假蒟提取物對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)的實(shí)驗(yàn)研究

黃永毅 凌秀孟 蒙玥 陳敬怡 李波 梁綠萍

【摘要】 目的 觀察假蒟提取物對(duì)小鼠胃排空和小腸推進(jìn)的影響，并分析假蒟對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的影響機(jī)制。

方法 采用碳末推進(jìn)試驗(yàn)法，以正常對(duì)照組為對(duì)照模型，觀察假蒟水提液高、中、低劑量（2 g/kg、1 g/kg、0.5 g/kg）對(duì)小鼠胃排空和小腸推進(jìn)運(yùn)動(dòng)的影響。以阿托品、腎上腺素分別建立小鼠的胃腸運(yùn)動(dòng)抑制模型，以新斯的明建立胃腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)模型，用胃殘留率和小腸推進(jìn)率為指標(biāo)，觀察不同劑量的假蒟水提液對(duì)小鼠胃腸道作用的影響。

結(jié)果 與正常對(duì)照組相比，假蒟水提液的中、高劑量組對(duì)小鼠的胃排空有促進(jìn)作用（P<0.05或0.01），高劑量組對(duì)小鼠的小腸推進(jìn)率有促進(jìn)作用（P<0.01）;假蒟的高劑量組可拮抗阿托品所致小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)抑制，顯著降低小鼠胃殘留率，促進(jìn)小鼠小腸的推進(jìn)率（P<0.05）;假蒟中、高劑量組與腎上腺素模型組比較，胃殘留率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或0.01），小腸推進(jìn)率無顯著變化（P>0.05）;假蒟中、高劑量組可拮抗新斯的明導(dǎo)致的胃腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)，顯著提高小鼠的胃殘留率，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），小腸推進(jìn)率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或0.01）。

結(jié)論 假蒟水提液對(duì)小鼠的胃腸運(yùn)動(dòng)有一定促進(jìn)作用，在胃腸病理狀態(tài)下呈現(xiàn)出雙向調(diào)節(jié)的效果，其機(jī)制可能與膽堿能系統(tǒng)及腎上腺素能系統(tǒng)有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 假蒟;水提液;胃排空;小腸推進(jìn)

中圖分類號(hào)：R285.5 ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A ? DOI：10.3969/j.issn.1003-1383.2021.12.002

【Abstract】 Objective To observe the effects of extracts of Piper sarmentosum Roxb on gastric emptying and small intestinal propulsion in mice， and to analyze the mechanism of Piper sarmentosum Roxb extracts on gastrointestinal motility.

Methods Carbon powder propulsion test was used， normal control group was used as control model， and the effects of high， medium and low doses （2 g/kg， 1 g/kg and 0.5 g/kg） of water extracts of Piper sarmentosum Roxb on gastric emptying and small intestinal propulsion in mice were observed. Atropine and epinephrine were respectively used to establish the inhibition model of gastrointestinal motility in mice， and neostigmine was used to establish the hypermotility model of gastrointestinal motility. The effects of different doses of water extracts of Piper sarmentosum Roxb ?on gastrointestinal tracts in mice were observed by the indexes of gastric residue rate and intestinal propulsion rate.

Results Compared with the normal control group， the medium and high doses of Piper sarmentosum Roxb groups had promoting effect on gastric emptying of mice （P<0.05 or 0.01）， and the high dose group had significant promoting effect on the small intestine propulsion rate of mice（P<0.01）. The high dose group could antagonize the inhibition of gastrointestinal motility in mice caused by atropine， significantly reduce the rate of gastric residue in mice， and promote the propulsion rate of the small intestine of mice （P<0.05）; compared with the adrenaline model group， medium and high dose groups showed increased gastric residual rate， and the difference was statistically significant （P<0.05 or 0.01）， but the small intestine propulsion rate did not change significantly （P>0.05）; the medium and high dose groups could antagonize gastrointestinal hypermotility induced by neostigmine， the gastrointestinal hypermotility significantly increased in mice， and the difference was statistically significant （P<0.01）， the small intestine propulsion rate decreased， and the difference was statistically significant （P<0.05 or 0.01）.

Conclusion The water extract of Piper sarmentosum Roxb can promote gastrointestinal motility in mice， and exhibit a two-way regulation effect under gastrointestinal pathology， and the mechanism of which may be related to cholinergic system and adrenergic system.

【Key words】 Piper sarmentosum Roxb;water extract; gastric emptying; small intestinal propulsion

假蒟（Piper sarmentosum Roxb），又名蛤蒟、假蔞、假著、蓽茇子、巴巖香，為胡椒科假蒟屬植物，主產(chǎn)于廣西、福建、廣東等省區(qū)。具有祛風(fēng)利濕、溫中散寒、止痛消腫等功效，常用于治療腎炎水腫、胃腹寒痛等疾病[1～2]。袁宏球等[3]報(bào)道，在假蒟葉中分離到的化合物對(duì)桿狀細(xì)菌和埃希氏菌屬有抑制作用，說明此類物質(zhì)有潛在的抗菌價(jià)值，以及假蒟葉甲醇提取物中含有抑制真菌的活性次生物質(zhì)。周斯儀等[4]報(bào)道，假蒟甲醇提取液有抗氧化活性，其中的黃酮、生物堿有抗菌活性，假蒟全株水提液有降低糖尿病大鼠血糖水平等作用。假蒟主要含糖、多糖、有機(jī)酸、苷類、揮發(fā)油、生物堿、黃酮、內(nèi)酯、植物甾醇、香豆素、三萜類、油脂等成分[5]。目前未見有假蒟（莖葉部分）提取物對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)影響的相關(guān)報(bào)道，為進(jìn)一步研究假蒟的藥效，本實(shí)驗(yàn)以小鼠為研究對(duì)象，初步探討假蒟水提液對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)功能的影響，旨在為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 藥品與試劑

假蒟（廣西壯族自治區(qū)百色市市售藥材），經(jīng)右江民族醫(yī)學(xué)院民族醫(yī)學(xué)教研室覃道光教授鑒定為假蒟莖葉;活性碳末（西隴化工股份有限公司，批號(hào)：170114）;羧甲基纖維素鈉（成都市新都區(qū)木蘭鎮(zhèn)工業(yè)開發(fā)區(qū)，批號(hào)：20170727）;鹽酸阿托品注射液（河南潤弘制藥有限股份公司，批號(hào)：1806302）;鹽酸腎上腺素注射液[遠(yuǎn)大醫(yī)藥（中國）有限公司，批號(hào)：170609];甲氧氯普胺（山西云鵬制藥有限公司，批號(hào)：F170301）。新斯的明注射液（上海信誼金朱藥業(yè)公司，批號(hào)：1710503）

1.1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

普通昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SYXK（桂）2017-0004。

1.1.3 儀器

電子天平（余姚市紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號(hào)：JM-B1003）

1.1.4 假蒟水提液的制備

稱取假蒟干燥莖葉200 g，加入5倍量水（1000 mL）常溫浸泡1 h，大火煮沸后慢火煎煮1 h，過濾留下濾液，取濾渣再加水1000 mL煮沸后慢火煎煮1 h，過濾棄濾渣，合并兩次濾液用紗布過濾，隔水蒸發(fā)濃縮，定容為2 g/mL，冰箱冷藏，用時(shí)恢復(fù)至室溫。

1.1.5 碳末混懸液的制備

稱取活性碳末5 g、羧甲基纖維素鈉2 g溶于100 mL雙蒸水中，攪拌均勻配制成碳末混懸液[6]，冰箱冷藏，用時(shí)恢復(fù)至室溫。

1.2 方法

1.2.1 假蒟水提液對(duì)正常小鼠胃排空和小腸推進(jìn)的影響

小鼠隨機(jī)分成5個(gè)組：正常對(duì)照組，陽性藥（胃復(fù)安）組，假蒟水提液高、中、低劑量（2 g/kg、1 g/kg、0.5 g/kg）組，每組10只。各組都按10 mL/kg的容積灌胃給藥，正常對(duì)照組灌胃等容積的蒸餾水，陽性藥組每次灌胃甲氧氯普胺（胃復(fù)安）2.5 mg/kg，假蒟高、中、低劑量組每次分別灌胃假蒟水提液2 g/kg、1 g/kg、0.5 g/kg，各組每天灌胃2次，連續(xù)4 d。末次給藥前禁食不禁水12小時(shí)，給藥30 min后，每只小鼠灌胃5%碳末混懸液0.25 mL/10 g，20 min后用頸椎脫臼法處死小鼠。迅速剪開腹腔，取出胃，稱胃全重和胃凈重。計(jì)算胃內(nèi)容物殘留率（%）=[（胃全重-胃凈重）/碳末混懸液質(zhì)量]×100%[7]。以胃內(nèi)容物殘留率為指標(biāo)評(píng)價(jià)胃排空速度。同時(shí)取出小腸幽門至回盲部分離腸系膜，自然平鋪于桌面上，自由伸展后測(cè)量小腸總長度及碳末混懸液在小腸內(nèi)推進(jìn)的距離，用于計(jì)算小腸推進(jìn)率，推進(jìn)率（%）=小腸內(nèi)碳末推進(jìn)的距離（cm）/小腸總長度（cm）×100%[7]。

1.2.2 對(duì)阿托品致小鼠胃排空及小腸推進(jìn)抑制的影響[8]

小鼠隨機(jī)分成5個(gè)組：正常對(duì)照組、阿托品模型組、陽性藥組、假蒟中劑量組、假蒟高劑量組，每組10只。各組都按10 mL/kg容積灌胃給藥，正常對(duì)照組和阿托品模型組灌胃等容積的蒸餾水，假蒟中、高劑量組給藥劑量同1.2.1;陽性藥組每次灌胃甲氧氯普胺（胃復(fù)安）2.5 mg/kg，各組都是每天灌胃2次，連續(xù)給藥4 d，末次給藥前禁食不禁水12小時(shí)，給藥30 min后，正常對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水，其余各組均給予腹腔注射硫酸阿托品0.3 mg/kg，15 min后，每只小鼠均灌以5%碳末懸液0.25 mL/10 g，20 min后用頸椎脫臼法處死小鼠，取胃和小腸，計(jì)算胃排空率和小腸推進(jìn)率。方法同1.2.1。

1.2.3 對(duì)腎上腺素致小鼠胃排空及小腸推進(jìn)抑制的影響[9]

小鼠隨機(jī)分成5個(gè)組：正常對(duì)照組、腎上腺素模型組、陽性藥組、假蒟中劑量組、假蒟高劑量組，每組10只。各組均按10 mL/kg容積灌胃給藥，正常對(duì)照組和腎上腺素模型組灌胃等容積蒸餾水，假蒟中、高劑量組給藥劑量同1.2.1;陽性藥組每次灌胃甲氧氯普胺（胃復(fù)安）2.5 mg/kg，各組都是每天灌胃2次，連續(xù)給藥4 d，末次給藥前禁食不禁水12小時(shí)，給藥30 min后，正常對(duì)照組腹腔注射等量生理鹽水，其余各組均腹腔注射鹽酸腎上腺素注射液0.3 mg/kg，15 min后，每只小鼠均灌以5%碳末懸液0.25 mL/10 g，20 min后用頸椎脫臼法處死小鼠，取胃和小腸，計(jì)算胃排空率和小腸推進(jìn)率。方法同1.2.1。

1.2.4 對(duì)新斯的明致小鼠胃排空及小腸推進(jìn)亢進(jìn)的影響[9]

小鼠隨機(jī)分成5個(gè)組：正常對(duì)照組、新斯的明模型組、陽性（阿托品）組、假蒟中劑量組、假蒟高劑量組，每組10只。各組均按10 mL/kg容積灌胃給藥，正常對(duì)照組、新斯的明模型組、陽性藥（阿托品）組均灌胃等容積蒸餾水，假蒟中、高劑量組給藥劑量同1.2.1，各組都是每天灌胃2次，連續(xù)給藥4 d，末次給藥前禁食不禁水12小時(shí)，正常對(duì)照組灌胃等容積蒸餾水，其余各組均灌胃新斯的明2 mg/kg，陽性藥（阿托品）組還同步給予腹腔注射阿托品0.3 mg/kg，15 min后，每只小鼠均灌以5%碳末懸液0.25 mL/10 g，20 min后用頸椎脫臼法處死小鼠，取胃和小腸，計(jì)算胃排空率和小腸推進(jìn)率。方法同1.2.1。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計(jì)量資料呈正態(tài)分布，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，用單因素方差分析，組間兩兩比較用LSD法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗(yàn)。

2 結(jié) ?果

2.1 假蒟水提液對(duì)正常小鼠胃排空和小腸推進(jìn)的影響

假蒟水提液中、高劑量組和胃復(fù)安組的小鼠胃殘留率均低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或0.01），提示假蒟中、高劑量組對(duì)小鼠胃排空有促進(jìn)作用;胃復(fù)安組和假蒟高劑量組的小腸推進(jìn)率高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或0.01）;提示假蒟高劑量組對(duì)小鼠小腸推進(jìn)有促進(jìn)作用;低劑量組小鼠的胃殘留率和小腸推進(jìn)率與正常對(duì)照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

2.2 對(duì)阿托品致小鼠胃排空及小腸推進(jìn)抑制的影響

阿托品模型組小鼠的胃殘留率高于正常對(duì)照組，小腸推進(jìn)率低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示阿托品抑制小鼠胃腸運(yùn)動(dòng);與阿托品模型組比較，假蒟中劑量組有降低胃殘留率和增加小腸推進(jìn)率的趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;假蒟高劑量組的胃殘留率降低，小腸推進(jìn)率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），提示假蒟高劑量可拮抗阿托品導(dǎo)致的胃排空及小腸推進(jìn)抑制;胃復(fù)安可拮抗阿托品所致的胃腸運(yùn)動(dòng)抑制（P<0.01）。見表2。

2.3 對(duì)腎上腺素致小鼠胃排空及小腸推進(jìn)抑制的影響

腎上腺素模型組小鼠胃殘留率高于正常對(duì)照組，小腸推進(jìn)率低于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示腎上腺素有抑制小鼠的胃腸運(yùn)動(dòng)的作用;與腎上腺素模型組比較，假蒟中、高劑量組小鼠胃殘留率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或0.01），小腸推進(jìn)率變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示假蒟中、高劑量在某些胃腸功能障礙狀態(tài)下，胃排空抑制情況會(huì)加重，但對(duì)小腸推進(jìn)無明顯改變，胃復(fù)安可明顯拮抗腎上腺素所致的胃排空和小腸推進(jìn)抑制（P<0.01）。見表3。

2.4 對(duì)新斯的明致小鼠胃排空及小腸推進(jìn)亢進(jìn)的影響

新斯的明模型組小鼠胃殘留率低于正常對(duì)照組，小腸推進(jìn)率高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），提示新斯的明對(duì)小鼠的胃腸運(yùn)動(dòng)起到亢進(jìn)作用。與新斯的明模型組比較，假蒟中、高劑量組小鼠胃殘留率增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），小腸推進(jìn)率下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05或0.01），提示假蒟中、高劑量可拮抗新斯的明所致胃排空和小腸推進(jìn)亢進(jìn)。阿托品可明顯拮抗新斯的明所致胃腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)（P<0.01）。見表4。

3 討 ?論

假蒟在壯藥中用于治療腹脹、腸炎腹瀉、腹痛、食欲不振[10]，本實(shí)驗(yàn)在前期研究中觀察到一定濃度的假蒟水提液對(duì)正常小鼠的胃排空和小腸推進(jìn)均有促進(jìn)作用。在此基礎(chǔ)上，我們采用阿托品和腎上腺素建立小鼠的胃排空和小腸推進(jìn)抑制模型，新斯的明建立胃腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)模型，進(jìn)一步研究假蒟對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)病理模型狀態(tài)下的影響。

胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)主要由交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)系統(tǒng)以及存在腸壁內(nèi)的腸神經(jīng)系統(tǒng)來控制，目前研究顯示，胃腸道上存在膽堿能的M受體以及腎上腺素的α受體、β受體[11]。神經(jīng)系統(tǒng)中的各種遞質(zhì)與相應(yīng)受體結(jié)合后，表現(xiàn)出不同的生理作用[12]。

阿托品為非選擇性M膽堿能受體阻斷劑，通過阻斷乙酰膽堿跟M受體結(jié)合的作用，導(dǎo)致乙酰膽堿無法發(fā)揮興奮胃腸道平滑肌的作用，使平滑肌松弛，從而形成胃腸蠕動(dòng)的障礙，其效果為降低蠕動(dòng)的頻率及幅度，最終表現(xiàn)出抑制平滑肌的收縮[13～14]。腎上腺素是由腎上腺髓質(zhì)分泌的一類激素，也是α和β受體激動(dòng)藥，其通過興奮α和β受體，致使平滑肌收縮力降低[15]。新斯的明是抗膽堿酯酶藥，通過抑制膽堿酯酶的活性，表現(xiàn)出擬膽堿效果，有興奮胃腸道平滑肌，加強(qiáng)胃收縮和促進(jìn)腸蠕動(dòng)的作用[9]。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，阿托品和腎上腺素均能夠顯著提高小鼠胃內(nèi)容物的殘留率及降低小腸推進(jìn)率，新斯的明能夠顯著降低胃殘留率和提高小腸推進(jìn)率，說明實(shí)驗(yàn)小鼠使用造模藥后的癥狀符合用藥后的臨床表現(xiàn)。假蒟高劑量組能夠促進(jìn)小鼠的胃排空和小腸推進(jìn)，可改善阿托品對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)抑制作用，同時(shí)又抑制新斯的明致胃腸運(yùn)動(dòng)的亢進(jìn)作用，說明假蒟有可能是通過影響膽堿能受體的途徑來發(fā)揮促胃腸運(yùn)動(dòng)作用的。在腎上腺素組的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，假蒟中、高劑量組對(duì)腎上腺素抑制小鼠的胃排空有協(xié)同作用。這提示了在腎上腺素能系統(tǒng)引起的胃腸道功能障礙情況下服用假蒟可能會(huì)加重病情，要謹(jǐn)慎使用。在不同的病理狀態(tài)下，假蒟不同劑量引起不同的作用。我們推測(cè)假蒟對(duì)小鼠胃腸道的調(diào)節(jié)作用有可能與M膽堿能受體和腎上腺素能系統(tǒng)有關(guān)，也可能由于假蒟藥物的成分復(fù)雜，胃腸機(jī)能狀態(tài)存在差異，對(duì)草藥不同成分引起不同效果。

綜上所述，假蒟水提液對(duì)小鼠的胃腸運(yùn)動(dòng)有一定促進(jìn)作用，在胃腸病理狀態(tài)下呈現(xiàn)出雙向調(diào)節(jié)的效果，其機(jī)制可能跟膽堿能系統(tǒng)及腎上腺素能系統(tǒng)有關(guān)。

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（收稿日期：2021-08-30 修回日期：2021-11-13）

（編輯：潘明志）