保護地韭菜灰霉病生物防治試驗

石朝鵬 劉存輝 尹姍姍 孫作文*

〔1 山東省植物保護總站，山東濟南 250100；2 全國農(nóng)技推廣服務(wù)中心防治處，北京 100125；3 齊魯工業(yè)大學(xué)（山東省科學(xué)院）生態(tài)研究所，山東濟南 250103；4 沂水縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，山東沂水 276400〕

韭菜灰霉病俗稱白點病、腐爛病（茂春，2015），由半知菌亞門葡萄孢屬蔥鱗葡萄孢菌引起（何忠全 等，2012）。韭菜灰霉病是韭菜上發(fā)生普遍且為害嚴(yán)重的重要病害，保護地低溫高濕的環(huán)境條件有利于該病的發(fā)生，輕則減產(chǎn)10%～30%，重則毀棚絕收（黃福奇，2003）。檢索中國農(nóng)藥信息網(wǎng)可知，我國防治韭菜灰霉病的合法登記農(nóng)藥主要有嘧霉胺和腐霉利，規(guī)定腐霉利的安全間隔期為30 d。但是保護地韭菜單茬生長期一般為25～40 d，因此設(shè)施韭菜生產(chǎn)中一旦施用腐霉利，農(nóng)藥殘留超標(biāo)風(fēng)險極高，如山東省市場監(jiān)督管理局通告的2019 年第18 期抽檢的21 批次食品不合格情況，因韭菜腐霉利殘留超標(biāo)的就有3 批次，占14.3%。

為了在生產(chǎn)源頭解決韭菜腐霉利殘留超標(biāo)問題，研究者探索減少化學(xué)農(nóng)藥的使用或者使用生物菌劑代替化學(xué)農(nóng)藥來防治韭菜灰霉病的綠色防控技術(shù)。枯草芽孢桿菌是一種高效的生防菌劑（閆楊 等，2019），能產(chǎn)生抗生素（張桂英 等，2004；Stein，2005）、酶類（顧真榮 等，2001）、抗菌蛋白（謝棟和胡劍，1998；何紅 等，2003）等多種抗菌物質(zhì)，對茄子灰霉病（Liu et al.，2011）、番茄灰霉?。▎炭∏?等，2017；李寶慶 等，2019）、葡萄灰霉病（伏波 等，2016）、黃瓜灰霉?。ú艽耗?等，2009）等多種灰霉病有防治效果。木霉是世界公認的高效生防菌株，在植物病害的防治中發(fā)揮了重要作用（顧少華，2010）。早在1932 年，Weinding 就發(fā)現(xiàn)木霉對多種植物病原菌存在寄生作用（郭潤芳 等，2001）。經(jīng)過幾十年的研究，前人已發(fā)現(xiàn)木霉作為生防菌對蔬菜（劉任和盧兆金，2003；楊春林 等，2008；畢文慧 等，2018）、水稻（李敏 等，2009）、棉花（Sivan，1989）、水果（張富榮 等，2018）及中藥材（李瓊芳 等，2007）等多種植物病害均有防治作用。木霉可通過抗生作用、競爭作用和重寄生作用、誘導(dǎo)植物增強抵抗力等多種機制對植物病原真菌產(chǎn)生拮抗作用。木霉在代謝過程中會分泌一些抗菌物質(zhì)，如大分子的抗菌蛋白、酶類物質(zhì)和抗生素等小分子多糖物質(zhì)，在病原微生物的抑制作用中發(fā)揮主要作用（張衡宇，2011）。陳列忠等（2007）在1 株枸骨內(nèi)生真菌哈茨木霉中分離得到的單端孢霉烯化合物，對番茄早疫病和黃瓜立枯病病原菌具有體外抑制活性。哈茨木霉適應(yīng)性廣、生長和繁殖速度快，可以迅速利用營養(yǎng)和占據(jù)空間，從而抑制病原真菌的生長（惠有為 等，2003）。王莉衡等（2014）發(fā)現(xiàn)蘆薈內(nèi)生真菌哈茨木霉LH-7 能夠明顯抑制多種植物病原真菌生長及孢子萌發(fā)。哈茨木霉還可以誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗性，通過直接或間接產(chǎn)生某些化學(xué)物質(zhì)，激發(fā)植物的防衛(wèi)反應(yīng)（Ahraed et al.，2000）。馬佳等（2014）發(fā)現(xiàn)哈茨木霉SH2303 能夠防治玉米小斑病，該菌株處理的玉米葉片在接種玉米小斑病菌后36 h，體內(nèi)防御反應(yīng)酶系苯丙氨酸解氨酶（PAL）和超氧化物歧化酶（SOD）活性達到峰值。

目前國外已有商品化的木霉制劑，如美國的哈茨木霉T22（Topshield）（Harman，2000）和以色列的哈茨木霉T39（Trichodex）（Zimand & Elad，1996），可以防治由灰葡萄孢（Botrytis cinerea）引起的灰霉病、白粉病等多種葉部病害。本試驗選用枯草芽孢桿菌和木霉進行試驗，研究其對韭菜灰霉病的防治效果。鑒于木霉種類繁多，本試驗先選擇了5 種木霉為試驗對象，進行田間藥效試驗，篩選出對韭菜灰霉病防治效果最好的木霉株系，再與枯草芽孢桿菌進行協(xié)同防治試驗，調(diào)查防效，從而為使用綠色防控技術(shù)防治韭菜灰霉病提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗藥劑

參試5 種木霉（Trichodermaspp.）：深綠木霉20111、哈茨木霉C61、哈茨木霉LTR-2、哈茨木霉21990、深綠木霉23617（活體孢子≥2 億個 ·g-1），為山東省科學(xué)院生態(tài)研究所環(huán)境微生物團隊研制中試產(chǎn)品；枯草芽孢桿菌（可濕性粉劑，活芽孢1 000 億個·g-1），購于武漢科諾生物科技股份有限公司。

1.2 試驗基地基本情況

試驗在山東省沂水縣天沐農(nóng)業(yè)專業(yè)合作社大棚內(nèi)進行，篩選試驗和協(xié)同防治試驗韭菜品種均主要為漢中韭，養(yǎng)根平茬后第1 茬韭菜供應(yīng)春節(jié)市場，該茬韭菜灰霉病嚴(yán)重，故所有試驗針對該茬韭菜進行灰霉病防治。施肥、澆水及除草等農(nóng)事操作按當(dāng)?shù)厣a(chǎn)習(xí)慣進行，且所有大棚均一致。

1.3 試驗設(shè)計

1.3.1 木霉篩選試驗 試驗在簡易式冬暖大棚內(nèi)進行，共設(shè)置5 個木霉處理，每處理3 次重復(fù)，每小區(qū)面積為84 m2（12 m×7 m），采用隨機區(qū)組設(shè)計，并設(shè)置空白對照（圖1）。5 種木霉制劑均采用300 倍液，用藥量為750 g·hm-2，用水量為450 L ·hm-2，木霉制劑和水混勻后，使用智能電動噴霧器對植株和地面噴霧，盡量均勻全面。在韭菜剛出土?xí)r開始噴藥，每隔7 d 噴1 次，共噴2 次。第1 次噴藥時間為2019 年1 有3 日，第2 次噴藥時間為1 有10 日。

1.3.2 哈茨木霉21990 和枯草芽孢桿菌協(xié)同防治試驗 試驗選用4 個拱棚（高2 m，寬7 m），前一年因韭菜灰霉病暴發(fā)毀棚絕產(chǎn)，其中3 個棚為試驗棚，1 個棚為對照棚。2019 年12 有17 日韭菜扣棚當(dāng)日隨水沖施哈茨木霉21990，用量為45 kg ·hm-2，待韭菜長至5 cm左右時（2019年12有27日），采用智能電動噴粉機噴施枯草芽孢桿菌，用量為3 kg·hm-2；對照棚不做任何處理。

1.4 調(diào)查時間

1.4.1 調(diào)查時間和次數(shù) 木霉篩選試驗：分別于2019 年1 有3 日、1 有10 日和1 有17 日進行3 次病害調(diào)查。

哈茨木霉21990 和枯草芽孢桿菌協(xié)同防治試驗：2020 年1 有10 日進行第1 次病害調(diào)查，1 有17 日進行第2 次病害調(diào)查。

1.4.2 調(diào)查方法 采用5 點取樣法進行取樣，每點隨機調(diào)查3～5 株，對每株韭菜全部葉片進行調(diào)查。韭菜灰霉病病葉分級標(biāo)準(zhǔn)：0 級，無病斑；1 級，單葉片有病斑1～3 個；3 級，單葉片有病斑4～6 個；5 級，單葉片有病斑7～10 個；7 級，單葉片有病斑11～20 個，部分密集成片；9 級，單葉片有病斑密集，占葉片面積1/4 以上。按《農(nóng)藥田間藥效試驗準(zhǔn)則（一）殺菌劑防治蔬菜灰霉病》（農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所，2000）計算病情指數(shù)和防效。

1.5 計算方法

先用Microsoft Office Excel 2010軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，再用SPSS 17.0 軟件進行LSD 方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 安全性

試驗期間對各處理韭菜進行系統(tǒng)觀察，與對照相比，各處理均未出現(xiàn)明顯藥害，說明試劑用量對供試韭菜安全，無不良反應(yīng)。

2.2 木霉篩選試驗

第1 次和第2 次病害調(diào)查時，空白對照和各處理韭菜均未發(fā)生灰霉??；第3 次調(diào)查時部分韭菜發(fā)生灰霉病。調(diào)查結(jié)果如表1 所示：深綠木霉20111、哈茨木霉C61、哈茨木霉LTR-2、哈茨木霉21990 和深綠木霉23617 對韭菜灰霉病的防效 分 別 為13.62%、68.93%、64.00%、91.72% 和87.23%。其中，哈茨木霉21990 的防效最高，因此選擇哈茨木霉21990 與枯草芽孢桿菌進行協(xié)同防治試驗。

2.3 哈茨木霉21990 與枯草芽孢桿菌協(xié)同防治試驗

第1 次調(diào)查時處理棚韭菜灰霉病病情指數(shù)為0，未發(fā)生明顯病害，對照棚的病情指數(shù)為13.77（表2）。第2 次調(diào)查時，處理棚發(fā)生灰霉病，病情指數(shù)為9.71，對照棚病情指數(shù)為37.44，哈茨木霉21990與枯草芽孢桿菌協(xié)同防治，對韭菜灰霉病的防效為74.07%。

表1 木霉對韭菜灰霉病的田間防效

表2 哈茨木霉21990 與枯草芽孢桿菌協(xié)同防治試驗結(jié)果

3 討論

在木霉篩選試驗中采用噴霧方法，在韭菜生產(chǎn)棚室低矮一側(cè)實施起來比較困難，所以在哈茨木霉21990 與枯草芽孢桿菌協(xié)同防治試驗中，哈茨木霉施用方法為在韭菜扣棚當(dāng)日澆水時沖施，枯草芽孢桿菌采用智能電動噴粉機噴施，能使藥劑均勻遍布整個棚室空間，方便快捷，省工省時。

協(xié)同防治試驗棚為三膜栽培拱棚，空氣濕度極高，2019 年1 有按此栽培模式，韭菜灰霉病發(fā)生嚴(yán)重，全部毀棚絕收。2019 年12 有使用哈茨木霉21990 與枯草芽孢桿菌協(xié)同防治，對韭菜灰霉病的防效為74.07%。防治韭菜灰霉病除了使用生物菌劑外，調(diào)控環(huán)境因素也很重要，通過改善栽培條件，提高棚內(nèi)溫度，降低棚內(nèi)濕度，從而降低灰霉病發(fā)生風(fēng)險和發(fā)生程度，減輕防治壓力。

4 結(jié)論

本試驗篩選出了對韭菜灰霉病防治效果較高的哈茨木霉21990；探索出了防控韭菜灰霉病操作方便的實施方案，即“一沖一噴”，在韭菜扣棚前隨水沖施哈茨木霉21990，待韭菜長到5 cm 左右時噴施枯草芽孢桿菌，大面積田間試驗防效為74.07%。在韭菜棚室濕度較高，灰霉病發(fā)生風(fēng)險極高的條件下，獲得較高的防效，有效保證了韭菜生產(chǎn)安全，同時從源頭上有效解決因使用腐霉利防治韭菜灰霉病造成的殘留超標(biāo)問題，確保韭菜質(zhì)量安全。