復方金沙利膽顆粒的制備工藝及質量控制研究

易愛玲，杜光，易嫚，張璞， 陳煒

根據流行病學調查結果顯示，全球人群中存在膽道系統(tǒng)結石者有5%～15%，其中1%～3%的患者每年因其而引起急性膽囊等膽道系統(tǒng)感染[1-2]。復方金沙利膽顆粒是由武漢市黃陂區(qū)人民醫(yī)院與華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院合作，以產學研的方式，研制開發(fā)的用于膽石癥、膽囊炎等疾病治療的中藥復方新藥。復方金沙利膽顆粒的處方來源于黃陂區(qū)人民醫(yī)院臨床經驗方，主要由金錢草、海金沙、白芍、大黃、黃芩、柴胡等中藥材組成，具有疏肝理氣、清熱利濕、利膽排石及抗炎等功效，且療效確切[3-4]。本實驗參考有關文獻[5-9]以水為提取方法考察白芍的提取工藝，綜合考慮采用水提取的方法對藥材進行提取。本研究采用正交實驗法優(yōu)選復方金沙利膽顆粒的制備工藝條件，確定了科學合理的制劑提取及成型工藝,以增加藥材的利用率，從而確定合理的提取工藝，保障其安全有效。

1 實驗儀器、試藥與方法

1.1 實驗儀器 美國waters高效液相色譜儀、486UV檢測儀、Dionex C18色譜柱。Adventurer電子分析天平(萬分之一)、DHG-9071A電熱鼓風干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司)、DK-S26電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設備有限公司)、SK250LHC超聲波清洗儀(上?？茖С晝x器)。

1.2 藥材及試劑 藥材均購自華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院住院部中藥房,經中藥師杜光主任鑒定符合《中國藥典》2015年版要求。

試劑中輔料(乳糖、可溶性淀粉、微晶纖維素、糊精)均為藥用級、其他試劑均為分析純。

1.3 實驗方法

1.3.1 芍藥苷的含量測定[10]

1.3.1.1 色譜條件：色譜柱：We Leh Utimate XB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:乙腈—水(17∶83);流速：1.0 ml/min;柱溫：20 ℃; 檢測波長230 nm;進樣量：20 μl。

1.3.1.2 提取工藝研究：吸水率按處方量1/10稱取藥材，加適量水使完全浸泡，每隔30 min觀察1次，直至藥材全部浸透，濾過，稱重，計算藥材吸水率為205% (RSD=1.40%n=3)，故在第1次煎煮時水量應多2倍，以補足藥材吸水量。

1.3.1.3 正交實驗設計[11-13]：采用正交實驗法對提取工藝進行優(yōu)選，以芍藥苷含量和浸膏得率為評價指標，選擇加水量、煎煮時間、煎煮次數為考察的3個因素，每因素設置3個水平，以L9(34)正交表進行正交實驗，因素水平及實驗安排見表1。

表1 正交實驗因素水平及實驗安排

1.3.1.4 芍藥苷含量及浸膏得率驗證實驗：按處方量稱取藥材204 g，共3份，根據優(yōu)化得到的工藝條件進行提取，所得芍藥苷平均含量為29.18 mg，浸膏平均得率為35.28%，表明優(yōu)化得到的提取工藝穩(wěn)定可行。見表2。

表2 芍藥苷含量及浸膏得率驗證實驗結果

1.3.1.5 賦形劑的篩選：對于顆粒劑，目前國內常見的賦形劑有可溶性淀粉、乳糖、糊精、微晶纖維素等。經預實驗確定稠膏密度為1.15 g/ml時，稠膏體積與賦形劑質量比為1∶2時，除乳糖外其他賦形劑均可制成符合藥典規(guī)定的顆粒劑，當乳糖添加至1∶5時可制成符合藥典規(guī)定的顆粒劑。本實驗以成型率、休止角、堆密度、溶化性、溶化率和吸濕性為考察指標，對可溶性淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素4種賦形劑進行綜合性評價。

1.3.2 測定方法：將藥材按優(yōu)化提取工藝提取，過濾除雜濃縮至密度為1.14～1.16 g/ml(常溫20 ℃)，分4份，每份10 ml，分別加入可溶性淀粉20 g、糊精20 g、乳糖50 g、微晶纖維素20 g，用85%乙醇制成軟材，以14目篩制顆粒，70 ℃干燥烘干，整粒。

1.3.2.1 成型率測定：按中國藥典2010年版一部(附錄IC)規(guī)定，采用雙篩分法測定成型率。取供試品依次過1號篩和5號篩，收集通過1號篩而不能通過5號篩的顆粒，稱重，計算成型率。成型率=過篩后顆粒質量/過篩前顆粒質量×100%。

1.3.2.2 休止角測定：采用固定漏斗法計算休止角。休止角檢測顆粒的流動性，休止角越小，表明顆粒流動性越好。

1.3.2.3 堆密度測定：將顆粒放入干燥的量筒中，輕輕振動量筒，堆密度=M/V。堆密度越大，表示粉體中含有的空隙越小。

1.3.2.4 溶化性測定：在干燥至恒重的燒杯中加入精密稱取的樣品顆粒5 g，加沸水100 ml，攪拌5 min，觀察溶化性，溶液備用。

1.3.2.5 溶化率測定：取1.3.2.4項備用藥液，攪拌使其均勻，在干燥至恒重的10 ml離心管中加入精密稱定的備用藥液10 ml，以3 000 r/min離心15 min，棄上清液，于80 ℃溫度下將殘渣烘干至恒重，精密稱定，計算溶化率。

1.3.2.6 吸濕性測定：精密稱取烘干樣品顆粒2 g，放入干燥至恒重的稱量瓶內，置裝有飽和氯化鈉溶液的玻璃干燥器內，恒重48 h后稱重，計算吸濕率。

2 結 果

2.1 賦形劑的考察結果 除乳糖外各輔料制成的顆粒均不易溶于水，溶化性不佳，但乳糖制粒粘結情況嚴重，輔料用量大導致顆粒劑藥品含量降低，并且價格較高。而糊精粘性較小，穩(wěn)定性好，流動性強，溶化性較可溶性淀粉和微晶纖維素好，并且對于顆粒劑，糊精成型性好。因此綜合降低成本和達到制粒要求考慮，選擇糊精和乳糖組成的混合輔料作為賦形劑。不同賦形劑的各項指標比較結果見表3。

表3 不同賦形劑的各項指標比較

2.2 成型工藝優(yōu)選

2.2.1 糊精與乳糖配比優(yōu)選：將藥材按優(yōu)化提取工藝提取，過濾除雜濃縮至密度為1.14～1.16 g/ml(常溫20 ℃)，分為3份，每份5 ml，精密稱取糊精和乳糖，按不同比例等量遞增法混勻，用85%乙醇作為稀釋劑，制成軟材，以14目篩制顆粒，70 ℃干燥烘干，整粒，按“1.3.2測定方法”測定其成型率、吸濕率和溶化性。結果示當糊精與乳糖比例為1.5∶1時，各項考察指標最好。輔料配比及測定結果見表4。

表4 輔料配比及測定比較

2.2.2 正交設計成型工藝優(yōu)化方案：采用正交實驗法對提取工藝進行優(yōu)選，以成型率和吸濕率作為評價指標，選擇稠膏密度、稠膏和輔料配比、乙醇濃度作為考察的3個因素，每因素3個水平，以L9(33)正交表進行正交實驗。按優(yōu)化提取工藝提取，過濾、除雜、濃縮，按正交實驗設計表安排制成顆粒劑，測定其成型率和吸濕率，并按照[總評分=(成型率/最大成型率)×0.5+(最小吸濕率/吸濕率)×0.5]公式進行綜合評分，通過方差分析評價出最優(yōu)成型工藝。因素水平及實驗安排見表5。

表5 成型工藝優(yōu)化正交實驗因素水平及實驗安排

2.2.2.1 成型率與吸濕率測定：(1)成型率：取供試品依次過1號篩和4號篩，收集通過1號篩而不能通過4號篩的顆粒，稱重，計算成型率。成型率=過篩后顆粒質量/過篩前顆粒質量×100%。(2)吸濕性：精密稱取烘干樣品顆粒2 g，放入干燥至恒重的稱量瓶內，置裝有飽和氯化鈉溶液的玻璃干燥器內，恒重48 h后稱重，計算吸濕率。見表6。

表6 正交實驗方案分析

2.2.2.2 正交實驗方差分析：各因素主次順序為B>A>C，根據測定結果優(yōu)先出最佳成型工藝為A2B2C2，即稠膏常溫下濃縮密度為1.19～1.21 g/ml，取85%乙醇作為稀釋劑，稠膏與輔料配比為1∶2.5。見表7。

表7 總評分的方差分析

2.2.3 不同烘干溫度對顆粒劑的影響：顆粒劑烘干溫度為60～80 ℃，按上述最佳成型工藝制備顆粒劑，分別在60 ℃、70 ℃、80 ℃烘干，考察顆粒劑成型率及溶化性。結果顯示最佳烘干溫度為80 ℃。見表8。

表8 不同烘干溫度對顆粒劑的影響

2.2.4 矯味劑：本制劑味微苦，為改善口感，更易于患者服用，選擇在制劑中加入一定量的矯味劑掩蓋其苦感。阿斯巴甜甜度為蔗糖的180倍，安全性明確，甜味純正，廣泛用于各類飲料、食品及中藥制劑中。本制劑選用阿斯巴甜作為矯味劑，當阿斯巴甜用量為0.6%(稠膏∶糊精∶乳糖∶阿斯巴甜=1 ml ∶1.5 g ∶1 g ∶0.006 g)時口感最佳 ，故確定矯味劑阿斯巴甜用量為0.6%。

2.3 成型工藝驗證

2.3.1 最優(yōu)成型工藝：總結上述測定結果可知，最優(yōu)成型工藝為：提取工藝下得到的藥液濃縮為常溫下(25 ℃)密度為1.19～1.21 g/ml的稠膏，加入0.6%阿斯巴甜，備用。取糊精與乳糖比例為1.5∶1，等量遞增法混合均勻，制成混合輔料。以85%的乙醇作為稀釋劑，稠膏與輔料配比1∶2.5制軟材，過篩，80 ℃烘干，整粒。

2.3.2 驗證實驗：按上述最優(yōu)成型工藝制3批顆粒劑，分別測定成型率、休止角、堆密度、溶化率、吸濕率。結果顯示優(yōu)化得到的成型工藝穩(wěn)定可行。見表9。

表9 驗證試驗結果

2.4 臨界相對濕度 為考察在生產時是否會受到環(huán)境濕度的影響，以及對顆粒劑的包裝材料和貯藏條件提出相應的要求，對顆粒劑的相對臨界濕度進行考察。

2.4.1 實驗方法：將按照優(yōu)化后的成型工藝制成的顆粒劑干燥至恒重，精密稱取約2 g放置于干燥至恒重的稱量瓶中，稱量瓶瓶口打開放置于裝有6種不同的飽和鹽溶液的玻璃干燥器內，在20 ℃恒溫環(huán)境下放置96 h，取出稱量瓶，計算吸濕率。見表10。

表10 顆粒劑吸濕率(20 ℃)

2.4.2 實驗結果：以相對濕度為橫坐標(X)，以吸濕率為縱坐標(Y)，繪制吸濕平衡曲線，顯示在不同相對濕度環(huán)境下，顆粒的吸濕率不同，曲線拐點的橫坐標為臨界相對濕度(CRH)。復方金沙利膽顆粒的臨界相對濕度為58%，即在生產本制劑時，環(huán)境濕度需要控制在58%以內，貯藏應密閉、防潮，減少水分對于藥物性質和穩(wěn)定性的影響，從而保證產品的質量。見圖1。

圖1 吸濕平衡曲線

3 討 論

復方金沙利膽顆粒中最佳提取工藝除大黃外等處方藥材加水煎煮，第1次煎煮時水量應多加2倍量水，以補足藥材吸水量，浸泡30 min，提取2次，每次煎煮1 h。大黃在第2次提取50 min時放入。合并提取液，濾過，濃縮為常溫下(25 ℃)密度為1.19～1.21 g/ml的稠膏，加入0.6%阿斯巴甜，備用。取糊精與乳糖比例為1.5∶1，等量遞增法混合均勻，制成混合輔料。故從節(jié)約時間，操作方便的角度考慮[14-15]選擇以85%的乙醇作為稀釋劑，稠膏與輔料配比為1∶2.5混合，濕法制粒，80 ℃烘干，整粒即得。本研究以復方金沙利膽顆粒中有效成分芍藥苷含量為研究對象，通過正交實驗的方法優(yōu)選最佳提取制備工藝，經驗證表明該制備工藝提取率高，穩(wěn)定性好，操作簡單，容易實現產業(yè)化。制備的顆粒成型率高、吸濕率低、有效成分保留率基本穩(wěn)定、溶化性符合規(guī)定，為其制劑的生產提供了可靠的依據，值得推廣應用。