TB-DNA、T-SPOT.TB和TB-Ab平行檢測在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用價值

何家花，余成強△，李步榮，劉曉良

1.陜西省商洛市中心醫(yī)院醫(yī)學檢驗科，陜西商洛 726000；2.西安交通大學第二附屬醫(yī)院檢驗科，陜西西安 710004

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌復合群引起的一類慢性感染性疾病，在全球感染性疾病中病死率居首位[1]。肺結(jié)核是指發(fā)生在肺組織、氣管、支氣管和胸膜的結(jié)核，包含了肺實質(zhì)上的結(jié)核、氣管支氣管結(jié)核和結(jié)核性胸膜炎[2]。2017年全球新發(fā)結(jié)核病患者約1 000萬，估算中國的結(jié)核病新發(fā)患者數(shù)近88.9萬，估算結(jié)核病發(fā)病率為63/10萬[3]。而控制結(jié)核病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)就是傳染源的控制，因此結(jié)核病患者的早發(fā)現(xiàn)、早診斷顯得尤為重要。目前我國結(jié)核病患者的發(fā)現(xiàn)率較低[4]，尋求更準確的方法以更快的速度早期診斷結(jié)核病患者對結(jié)核病的防治具有重要意義。本文采用結(jié)核分枝桿菌脫氧核糖核酸(TB-DNA)檢測、結(jié)核感染T細胞酶聯(lián)免疫斑點試驗(T-SPOT.TB)和結(jié)核抗體(TB-Ab)檢測這3種方法對疑似肺結(jié)核患者進行檢測，以此來評價這3種方法在肺結(jié)核診斷中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2019年1—12月在商洛某三甲醫(yī)院門診和住院就診的245例疑似結(jié)核病患者的一般資料，根據(jù)《WS 196-2017結(jié)核病分類》及《WS 288-2017肺結(jié)核診斷》分為試驗組和對照組。試驗組(結(jié)核病患者)175例，其中男128例，女47例；年齡15～90歲，平均(48.95±19.10)歲；病原學確證病例53例，臨床確證病例122例。對照組(非結(jié)核病患者)70例，其中男52例，女18例；年齡15～87歲，平均(53.28±17.80)歲。兩組間性別、年齡差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1TB-DNA檢測 運用達安核酸提取儀提取痰液、肺泡灌洗液、胸腔積液中的結(jié)核分枝桿菌DNA，然后用廈門至善熒光定量PCR儀檢測，所用擴增試劑均是儀器配套試劑，所有操作按照試劑盒操作說明書進行。

1.2.2T-SPOT.TB 患者空腹采集靜脈全血4 mL于肝素抗凝管中顛倒混勻，采用英國Oxford Immunote公司生產(chǎn)的結(jié)核感染T細胞檢測試劑檢測，按說明書進行操作。

1.2.3TB-Ab檢測 使用艾康醫(yī)藥(杭州)有限公司提供的結(jié)核分枝桿菌IgG抗體檢測試劑盒(膠體金法)檢測，所有操作依據(jù)說明書進行。

2 結(jié) 果

2.1兩組患者3種方法檢測的陽性率比較 試驗組中T-SPOT.TB的陽性率(89.14%)最高，對照組中TB-Ab陽性率(25.71%)最高，試驗組的TB-DNA、T-SPOT.TB、TB-Ab陽性率均高于對照組，且差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者3種方法檢測的陽性率比較[n(%)]

2.23種方法診斷肺結(jié)核的效能 運用ROC曲線分析這3種方法診斷肺結(jié)核的診斷效能，見圖1。T-SPOT.TB 抗原A、T-SPOT.TB 抗原B、TB-DNA、TB-Ab的ROC曲線下面積分別是0.908、0.881、0.677、0.649，可見T-SPOT.TB的診斷效能最高。3種方法診斷肺結(jié)核的效能比較見表2。TB-DNA的特異度(97.14%)高于其他兩種方法；T-SPOT.TB的靈敏度(89.14%)高于其他兩種方法。T-SPOT.TB診斷結(jié)果的一致性高于TB-DNA和TB-Ab，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，TB-DNA和TB-Ab診斷結(jié)果的一致性差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。這3種方法聯(lián)合檢測的靈敏度最高，T-SPOT.TB聯(lián)合TB-DNA在肺結(jié)核診斷中特異度和一致性最高。

圖1 T-SPOT.TB、TB-Ab、TB-DNA診斷肺結(jié)核的ROC曲線

表2 3種方法診斷肺結(jié)核的效能評價(%)

3 討 論

目前，我國診斷結(jié)核病常用的技術(shù)主要有細菌學診斷、分子生物學診斷、病理學診斷、影像學診斷以及血清學診斷[5]。以結(jié)核菌培養(yǎng)為主的細菌學診斷技術(shù)是診斷的金標準，但由于耗時長、靈敏度低的特點而易造成誤診、誤治，因此T-SPOT.TB、分子生物學PCR方法等新方法應(yīng)運而生。

抗原A、抗原B是結(jié)核分枝桿菌的兩種特異性抗原，在體內(nèi)外反應(yīng)的發(fā)生率和程度上存在顯著差異[6]。在本研究中，T-SPOT.TB兩種抗原診斷肺結(jié)核的特異度和靈敏度各不相同，這與這兩種抗原在體內(nèi)外的發(fā)生率和程度是否有關(guān)尚需進一步研究。但是顯然這兩種特異抗原的相互補充作用明顯增強了T-SPOT.TB在肺結(jié)核診斷中的特異度。

2018年實施的結(jié)核病診斷“新標準”增加了TB-DNA檢測作為結(jié)核病診斷新指標[7]。本研究顯示TB-DNA診斷肺結(jié)核的特異度為97.14%，具有較低的誤診率，是補充病原學診斷的較好方法，但是它的靈敏度只有38.2%，與劉喆等[8]、王宗義等[9]研究結(jié)果相比明顯偏低，意味著有更高的漏診率，這可能與標本留取質(zhì)量有關(guān)，合格的痰標本可提高肺結(jié)核檢出陽性率[10]，故需嚴格執(zhí)行痰標本留取規(guī)范；也可能與試驗組病例構(gòu)成有關(guān)，本研究試驗組臨床確診病例較多。周前選等[11]研究顯示，菌陰肺結(jié)核組TB-DNA陽性檢出率(25.41%)明顯低于菌陽肺結(jié)核組(54.84%)，也證實了這一點。故菌陰疑似結(jié)核病患者除了采用TB-DNA檢查外，還需進行其他輔助檢查以免漏診。

本研究顯示，T-SPOT.TB、TB-DNA、TB-Ab在肺結(jié)核患者的陽性率明顯高于非結(jié)核病患者，并且根據(jù)ROC曲線下面積可見這3種方法在肺結(jié)核診斷中均有一定價值，T-SPOT.TB的診斷效能高于TB-DNA和TB-Ab，這和國內(nèi)外研究基本一致[12-14]。T-SPOT.TB在肺結(jié)核診斷中的一致性可達86.53%，明顯比TB-DNA、TB-Ab高，與邵吉寶等[15]研究報道大致相同。TB-DNA、TB-Ab在診斷肺結(jié)核中雖然靈敏度和特異度不同，但是診斷一致性差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

本研究顯示，在肺結(jié)核診斷中方法的聯(lián)合檢測可以明顯提高靈敏度，但是相應(yīng)降低了特異度。T-SPOT.TB聯(lián)合TB-DNA、TB-Ab中的任何一個或兩個雖然都提高了靈敏度，但是在診斷結(jié)果一致性上的差異并無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。故在肺結(jié)核診斷中檢驗項目的聯(lián)合檢測不僅要考慮特異度和靈敏度的差異，還需考慮組合項目對診斷結(jié)果準確度的價值。

綜上所述，在T-SPOT.TB、TB-DNA、TB-Ab 3種方法中，T-SPOT.TB具有高靈敏度、高特異度和高診斷符合率，在肺結(jié)核輔助診斷中具有較高價值，在結(jié)核病早診斷、早治療中發(fā)揮重要作用，同時在需聯(lián)合檢測時要科學選擇組合項目。