蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在牦牛乳研究中的應(yīng)用

馬靜，孫璐

1(青海大學(xué) 畜牧獸醫(yī)科學(xué)院，青海 西寧，810016) 2(青海高原牦牛研究中心，青海 西寧，810016)3(青海省高原放牧家畜動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，青海 西寧， 810016)

澳大利亞學(xué)者WILKINS等于1994年最早提出“蛋白質(zhì)組(proteome)”的概念，蛋白質(zhì)組學(xué)是闡明生物體基因組表達(dá)所有蛋白質(zhì)的學(xué)科[1]。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)補(bǔ)充了其他“組學(xué)”技術(shù)如基因組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)的不足，可闡明生物體蛋白質(zhì)的身份以確定特定蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能，廣泛應(yīng)用于鑒定和定量細(xì)胞、組織或生物體中的蛋白質(zhì)[2]。生物體的蛋白質(zhì)含量隨條件改變而變化，因此可采用蛋白質(zhì)組學(xué)研究不同條件下蛋白質(zhì)組成及變化規(guī)律的差異?？紤]到生物系統(tǒng)的復(fù)雜性，一般采用高效液相色譜法對(duì)蛋白質(zhì)混合物進(jìn)行分離，用質(zhì)譜來實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)組的鑒定分析[3]。蛋白質(zhì)組分析最常用的是“自下而上”的方法，即將蛋白質(zhì)水解成肽，用質(zhì)譜對(duì)肽段進(jìn)行鑒定、定性表征和相對(duì)定量分析，最后通過生物信息學(xué)手段明確蛋白的結(jié)構(gòu)和功能[4]。與高效液相色譜相比目前同位素標(biāo)記相對(duì)和絕對(duì)定量(isobaric tags for rand absolute quantification,iTRAQ)技術(shù)在蛋白組學(xué)應(yīng)用較多，iTRAQ技術(shù)是由AB Sciex公司開發(fā)的等壓標(biāo)記技術(shù)，具有高通量，高穩(wěn)定性且不受樣品性質(zhì)的限制的優(yōu)點(diǎn)，可以同時(shí)標(biāo)記8個(gè)樣品的肽，并且可以獲得有關(guān)其修飾及數(shù)量的信息[5]。iTRAQ已廣泛應(yīng)用于乳，微生物，動(dòng)物，植物蛋白質(zhì)翻譯后修飾的研究。鄧微等[6]為闡明牛初乳、牛常乳乳清蛋白的差異，利用iTRAQ 技術(shù)對(duì)兩者進(jìn)行蛋白質(zhì)組差異分析，在得到的599 種具有定量信息的乳清蛋白中，鑒定出60 種差異蛋白。孫玉雪[7]為了加深山羊乳與牛乳中的蛋白質(zhì)尤其是一些低豐度蛋白質(zhì)的了解，應(yīng)用基于iTRAQ同位素標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)山羊乳與牛乳乳清蛋白、乳脂肪球膜蛋白進(jìn)行了定量表征。iTRAQ技術(shù)在乳中廣泛應(yīng)用明晰了多種哺乳動(dòng)物的乳蛋白質(zhì)譜，不僅為犢牛、羔羊早期斷奶提供了潛在指導(dǎo)，也為初乳、常乳乳品質(zhì)的改善以及嬰幼兒奶粉和功能乳的開發(fā)提供了參考依據(jù)。

牦牛主要分布在喜馬拉雅山脈和青藏高原地區(qū)，適應(yīng)了高海拔和極端的氣候條件，牦牛乳、肉是當(dāng)?shù)厝酥饕氖澄飦碓碵8]。作為具有天然濃縮乳之稱的牦牛乳，含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖、免疫細(xì)胞和生物活性分子，可為機(jī)體提供營(yíng)養(yǎng)，并具有抗炎和抗感染的功能。在安全性上，牦牛乳特有的蛋白質(zhì)比普通牛乳蛋白的致敏性更低[9]。且牦牛乳中的總固形物(16.9%～17.9%)、蛋白質(zhì)(4.9%～5.9%)和脂肪(5.5%～7.5%)的含量均高于普通牛乳，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，易消化吸收。此外，牦牛乳脂肪酸中的共軛亞油酸(conjugated linoleic acid, CLA)較普通牛乳含量更高[10]。目前，已有實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ妥C明CLA有利于降低人體脂肪水平、血糖水平、動(dòng)脈粥樣硬化及癌癥風(fēng)險(xiǎn)，CLA能調(diào)節(jié)免疫功能，有助于糖原的重新合成并增強(qiáng)骨骼礦化作用，補(bǔ)充CLA可增加脂肪分解作用并減少脂肪酸在脂肪組織上的積累[11]。乳作為嬰兒營(yíng)養(yǎng)的首選來源，其蛋白質(zhì)和游離肽為嬰兒生長(zhǎng)提供部分必需氨基酸和非必需氨基酸，另外有充分的證據(jù)表明，隨著嬰兒生長(zhǎng)發(fā)育的成熟，母乳有助于建立嬰兒的先天性和適應(yīng)性免疫反應(yīng)[12-13]。蛋白組學(xué)技術(shù)的應(yīng)用可以明晰乳中特征蛋白質(zhì)與差異蛋白質(zhì)，為嬰幼兒配方乳粉細(xì)化和功能化配比研究提供理論依據(jù)。本文闡述了蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在牦牛乳中的應(yīng)用和牦牛乳蛋白質(zhì)的組成，為牦牛乳功能成分的進(jìn)一步研究提供理論基礎(chǔ)。

1 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)研究進(jìn)展

1.1 樣品保存

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)可以同時(shí)鑒定和檢測(cè)多個(gè)差異蛋白，是一門相對(duì)發(fā)展較快且較新的學(xué)科[14]。利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)對(duì)乳蛋白的組成進(jìn)行分析之前，首先需要明確樣品的保存方式，不同的保存方式會(huì)引起牛乳蛋白組表征結(jié)果的偏差[15]。一般牛乳的貯藏方式有兩種，一種是加入防腐劑(如溴硝酚、重鉻酸鉀等)，分析前在4～8 ℃的振蕩器上輕輕混合24 h。另一種是浸入液氮中快速冷凍，然后轉(zhuǎn)移到-80 ℃的冰箱中保存[16]。一般使用基于溴硝酚的防腐劑在檢測(cè)分析過程中會(huì)引起系統(tǒng)誤差，對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)果測(cè)定影響最大，建議該情況下使用校正因子進(jìn)行校正。

1.2 蛋白分離

1.2.1 高豐度蛋白質(zhì)分離技術(shù)

乳中的高豐度蛋白質(zhì)主要為酪蛋白(casein, CN)，主要分為α-酪蛋白(α-CN)、β-酪蛋白(β-CN)、κ-酪蛋白(κ-CN)[17]。LI等[18]為了比較不同品種水牛乳的蛋白質(zhì)含量、組成和差異，通過反相高效液相色譜測(cè)定水牛乳的蛋白質(zhì)組成。并通過二維凝膠電泳-質(zhì)譜聯(lián)用對(duì)不同品種水牛乳的蛋白質(zhì)進(jìn)行表征。二維凝膠電泳該技術(shù)將第一維的反相高效液相色譜與第二維的十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE)耦合，同時(shí)結(jié)合具有高分辨率功能與靈敏度和高質(zhì)量精度的質(zhì)譜，可更好地闡明復(fù)雜生物樣品中蛋白質(zhì)的同工型[19-20]。

1.2.2 低豐度蛋白質(zhì)分離技術(shù)

低豐度蛋白在牛乳中所占比例較少，但具有重要的生物學(xué)功能。牛乳中低豐度蛋白質(zhì)有乳清蛋白、乳脂肪球膜蛋白，乳鐵蛋白，免疫球蛋白，糖蛋白，肽激素和酶等[21]。在低豐度蛋白分離過程中，高豐度蛋白會(huì)覆蓋低豐度蛋白，并妨礙其檢測(cè)的敏感性，需提前去除高豐度蛋白質(zhì)，如何去高豐度蛋白十分重要。靳登鵬等[22]以1 月份左右的成熟乳為試驗(yàn)材料，先通過免疫親和層析和ProteoMiner 低豐度蛋白富集試劑盒2種前處理方法去除高豐度蛋白，對(duì)母乳乳清蛋白組學(xué)進(jìn)行了分析。免疫親和層析(immunoaffinity chromatograph, IAFC)是以抗原或抗體中的一方作為配基親和吸附另一方的分離方法。具有特異性目標(biāo)蛋白的抗體與惰性微株共價(jià)結(jié)合，產(chǎn)生免疫吸附活性，然后將復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物通過免疫吸附捕獲目標(biāo)蛋白質(zhì)，而其他非目標(biāo)蛋白質(zhì)則在色譜柱中被沖走[23]。此外，離心也是獲得低豐度蛋白質(zhì)的主要途徑。NISSEN等[24]在二維液相-二級(jí)質(zhì)譜聯(lián)用分析之前對(duì)乳樣進(jìn)行預(yù)分級(jí)分離，通過高速離心獲得乳清，離心可有效提高低豐度蛋白的檢測(cè)。

1.3 乳蛋白鑒定及定量

乳蛋白的鑒定及定量一般通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析完成，與酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)相比具有顯著優(yōu)勢(shì)，蛋白質(zhì)組學(xué)利用液相色譜和質(zhì)譜來分離、鑒定和表征蛋白質(zhì)，而不依賴抗體[25]。其中質(zhì)譜分析是蛋白質(zhì)研究的主要技術(shù)手段。質(zhì)譜不僅可以測(cè)量多肽的分子質(zhì)量，還可以確定氨基酸序列或連接位點(diǎn)和翻譯后修飾的類型[26]。如今對(duì)鑒定、表征和定量蛋白質(zhì)的靈敏度和準(zhǔn)確性的要求越來越高，因此各種基于質(zhì)譜的新型分析平臺(tái)和實(shí)驗(yàn)方法顯得尤為重要。

1.4 蛋白質(zhì)組學(xué)生物信息學(xué)分析方法

蛋白質(zhì)組學(xué)所包含的生物信息學(xué)分析內(nèi)容有基因本體(gene ontology，GO)分析、京都基因和基因組百科全書(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes，KEGG)分析、聚類分析、蛋白互作分析等。并結(jié)合特定的算法，根據(jù)蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)酶解物肽段的分子質(zhì)量與蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)，從而鑒定出樣品中的蛋白質(zhì)種類[27]。

2 牦牛乳蛋白質(zhì)組成及特性

2.1 牦牛乳酪蛋白組成及特性

牛乳蛋白主要包括為酪蛋白、乳清蛋白(whey protein, LA)和脂肪球膜蛋白。其中80%是酪蛋白，包括αS1-CN，αS2-CN，β-CN和κ-CN 4種。酪蛋白是由位于6號(hào)染色體上的4個(gè)基因(CSN1S1，CSN1S2，CSN2和CSN3)編碼并且編碼區(qū)突變率較高[28]。牛乳中不同類型的酪蛋白因結(jié)構(gòu)相似，能夠自行結(jié)合形成聚集體，并與膠體磷酸鈣形成膠束結(jié)構(gòu)[29]，是實(shí)現(xiàn)酪蛋白功能的關(guān)鍵。CN是鈣、磷和氨基酸的關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)來源，滿足哺乳動(dòng)物新生嬰兒的生長(zhǎng)和能量需求[30]。牛乳中CN水解生成酪蛋白磷酸鹽或肽類還可被廣泛用于食品、制藥行業(yè)[31]。CN衍生的許多肽具有不同的生理功能，被稱為“生物活性肽”，這些肽可通過體內(nèi)消化釋放，也可通過酶促水解反應(yīng)在體外釋放[32]。β-CN衍生形成短鏈的蛋白質(zhì)水解肽為阿片肽，與機(jī)體消化調(diào)節(jié)、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的攝取、免疫調(diào)節(jié)和抵抗病原菌等有關(guān)[33]。κ-CN經(jīng)胰蛋白酶水解后，生成Casopiastrin肽，它能夠阻止纖維蛋白原與血小板結(jié)合，表現(xiàn)出抗血栓活性[34]。CN磷酸肽可以形成可溶性有機(jī)磷酸酯鹽，充當(dāng)不同礦物質(zhì)(尤其是鈣)的載體，具有細(xì)胞調(diào)節(jié)作用[35]。牦牛乳為CN性乳類，其含量較奶牛乳、駱駝乳、羊乳、水牛乳、驢乳、人乳相比最高，而且牦牛乳中κ-CN, αS2-CN, β-CN、β-乳球蛋白、鈣和磷的含量顯著高于荷斯坦牛乳，也是2種乳源酸化過程中表現(xiàn)出結(jié)構(gòu)和性質(zhì)差異的原因[36-37]。牦牛乳中CN具有良好的乳化性、溶解性和熱穩(wěn)定性，適用于食品添加劑廣泛應(yīng)用于食品工業(yè)中。但是，嬰兒對(duì)CN的吸收率較低，牦牛乳CN與人乳相比含量過高不利于嬰兒的消化吸收。在中國(guó)營(yíng)養(yǎng)學(xué)會(huì)2019婦幼營(yíng)養(yǎng)學(xué)術(shù)年會(huì)中來自荷蘭瓦赫寧根大學(xué)乳品科學(xué)和技術(shù)學(xué)科教授、弗里斯蘭坎皮納大學(xué)首席科學(xué)家、維多利亞大學(xué)客座教授和國(guó)際乳品雜志主編THOM HUPPERTZ教授分享了有關(guān)CN礦化對(duì)嬰幼兒消化吸收影響的新發(fā)現(xiàn)。當(dāng)CN礦化水平較低時(shí)，其在胃內(nèi)形成較小且松軟的凝乳顆粒，而這些凝乳顆粒會(huì)比礦化水平高的CN形成的顆粒更容易被分解，而關(guān)于牦牛乳CN的礦化水平目前未見相關(guān)報(bào)道。

2.2 牦牛乳清蛋白組成及特性

LA是球形蛋白，被認(rèn)為是一種快速的蛋白質(zhì)，與CN相比，它可以快速到達(dá)空腸，水解速度較快[38]。LA包括β-乳球蛋白,α-乳白蛋白,免疫球蛋白,血清白蛋白以及乳鐵蛋白和乳過氧化物酶等，占牛乳蛋白質(zhì)的18%～20%[39]。乳清蛋白被認(rèn)為是高品質(zhì)的蛋白質(zhì)，具有吸收率較高而脂肪、乳糖和糖類含量較低的生理特點(diǎn)同時(shí)含有豐富的支鏈氨基酸和生物活性多肽，具備了有益于人體的多種保健功能[40]。通常被用作膳食蛋白質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，可以參與免疫調(diào)節(jié)、改善肌肉強(qiáng)度和身體組成，并防止心血管疾病和骨質(zhì)疏松癥。乳清蛋白中含有的氨基酸和生物活性肽，在消化分解后會(huì)迅速吸收到循環(huán)系統(tǒng)中，有益于Ⅱ型糖尿病患者餐后血糖的改善。乳清蛋白直接刺激胰腺β細(xì)胞分泌，并通過腸降血糖素效應(yīng)增加胰高血糖素樣肽1和抑胃肽的分泌，使餐后血糖發(fā)生還原從而降低Ⅱ型糖尿病患者的血糖濃度。當(dāng)乳清蛋白酶促水解時(shí)所產(chǎn)生的衍生物由于營(yíng)養(yǎng)上的氨基酸組成及低致敏性而被添加于兒童食品。含乳清蛋白的食物具有抗焦慮作用，可降低大鼠血壓，預(yù)防腹瀉等[41-43]。牦牛乳中乳清蛋白的比例與普通奶牛乳、山羊乳及水牛乳相似約為8∶2，牦牛乳清蛋白中致敏性β-乳球蛋白的含量是普通牛乳的1/5，以牦牛乳為嬰幼兒奶粉，即避免了除致敏性蛋白的過程，還降低了牦牛乳營(yíng)養(yǎng)成分的破壞，最大限度保留牦牛乳營(yíng)養(yǎng)[44]。牦牛乳低致敏性和高消化率的特征更適合嬰兒和特殊需求人群食用，是一種珍貴的乳品資源。

2.3 牦牛乳脂肪球膜蛋白組成及特性

乳脂肪球膜(milk fat globule membrane, MFGM)蛋白占乳蛋白的1%～4 %，是一個(gè)復(fù)雜的構(gòu)建體，由蛋白質(zhì)和脂質(zhì)組成的3層膜，其內(nèi)單層來源于乳腺細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，外雙層則來源于泌乳的乳腺的上皮細(xì)胞的頂膜，MFGM包括膽固醇，甘油磷脂，鞘脂和蛋白質(zhì)[45]。其中以高濃度存在的蛋白質(zhì)包括黏蛋白1、黃嘌呤氧化還原酶、酪氨酸、乳黏附素、CD 36、脂肪蛋白和脂肪酸結(jié)合蛋白[46]。乳脂肪球膜蛋白的結(jié)構(gòu)和具有生物活性的成分不僅可以在嬰兒生長(zhǎng)和免疫調(diào)節(jié)過程中提供必需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而且可以通過調(diào)節(jié)各種代謝來幫助嬰兒腸道的結(jié)構(gòu)和功能成熟。乳脂肪球膜蛋白周圍的抗菌肽和表面碳水化合物可能對(duì)腸道微生物種群的建立至關(guān)重要，與機(jī)體早期免疫和抵抗炎癥有關(guān)[47]。此外，LI等[48]通過GO富集和KEGG途徑發(fā)現(xiàn)乳脂肪球膜蛋白與胞吞作用，生熱作用，阿爾茨海默氏病，癌癥和人乳頭瘤病毒感染密切相關(guān)。乳脂肪球膜蛋白質(zhì)在牦牛乳中與牛乳、山羊乳、水牛乳、駱駝乳相比所占比例最高[49]。LUO等[50]發(fā)現(xiàn)在牦牛乳脂肪球膜內(nèi)存在不規(guī)則脂質(zhì)結(jié)構(gòu)域，而造成這一特殊脂質(zhì)結(jié)構(gòu)域的原因是高含量的鞘磷脂(sphingomyelin, SM)，高含量的SM有益于機(jī)體的新城代謝和消化系統(tǒng)健康，且牦牛乳的乳脂肪球比普通牛乳更大，在加工過程中更易于聚集，是制造黃油和酥油產(chǎn)品的理想來源[51]。牦牛乳作為獨(dú)特的、高營(yíng)養(yǎng)價(jià)值功能型保健食品，是機(jī)體生理機(jī)能調(diào)節(jié)及功能性食品開發(fā)的理想乳品資源。

3 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在牦牛乳研究中的應(yīng)用

3.1 蛋白質(zhì)組學(xué)在牦牛乳脂肪球膜中的應(yīng)用

隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在牦牛乳脂肪球膜中的廣泛應(yīng)用，其含量和結(jié)構(gòu)也逐漸清晰地呈現(xiàn)在人們面前。為研究牦牛奶脂肪球膜的組成及其蛋白的熱穩(wěn)定性，何勝華等[52]用物理方法提取分離了牦牛乳中的乳脂肪球膜蛋白質(zhì)并將洗滌前后的牦牛乳脂肪球膜進(jìn)行SDS-PAGE分析，結(jié)果顯示牦牛MFGM主要由蛋白質(zhì)(26.93%)和脂類(70.34%)兩大物質(zhì)組成，還含有少量的己糖、唾液酸和灰分，其蛋白的主要氨基酸是谷氨酸、亮氨酸、絲氨酸和賴氨酸，其中必需氨基酸占整個(gè)氨基酸的49.48%；當(dāng)溫度升高至60 ℃ 的時(shí)候發(fā)現(xiàn)牦牛乳脂肪球膜蛋白發(fā)生變化屬于熱不穩(wěn)定蛋白。JI等[53]通過相對(duì)定量和絕對(duì)定量蛋白質(zhì)組學(xué)的方法在牦牛乳和普通牛乳之間共鑒定出450多種MFGM差異蛋白，通過比較差異蛋白相對(duì)豐度，發(fā)現(xiàn)糖基化依賴性細(xì)胞黏附分子1、CD59分子和乳黏附素等蛋白質(zhì)在牦牛MFGM中的豐度要高得多(4.6～10.1倍)，比普通牛乳MFGM高得多。蛋白的生物學(xué)功能的GO富集分析結(jié)果表明，牦牛MFGM蛋白的主要分子功能與普通牛乳之間幾乎沒有差異。牦牛乳乳脂肪球膜蛋白為熱不穩(wěn)定蛋白，其結(jié)構(gòu)與組成與普通牛乳存在差異，但兩者主要的分子功能相似。目前人乳和普通牛乳的乳脂肪球膜蛋白組學(xué)被廣泛研究，但牦牛乳脂肪膜蛋白潛在的生物活性與牦牛乳脂肪球膜各組成成分與其微結(jié)構(gòu)之間的關(guān)系有待深入研究。

3.2 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在牦牛乳清蛋白中的應(yīng)用

蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在牦牛乳清蛋白中的應(yīng)用大多都集中在對(duì)于牦牛乳清蛋白熱變形機(jī)制和熱凝聚作用的研究。王立楓等[54]在2017年通過使用體積排阻色譜法檢測(cè)不同的加熱溫度和加熱時(shí)間對(duì)牦牛乳清蛋白形態(tài)及質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化的影響。結(jié)果表明，當(dāng)加熱溫度高于β-乳球蛋白的變性溫度會(huì)導(dǎo)致蛋白發(fā)生聚合，加熱溫度在牦牛乳清蛋白聚合中占據(jù)主導(dǎo)地位。YANG等[55]利用iTRAQ標(biāo)記的蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)比較牦牛初乳和常乳中乳清的蛋白質(zhì)譜。在牦牛乳清中鑒定出183種蛋白質(zhì)；初乳和常乳乳清之間有86種蛋白的表達(dá)水平顯著不同，其中血紅蛋白的表達(dá)水平在初乳乳清中顯著高于常乳乳清；許多差異表達(dá)的蛋白質(zhì)與生物學(xué)調(diào)節(jié)和對(duì)刺激的反應(yīng)有關(guān)。此外，一些研究闡述了牦牛乳清蛋白濃縮物的組成特點(diǎn)和功能性質(zhì)。白莉莉[56]分析了牦牛乳清粉和牦牛乳清蛋白濃縮物的溶解性、持水性、持油性、起泡性、乳化性和熱穩(wěn)定性等功能性質(zhì)并通過SDS-PAGE 鑒定了牦牛乳清粉和牦牛乳清蛋白濃縮物的乳清蛋白組成成分。對(duì)不同牦牛乳清蛋白的綜合鑒定，可為嬰幼兒奶粉的改良提供基礎(chǔ)信息。

3.3 蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在牦牛酪蛋白中的應(yīng)用

由于牦牛乳酪蛋白膠束的凝乳特性及CN衍生肽的多種功能，現(xiàn)如今大多研究集中在通過蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)了解牦牛乳酪蛋白膠束及其生物活性肽。宋禮等[57]研究了胰蛋白酶制備牦牛乳酪蛋白降血壓肽的最佳水解條件和分離純化工藝，通過單因素、正交實(shí)驗(yàn)，確定了最佳水解條件并通過液相色譜及質(zhì)譜檢測(cè)，得到牦牛乳酪蛋白降血壓肽的序列片段為HQGLPQEVLNENLLR、AVPYPQR和TKVIPYVR。王鵬杰[58]通過超速離心分離出牦牛乳酪蛋白膠束，用高效液相色譜測(cè)定膠束中蛋白的組成，發(fā)現(xiàn)牦牛乳酪蛋白膠束的理化性質(zhì)與荷斯坦牛乳存在較大差異，對(duì)于己經(jīng)成熟的荷斯坦牛乳的單元操作，不能直接地應(yīng)用于牦牛乳。董愛軍等[59]同樣利用高效液相色譜準(zhǔn)確分離定量了牦牛乳中的CN除α同乳白蛋白外，麥洼牦牛乳中αs-CN、β-CN、κ-CN、β-乳球蛋白、血清蛋白的含量均高于牛乳。因此牦牛乳具有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和開發(fā)利用價(jià)值。對(duì)與蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在牦牛乳酪蛋白中應(yīng)用，HPLC技術(shù)的使用廣泛，而iTRAQ 技術(shù)的應(yīng)用較為少見。iTRAQ 技術(shù)在牦牛酪蛋白中的使用可能更有利于嬰兒配方乳中主要乳蛋白的精確表征和定量。

4 展望

隨著蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在牦牛乳中的廣泛應(yīng)用，使得鑒定和表征牦牛乳中主要蛋白質(zhì)，蛋白質(zhì)衍生物及最終產(chǎn)品更加準(zhǔn)確高效。在公共安全領(lǐng)域，利用蛋白組學(xué)可以準(zhǔn)確、快速、可靠地診斷食物過敏，尤其是牛奶過敏，由此避免嚴(yán)重的過敏反應(yīng)。對(duì)于潛在的生物標(biāo)志方面，乳蛋白組學(xué)成就也十分突出。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)有助于闡釋牦牛乳蛋白各個(gè)組分的功能，為充分利用牦牛乳資源,為嬰幼兒提供理想營(yíng)養(yǎng)奶粉提供基礎(chǔ)。