不同濃度七氟醚后處理對新生大鼠缺血缺氧性腦損傷的影響

潘 峰

（浙江大學醫(yī)學院附屬婦產科醫(yī)院，浙江 杭州 310000）

新生兒缺氧缺血性腦病是由圍產期多種原因造成腦缺血、缺氧所導致的腦損傷綜合征，疾病給患兒的生命健康和生活質量造成嚴重威脅，為家庭和社會帶來巨大負擔[1]。由于傳統(tǒng)療法以及神經保護劑的臨床應用效果并不十分顯著，近年來人們已轉向對大腦內源性保護機制的研究，即缺血預處理和缺血后處理。既往研究表明，七氟醚可以明顯減輕缺血缺氧大鼠的腦損傷程度，但對有效的七氟醚后處理濃度的相關研究較少，本實驗采用不同濃度七氟醚對新生大鼠腦缺血缺氧模型進行后處理，以期望探討有效的后處理藥物濃度。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組

7 d齡SD大鼠180只，體重12～16 g之間，采用隨機數字表法，將180只新生SD大鼠隨機分為6組（n=30）：假手術組（sham組）；腦缺血缺氧組（HI組）；腦缺血缺氧+1%七氟醚后處理組（HI+1%sev組）；腦缺血缺氧+1.5%七氟醚后處理組（HI+1.5%sev組）；腦缺血缺氧+2%七氟醚后處理組（HI+2%sev組）；腦缺血缺氧+3%七氟醚后處理組（HI+3%sev組）。

1.2 模型制備

參考Balduini等的方法建立改良的HIBI（缺血缺氧性腦損傷）模型：將7d齡新生SD大鼠麻醉后，對其頸部皮膚采用0.2%碘伏棉球進行消毒處理，順著頸部正中線縱向切開，在解剖顯微鏡下將左側頸總動脈分離出來，用7-0絲線對左側頸總動脈進行兩次永久結扎；手術操作時間在5分鐘之內。待大鼠清醒后，將其放回母鼠所在籠中繼續(xù)喂哺2h，然后將實驗大鼠置于自制的半密閉箱內，在自制的半密閉箱底墊適量的鈉石灰，主要是為了將箱內的CO2和水蒸氣吸收，半密閉箱出氣口連接Ohmeda氣體監(jiān)護儀，以監(jiān)測半密閉箱中氣體的濃度，用2 L/min流量的8%氧氣與92%氮氣的濕化混合氣體，經進氣孔向箱內持續(xù)輸入低氧混合氣體兩小時。假手術組則不進行缺氧處理，僅呼吸室溫下空氣，模型組實驗動物低氧處理兩小時后，置于室溫下15 min，讓其自然恢復，然后放回到母鼠所在籠中繼續(xù)喂哺，假手術組不進行左側頸總動脈結扎，不吸入低氧的混合濕化氣體，其他操作同手術組。

1.3 七氟醚后處理

不同濃度七氟醚后處理：除sham組與HI組外，將其余四組實驗動物分別于腦缺血缺氧后即刻置于自制半密封箱內，分別吸入1%、1.5%、2%、3%七氟醚（由30%氧氣和70%氮氣的濕化混合氣體輸送）30分鐘，七氟醚后處理結束后，將實驗大鼠置于自然環(huán)境下恢復至完全清醒后歸于母鼠所在籠中繼續(xù)喂哺。

1.4 檢測指標

（1）大鼠死亡率、體重。

（2）大鼠左右腦半球質量及質量比。

（3）計數大鼠左右腦正常神經元數量及計算密度比。

1.5 統(tǒng)計學方法

研究得到的數據經由SPSS 17.0軟件實施統(tǒng)計分析，使用“±s”的形式對計量數據加以表示，利用單因素方差分析開展各組間的數據對比，樣本均數對比行LSD檢驗；死亡率對比行Z檢驗；同組左右大腦半球對比行t檢驗；若P＜0.05，代表數據間存在統(tǒng)計學差異。

2 結 果

2.1 缺血缺氧后28天，記錄各組大鼠死亡率及體重

各組新生大鼠體重變化無統(tǒng)計學差異（P＞0.05），除Sham組死亡率為0，其余各組死亡率無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。

2.2 左/右大腦半球質量比

于缺血缺氧后28 d分別稱取各組大鼠左、右側大腦半球質量，計算左右大腦半球質量比。見表1。

2.3 測神經元密度比

與s h a m組相比，其余各組神經元計數明顯減少（P＜0.05）；與HI組相比，HI+1.5%sev組、HI+2%sev組對腦損傷有明顯的保護作用，正常神經元數量明顯增多，神經元密度比值明顯增高（P＜0.05）；與HI組相比，HI+1sev組、HI+3%sev組對腦損傷無明確的保護作用，差別沒有統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1 各組大鼠左右大腦半球質量及比值（n=10，±s）

表1 各組大鼠左右大腦半球質量及比值（n=10，±s）

注：*P＜0.05與sham組相比，△P＜0.05與HI組比較，#P＜0.05與HI+1%sev組相比

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3 討 論

新生兒缺氧缺血性腦病是圍生期多種因素造成缺血、缺氧而導致的新生兒腦損傷，水腫、軟化、壞死和出血是腦組織發(fā)生的主要病變，新生7 d大鼠行左側頸總動脈結扎后，暴露于8%O2-92%N22 h，是最常用于模擬新生兒缺血缺氧性腦損傷動物模型[2，3]。大鼠腦發(fā)育的一個關鍵期為新生7 d，這一時期神經元通過數量增加和突觸發(fā)生進行發(fā)育。有研究指出，這一時期神經元的數量越多，腦損傷的程度越嚴重，而且在海馬區(qū)的神經元數量對大鼠學習、記憶功能有著直接的決定作用，且影響是長期存在的。因此，本實驗通過計算海馬CA1區(qū)和扣帶回皮層的左右側正常神經元密度比值，并測定左右側腦的質量比，以反映腦損傷程度。本實驗結果顯示，缺血缺氧性腦損傷新生大鼠，在腦缺血缺氧后即刻吸入1.5%和2%七氟醚30 min后，左側大腦半球質量及左右側大腦半球質量比較缺血缺氧組明顯升高，海馬CA1區(qū)和后扣帶回皮層左右側正常神經元密度比明顯升高，表明七氟醚后處理減輕了新生大鼠缺血缺氧性腦損傷，對腦損傷的新生大鼠具有腦保護作用。