拉曼光譜技術(shù)與神經(jīng)退行性疾病研究進(jìn)展

周珂軒 梁昊岳 孔曉冬

1天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院保健醫(yī)療部（老年醫(yī)學(xué)科），天津市老年病學(xué)研究所（天津 300052）；2中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液病醫(yī)院（中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院血液學(xué)研究所），實(shí)驗(yàn)血液學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國家血液系統(tǒng)疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心（天津 300020）

神經(jīng)退行性疾病是老年人認(rèn)知功能障礙的常見病因，最常見的神經(jīng)退行性疾病包括阿爾茨海默?。ˋlzheimer′s disease，AD）、帕金森?。≒arkinson′s disease，PD）、多系統(tǒng)硬化（multiple Sclerosis，MS）、亨廷頓舞蹈?。℉untington′s disease，HD）和肌萎縮側(cè)索硬化癥（amyotrophic lateral sclerosis，ALS）等。上述疾病都有不同的流行病學(xué)、臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室和神經(jīng)影像特征、神經(jīng)病理學(xué)和治療方法，其臨床表現(xiàn)多種多樣，主要表現(xiàn)為進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙［1-2］。近年來，盡管神經(jīng)退行性疾病的診斷方式日益增多，但隨著拉曼光譜技術(shù)的發(fā)展及其在多個(gè)領(lǐng)域中的廣泛應(yīng)用，其在神經(jīng)醫(yī)學(xué)診斷中的價(jià)值也日益提高［3］。

1 神經(jīng)退行性疾病診斷現(xiàn)狀

神經(jīng)退行性疾病發(fā)病的分子機(jī)制還未完全明了，是導(dǎo)致老年人群疾病和殘疾的主要原因，造成重大的社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)［4］。神經(jīng)退行性疾病的特征是與疾病相關(guān)的靶神經(jīng)元的物理衰退，并最終失去周圍的非特異性神經(jīng)細(xì)胞支持［5］。目前臨床診斷方式多樣，常用的手段如顱腦MRI、CT、PETCT、病理診斷、腦脊液生物標(biāo)記物技術(shù)等，以上檢查手段或操作復(fù)雜，或費(fèi)用昂貴，對(duì)神經(jīng)退行性疾病診斷敏感度和特異度不高，診斷效果并不理想，亟待發(fā)現(xiàn)一種簡(jiǎn)便快捷的診療手段［6］。

2 拉曼光譜技術(shù)

拉曼光譜技術(shù)（Raman spectroscopy，RS）即拉曼散射產(chǎn)生的光譜，是1928 年由印度物理學(xué)家拉曼發(fā)現(xiàn)的［7］。即一定頻率的光照射到物質(zhì)上發(fā)生彈性散射和非彈性散射，彈性散射的散射光是與激發(fā)光波長(zhǎng)相同的成分，非彈性散射的散射光有比激發(fā)光波長(zhǎng)長(zhǎng)的和短的成分，統(tǒng)稱為拉曼效應(yīng)。由于拉曼譜線的數(shù)目、位移的大小、譜線的長(zhǎng)度直接與試樣分子振動(dòng)或轉(zhuǎn)動(dòng)能級(jí)有關(guān)，因此，這項(xiàng)技術(shù)可探測(cè)與樣品中化學(xué)鍵相關(guān)的分子振動(dòng)或旋轉(zhuǎn)，以獲得關(guān)于分子結(jié)構(gòu)、組成和分子間相互作用的信息［8］。作為一種研究分析結(jié)構(gòu)的工具，拉曼光譜從物質(zhì)分子非彈性散射產(chǎn)生的分子振動(dòng)光譜識(shí)別和區(qū)分不同的化學(xué)結(jié)構(gòu)及官能團(tuán)，具有快速、非破壞性及微量精細(xì)分辨能力、標(biāo)本無需處理、不用試劑和高度自動(dòng)化、相對(duì)低的成本提供實(shí)時(shí)分子信息和高分辨率成像等優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)展迅速，如癌癥的早期診斷及結(jié)石病、白內(nèi)障、動(dòng)脈硬化等疾病的診斷研究，已獲得很多突破性進(jìn)展［9-10］。拉曼光譜技術(shù)只需簡(jiǎn)單的試樣準(zhǔn)備，可在近乎生理?xiàng)l件下保留醫(yī)學(xué)試樣，并可用于活體試樣，能為醫(yī)療過程中實(shí)時(shí)診斷提供可能性，這是其他技術(shù)所不具備的。現(xiàn)已發(fā)展表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)（surface enhanced Raman spectroscopy，SERS）、尖端增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)（tip enhanced Raman spectroscopy，TERS）、傅里葉變換拉曼光譜技術(shù)（fourier transform Raman spectroscopy，F(xiàn)T-Raman）、共振拉曼散射（resonance Raman scattering，RRS）、相干反斯托克斯拉曼散射（coherent anti-stokes Raman scattering，CARS）等，廣泛用于生命科學(xué)研究［11-12］。

3 拉曼光譜技術(shù)在神經(jīng)退行性疾病中的作用

拉曼光譜技術(shù)可以提供快速、無標(biāo)記、實(shí)時(shí)的信息，這對(duì)于研究神經(jīng)環(huán)境是至關(guān)重要的［10］。研究表明，傅里葉變換紅外光譜可對(duì)各種樣品類型進(jìn)行極快速、高通量和非破壞性的分析，它能夠以最少的樣品制備同時(shí)分析碳水化合物、氨基酸、脂肪酸、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸和多糖，因此被認(rèn)為是一種有價(jià)值的代謝指紋分析工具，目前是診斷癡呆的一種有用且準(zhǔn)確的方法［13］。研究發(fā)現(xiàn)，利用尖端增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)作為納米尺度上具有空間分辨率的表面敏感工具，可以檢測(cè)由相同多肽序列和不同毒性水平形成的兩個(gè)樣品中單個(gè)蛋白質(zhì)低聚物的空間結(jié)構(gòu)和表面特征［14］。已有研究表明，淀粉樣前體蛋白（amyloid precursor protein，APP）與Aβ42或Aβ40 與Aβ42 的比值可能是AD 有研究前景的生物標(biāo)志物，表面增強(qiáng)拉曼散射技術(shù)利用膠體合成銀納米探針，可高靈敏性、選擇性和多重檢測(cè)血液中的Aβ40 和Aβ42，并且不受水分干擾、非光漂白的特點(diǎn)使其成為檢測(cè)各種神經(jīng)退行性疾病生物標(biāo)志物的重要研究工具［15］。

與既往神經(jīng)退行性疾病診斷方法相比，拉曼光譜技術(shù)具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。這些優(yōu)勢(shì)主要在于拉曼光譜可以提供特定和敏感的生物標(biāo)志物指紋，無需貴重基材或抗體標(biāo)記、非侵入性、并且?guī)缀醪恍枰獦悠分苽?，有可能在便攜式、低成本的平臺(tái)上進(jìn)行快速、多路分析。同時(shí)，在不損害標(biāo)本的情況下，可以確定正常和疾病組織的特征，了解神經(jīng)退行性疾病發(fā)生和發(fā)展的潛在機(jī)制，并進(jìn)行治療效果觀察?；谶@些優(yōu)勢(shì)，拉曼光譜與多變量分析等方法相結(jié)合，可以很好地進(jìn)行細(xì)胞或分子水平的檢測(cè)，為低成本快速鑒別神經(jīng)退行性疾病提供了新的方法和思路。

但是，這項(xiàng)技術(shù)同樣也存在一些不足，由于拉曼光譜技術(shù)目前還在不斷完善，其信噪比相對(duì)較低、光譜解釋復(fù)雜、信息化程度不高，缺少大規(guī)模實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析和信息化程度高、操作方便的軟件作為支撐，同時(shí)，較長(zhǎng)的采集時(shí)間以及從患者樣本到光譜采集的低效工作流程等，給臨床工作帶來一定的挑戰(zhàn)，使該項(xiàng)技術(shù)尚未作為常規(guī)臨床技術(shù)引入［16-17］。

3.1 拉曼光譜技術(shù)與ADAD 是一個(gè)日益嚴(yán)重的全球健康問題，對(duì)個(gè)人和社會(huì)都有巨大的影響，目前全世界有4 400 萬人患有癡呆癥。AD 的主要病理特征是淀粉樣斑塊Aβ 和神經(jīng)原纖維纏結(jié)，并且可有神經(jīng)元變性，突觸和神經(jīng)元丟失。其最常見的臨床表現(xiàn)是潛伏的、進(jìn)行性的認(rèn)知功能障礙及近期記憶力喪失。疾病后期，可能會(huì)出現(xiàn)行為改變、行動(dòng)能力受損、幻覺和癲癇［18］。早期識(shí)別和診斷AD顯得尤為重要。MICHAEL 等［19］利用高光譜拉曼顯微鏡對(duì)4 名捐贈(zèng)者（包括3 名AD 和1 名健康志愿者）的額葉皮質(zhì)組織和海馬組織切片進(jìn)行分析。在樣本中含有Aβ 斑塊的區(qū)域發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)含量、β-折疊含量和自體熒光明顯較高，這表明該技術(shù)可以用來識(shí)別AD 患者腦組織中斑塊的位置。PALOMBO 等［20］使用拉曼顯微鏡對(duì)患有AD 的小鼠大腦中含有Aβ 斑塊組織的化學(xué)圖譜進(jìn)行了繪制，發(fā)現(xiàn)這些斑塊的核心富含蛋白質(zhì)，包裹著一層脂質(zhì)環(huán)。脂質(zhì)環(huán)被認(rèn)為是由這些區(qū)域中大量的星形膠質(zhì)細(xì)胞造成的，這可能表明神經(jīng)炎斑塊和慢性神經(jīng)炎之間的聯(lián)系。LOPES 等［13］用傅里葉變換紅外光譜研究AD 患者單核白細(xì)胞的酰胺I 帶平均光譜的結(jié)果表明，對(duì)照組和中度AD患者組在1 640 cm-1～1 625 cm-1范圍內(nèi)存在差異，此區(qū)域是檢測(cè)Aβ 的峰位范圍。在此光譜范圍內(nèi)，1 631 cm-1和1 638 cm-1處波峰明顯增強(qiáng)，并分別與Aβ 折疊結(jié)構(gòu)和β-折疊蛋白有關(guān)。另外，1 683 cm-1處的增強(qiáng)峰也與β-折疊有關(guān)，所有這些差異在AD 中都很明顯，并與氧化應(yīng)激相關(guān)。另一項(xiàng)研究也提示，富含Aβ40 和Aβ42 的蛋白質(zhì)或多肽區(qū)域?qū)е? 672 cm-1處波峰增強(qiáng)，而1 658 cm-1處波峰減弱被認(rèn)為與α-螺旋結(jié)構(gòu)有關(guān)。

3.2 拉曼光譜技術(shù)與帕金森病帕金森病是全世界第二大常見的神經(jīng)退行性疾?。?1］，其主要臨床特征為運(yùn)動(dòng)癥狀，如震顫、僵硬、運(yùn)動(dòng)遲緩、步態(tài)和平衡障礙以及非運(yùn)動(dòng)癥狀，包括認(rèn)知下降、行為、感覺、睡眠和自主神經(jīng)問題［22］。帕金森病的病理特征是大腦基底節(jié)，特別是黑質(zhì)的細(xì)胞死亡，以及α-突觸核蛋白（α-Synuclein，α-SYN）在許多剩余神經(jīng)元中的積聚。多巴胺能黑質(zhì)紋狀體神經(jīng)元與路易小體的變性被認(rèn)為是帕金森病運(yùn)動(dòng)障礙的主要神經(jīng)病理相關(guān)因素［21-23］。錯(cuò)誤折疊的α-SYN 堆積成病理性聚集體被認(rèn)為在帕金森病的發(fā)病機(jī)制中起著中心作用，可引起細(xì)胞毒性，并導(dǎo)致細(xì)胞死亡，α-SYN 還促進(jìn)線粒體功能障礙，干擾內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體功能，擾亂細(xì)胞器軸突運(yùn)輸［22］。成像生物標(biāo)記物正越來越多地應(yīng)用于帕金森病的診斷，為臨床觀察提供支持，包括分子成像、經(jīng)顱超聲、磁共振成像和光學(xué)相干斷層掃描［24］。近年來，細(xì)胞外囊泡（extracellular Vesicles，EVS）被認(rèn)為是α-SYN 在全身轉(zhuǎn)移的載體和關(guān)鍵角色，參與錯(cuò)誤折疊的α-SYN 的傳播，從而參與疾病的傳播。EVS 可能是α-SYN 聚集的加速器，作為多種PD 相關(guān)分子的載體，被認(rèn)為是PD 的新生物標(biāo)志物，但在臨床環(huán)境中對(duì)其檢測(cè)和表征存在一定的技術(shù)局限性。GUALERZI 等［23］應(yīng)用拉曼光譜技術(shù)用于細(xì)胞外囊泡的分析，作為帕金森病的診斷和預(yù)測(cè)工具。帕金森病患者和健康人的血清中提純EVS 后，對(duì)EVS 進(jìn)行拉曼光譜分析，證明該方法在區(qū)分帕金森病患者和對(duì)照組方面具有一定的準(zhǔn)確性，還證明了拉曼數(shù)據(jù)與帕金森病臨床評(píng)分之間的相關(guān)性。循環(huán)中EVS 的拉曼光譜可以作為帕金森病患者分層、評(píng)估康復(fù)和藥物治療效果的可靠、自動(dòng)化和靈敏的方法。在帕金森病研究領(lǐng)域，拉曼光譜被用于研究單體和聚集的α-SYN 的結(jié)構(gòu)特征和變化。此外，拉曼光譜技術(shù)還被用于分析帕金森病患者的血液，檢測(cè)患者血漿的光譜指紋與健康對(duì)照組的不同，還可以提供對(duì)樣品的整體生化特征的洞察力，在EVS 光譜中可以清楚地檢測(cè)到與核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)相關(guān)的峰。帕金森患者出現(xiàn)的視覺障礙是其發(fā)病的重要原因，研究發(fā)現(xiàn)，拉曼光譜可以區(qū)分正常和病變視網(wǎng)膜，也可以檢測(cè)與帕金森病相關(guān)的視網(wǎng)膜病變的分子變化，α-SYN 的累積可能導(dǎo)致神經(jīng)炎癥、代謝失調(diào)和感光細(xì)胞死亡。MAMMADOVA 等［25］證明了使用拉曼光譜來識(shí)別表達(dá)人A53T 基因α-SYN 突變的轉(zhuǎn)基因小鼠模型TgM83 視網(wǎng)膜組織中疾病特異性分子特征的方法。結(jié)果表明，拉曼光譜可能成為有帕金森視網(wǎng)膜病變患者安全、有效的早期診斷途徑。

3.3 拉曼光譜技術(shù)與脫髓鞘疾病IMITOLA 等［26］描述了一種新的成像策略，將視頻率反射和熒光共聚焦成像與相干反斯托克斯拉曼散射（CARS）顯微鏡相結(jié)合，應(yīng)用于慢性實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（chronic experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE）動(dòng)物的活體組織，觀察到EAE 動(dòng)物胼胝體和脊髓局部有嚴(yán)重的脂質(zhì)信號(hào)丟失，提示脫髓鞘，軸突反射信號(hào)丟失。還觀察到出生后第7 天小鼠的小腦皮質(zhì)下白斑（無髓鞘）和7 周齡小鼠（正常有髓）小腦的拉曼光譜信號(hào)，發(fā)現(xiàn)在發(fā)育的髓鞘形成過程中光譜信號(hào)增加。觀察結(jié)果表明，CARS 和反射成像相結(jié)合可以顯示正常成人和發(fā)育中的中樞神經(jīng)系統(tǒng)的有髓軸突和無髓軸突。FU 等［27］利用CARS 顯微鏡和共聚焦拉曼顯微光譜相結(jié)合的方法記錄了不同階段復(fù)發(fā)性實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎小鼠模型的髓鞘的拉曼光譜，用CARS 成像定位了空白對(duì)照組白質(zhì)中的正常髓鞘、脫髓鞘病變中的髓鞘碎片和緩解期再生的髓鞘。并且發(fā)現(xiàn)CARS 圖像能夠量化不同疾病階段的髓鞘厚度，并確定髓鞘厚度與軸突直徑的比率。CARS 顯微鏡可以有效地測(cè)定脫髓鞘疾病中脫髓鞘和再髓鞘形成的情況及髓鞘修復(fù)治療的結(jié)果。

多系統(tǒng)硬化是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一種慢性炎癥性退行性疾病，以脫髓鞘和軸突變性為特征，然其病因尚不清楚，其癥狀、病程和轉(zhuǎn)歸各不相同。多發(fā)性硬化癥通常影響20～40 歲的患者，是美國和歐洲年輕人殘疾的主要原因［28-29］。多發(fā)性硬化患者與普通人群相比，其死亡率更高，預(yù)期壽命更短，在患有精神疾病、心腦血管疾病、糖尿病或癌癥等并存疾病的患者中更為明顯。成像技術(shù)的進(jìn)步和診斷標(biāo)準(zhǔn)的不斷改進(jìn)使MS 早期診斷成為可能［30］。BERGHOLT 等［28］開發(fā)了一種新的共注冊(cè)拉曼光譜和解吸電噴霧電離質(zhì)譜（desorption electrospray ionization mass spectrometry，DESI-MS）結(jié)合免疫熒光成像的相關(guān)異譜脂質(zhì)體（heterospectral lipidomic，HSL）方法用于動(dòng)物模型和多發(fā)性硬化癥患者尸檢腦組織髓鞘的分類和分子表征，并首次用于直接觀察新形成的髓鞘與正常髓鞘組織成分的不同。結(jié)果表明，拉曼光譜不僅可以區(qū)分正常的、脫髓鞘的和有髓鞘的區(qū)域，還可以識(shí)別對(duì)照組織和重新髓鞘組織之間的脂質(zhì)成分存在差異。在多系統(tǒng)硬化患者中，灰質(zhì)和視網(wǎng)膜遭受慢性彌漫性炎癥過程，損害視網(wǎng)膜神經(jīng)元。將拉曼光譜應(yīng)用于多系統(tǒng)硬化損傷的視網(wǎng)膜各層，可以揭示多系統(tǒng)硬化所發(fā)生的分子變化，更好地探索多系統(tǒng)硬化的發(fā)病機(jī)制。MARRO 等［31］利用器官型視網(wǎng)膜培養(yǎng)物的拉曼光譜作為分子成像工具來研究視網(wǎng)膜疾病，監(jiān)測(cè)了視神經(jīng)炎小鼠整個(gè)炎癥反應(yīng)過程中視網(wǎng)膜的生化成分，包括脂氧合酶、iNOS、TNF-α、細(xì)胞色素C、苯丙氨酸、NADH/NAD+和磷脂酰膽堿。此外，這些分子的含量反映了與視網(wǎng)膜炎癥相關(guān)的組織損傷。結(jié)果表明，視網(wǎng)膜的拉曼光譜結(jié)合偏最小二乘分析和多變量曲線分辨率分析可作為檢測(cè)、研究和監(jiān)測(cè)視網(wǎng)膜和腦部疾病的一種有用的分子成像技術(shù)。

神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病分型、分期復(fù)雜，起病更為隱匿，多為散發(fā)病例，發(fā)病率不高，病情進(jìn)展快，病死率較高，起病方式及臨床表現(xiàn)多種多樣。疾病早期往往不被患者重視，癥狀出現(xiàn)前即可有相應(yīng)的病理生理改變，難以進(jìn)行早期診斷及鑒別診斷，必要時(shí)需取死亡患者腦組織標(biāo)本進(jìn)行病理分析確診，標(biāo)本獲取困難，且不符合人類倫理要求。而動(dòng)物模型相對(duì)容易建立，操作簡(jiǎn)單、可控性強(qiáng)。綜上所述，目前拉曼光譜技術(shù)在神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病中的研究還處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，早期發(fā)現(xiàn)人類血清或腦脊液中特異性生物標(biāo)志物對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病顯得尤為重要。

3.4 拉曼光譜技術(shù)與其他神經(jīng)退行性疾病亨廷頓病是由亨廷頓蛋白基因（Huntingtin gene，HTT）第一外顯子中顯性遺傳的CAG 重復(fù)擴(kuò)增引起的常染色體顯性遺傳性神經(jīng)退行性疾病，以漸進(jìn)性不自主舞蹈性運(yùn)動(dòng)、行為和精神障礙以及癡呆為特征［32］。早期檢測(cè)和識(shí)別HD 發(fā)病的生物標(biāo)志物對(duì)疾病的治療和預(yù)后至關(guān)重要。HUEFNER 等［33］首次使用SERS 發(fā)現(xiàn)在雌性R6/2 小鼠（一種HD 轉(zhuǎn)基因小鼠模型）的皮質(zhì)勻漿和血清樣本中有突變的亨廷頓聚集體累積并具有特定的光譜特征，發(fā)現(xiàn)HD小鼠與對(duì)照組相比在400 cm-1～1 200 cm-1光譜范圍內(nèi)有明顯差異，并且證明在HD 患者中通過SERS 獲得其光譜生物標(biāo)志物的可行性，提出這種方法可能在HD 的早期診斷和治療中發(fā)揮重要作用。

ALS 是一種成人起病的慢性、致命性神經(jīng)退行性疾病，以大腦和脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元變性為特征，可導(dǎo)致進(jìn)行性肌肉癱瘓，最終死于呼吸衰竭［34］。ZHANG 等［35］使用SERS 發(fā)現(xiàn)ALS 患者和健康對(duì)照組血漿樣本在722 cm-1和739 cm-1處存在顯著光譜學(xué)差異，ALS 患者在722 cm-1處腺嘌呤和輔酶A 強(qiáng)度明顯高于對(duì)照組，在739 cm-1處胸腺嘧啶和尿嘧啶也顯示出較高的信號(hào)，提示ALS 患者血漿中存在較高水平的DNA 或RNA 堿基。ALS 以胞漿內(nèi)有毒蛋白聚集為顯著特征，氨基酸代謝異?？赡芘cALS 的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。SERS 光譜也可以檢測(cè)到ALS 患者血漿中的幾種特征性氨基酸，包括精氨酸（493 cm-1）、酪氨酸（635 cm-1、1 618 cm-1）、色氨酸（760 cm-1、1 198 cm-1和1 618 cm-1）、L-絲氨酸（808 cm-1）和苯丙氨酸（1 001 cm-1和1 198 cm-1）等。以上研究表明，ALS 患者中葡萄糖、氨基酸及核苷酸等生物分子代謝異常有可能成為其潛在的生物標(biāo)志物。

4 結(jié)論與展望

拉曼光譜技術(shù)是疾病診療中的一股新生力量，雖存在著一些不足，如光譜數(shù)據(jù)信號(hào)的有效處理、統(tǒng)一金屬粒子制備對(duì)表面增強(qiáng)拉曼光譜檢測(cè)的可重復(fù)性等。但是它與其他技術(shù)整合可能更具有發(fā)展?jié)撃?，為神?jīng)退行性疾病的診斷和治療開辟了新的領(lǐng)域［36］。在今后的臨床工作中可將拉曼光譜技術(shù)特定峰位與患者血清學(xué)生化指標(biāo)相結(jié)合，例如，血清膽固醇、低密度脂蛋白、尿酸和腺苷脫氨酶等。深入探索拉曼光譜技術(shù)在神經(jīng)退行性疾病研究中的應(yīng)用，不僅有助于神經(jīng)系統(tǒng)疾病的診斷，也可為預(yù)測(cè)疾病的預(yù)后提供方法學(xué)指導(dǎo)，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。