，表明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6.8 重復(fù)性試驗(yàn) 分別制備6 份樣品溶液，用相同的色譜條件，測(cè)定4種成分的峰面積。結(jié)果顯示RSD分別為C-松油烯1.54%、莰烯1.54%、桉葉油醇1.69%、右旋檸檬烯1.20%，表明樣品溶液制備方法的重復(fù)性良好。結(jié)果見(jiàn)表9。

表9 溫通減肚水凝膠貼含量測(cè)定方法學(xué)考察結(jié)果Table 9 Results of methodological investigation on the content dermination of Wentong Jiandu Hydrogel Patch

2.6.9 加樣回收率測(cè)定 取凝膠貼劑5 份，加入4 種待測(cè)成分適量，分別制備成高、中、低3種濃度的混合樣品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行分析并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示平均加樣回收率分別為C-松油烯100.6%、莰烯101.4%、桉葉油醇102.3%、右旋檸檬烯99.7%，表明該方法加樣回收率合格。

2.7體外透皮實(shí)驗(yàn)[21-23]

2. 7. 1 制備不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)氮酮的貼劑 按照“2.4”及“2.5”“2.6”項(xiàng)下的制備工藝，分別加入0%、1%、2%、3%、4%和5%質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氮酮，制備一批貼劑備用。

2.7.2 離體小鼠皮膚的制備 脫去小鼠腹部的毛發(fā)，24 h后將小鼠處死，剝?nèi)⊥暾母共科つw并去除皮下組織，用氯化鈉溶液清洗。將皮膚放于Franz 擴(kuò)散池結(jié)合處，皮膚外層朝上，將貼劑緊貼于皮膚外層，并固定接收池與釋放池。將氯化鈉溶液注入接收池，使液面與皮膚緊密接觸，并使氣泡消散。接收池300 r/min 恒速攪拌，水浴溫度32 ℃，分別于3、6、9、12、15、24 h各取2.0 mL接收液，并快速補(bǔ)充等量的氯化鈉溶液。將移取的氯化鈉溶液用0.45 μm 微孔濾膜過(guò)濾，并用HPLC 法檢測(cè)各成分的含量。以公式Qn＝（VnCn＋V0Cn-1）/A計(jì)算其單位面積累積滲透量（Qn），其中：Vn為接收室的體積，Cn為第n個(gè)時(shí)間點(diǎn)移取的氯化鈉溶液中的藥物質(zhì)量濃度，Cn-1為第n-1 個(gè)時(shí)間點(diǎn)移取的氯化鈉溶液中藥物質(zhì)量濃度，V0為移取的氯化鈉溶液的體積，A為滲透池的面積。以Qn-t做圖，得到4種化學(xué)成分的體外透皮曲線(xiàn)，見(jiàn)圖4。

圖4 溫通減肚水凝膠貼4種成分在不同含量氮酮下的Qn-t曲線(xiàn)Figure 4 Qn-t curves with different contents of azone for 4 constitutes in Wentong Jiandu Hydrogel Patch

將Qn對(duì)t進(jìn)行回歸，得到Qn-t模型擬合方程，見(jiàn)表10。從表10 可以看出，當(dāng)凝膠貼劑不含氮酮時(shí)，體外透皮速率（J）由大到小依次為C-松油烯3.229 μg·cm2·h-1、莰烯2.422 μg·cm2·h-1、桉葉油醇0.634 μg·cm2·h-1、右旋檸檬烯0.469 μg·cm2·h-1。與不含氮酮的對(duì)照組相比，加入一定含量氮酮的凝膠貼劑的J明顯更高，且氮酮對(duì)4種化學(xué)成分中的C-松油烯和桉葉油醇的促滲效果最明顯。促滲效果與氮酮濃度不一定都成正相關(guān)，當(dāng)達(dá)到一定濃度時(shí)，反而起到抑制作用。當(dāng)?shù)獫舛葹榇笥?%時(shí)，C-松油烯和莰烯的J均下降。當(dāng)?shù)獫舛葹?%、4%時(shí)，桉葉油醇、右旋檸檬烯的J均相差不大，因此，選擇氮酮用量為3%比較合適。

3 討論

水凝膠貼膏劑的制備過(guò)程須嚴(yán)格按照規(guī)范操作，輔料基質(zhì)的選擇和配比至關(guān)重要。本研究對(duì)溫通減肚水凝膠貼進(jìn)行制劑學(xué)研究，以水凝膠貼的黏力和外觀(guān)評(píng)價(jià)為指標(biāo)，進(jìn)行處方的優(yōu)化設(shè)計(jì)。利用Plackett-Burman 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，快速地從6 個(gè)輔料中篩選出對(duì)凝膠貼性能影響顯著的輔料，即PVPP、CMC、酒石酸。Box-Behnken 響應(yīng)面法可以找到響應(yīng)值與各因子間的定量規(guī)律，計(jì)算出各因子的最佳工藝參數(shù)并進(jìn)行組合，通過(guò)實(shí)驗(yàn)可以得到輔料的最佳配比為PVPP120 50.78 g、酒石酸20.75 g、CMC 3.28 g。制備過(guò)程中攪拌速度和時(shí)間、濃縮溫度和時(shí)間對(duì)水凝膠貼的性能也有一定的影響，還需進(jìn)一步的研究。

促滲劑及其濃度的選擇決定了藥物實(shí)際療效的大小。氮酮可使皮膚角質(zhì)層與脂質(zhì)發(fā)生交互效應(yīng)，促進(jìn)了皮膚對(duì)藥物活性成分的吸收。體外透皮研究證明了氮酮促透效果與用量有關(guān)，含量為3%的氮酮能發(fā)揮最大促透作用。當(dāng)?shù)啃∮?%時(shí)，4 種成分的透皮速率均隨著氮酮含量的增加而增加，C-松油烯和桉葉油醇的促透效果最顯著。當(dāng)?shù)|(zhì)量分?jǐn)?shù)為大于3%時(shí)，C-松油烯和莰烯促滲速率則存在抑制現(xiàn)象，說(shuō)明藥物成分的滲透效果并不一定與促滲劑濃度成正比。此外，溫通減肚水凝膠貼中4 種有效成分在24 h 內(nèi)透皮曲線(xiàn)Qn-t線(xiàn)性良好，體外擴(kuò)散均符合零級(jí)方程，能長(zhǎng)效恒定地緩釋藥物，避免了藥物的峰谷現(xiàn)象，可以更好地針對(duì)腹部脂肪囤積型肥胖的治療。

表10 溫通減肚水凝膠貼不同含量氮酮貼劑的體外Qn-t 模型擬合方程Table 10 Fitting equations of Qn-t model of different contents of Azone patch in vitro