免疫法隱血試驗(yàn)在檢測胃出血中的應(yīng)用

梁華英，黃勝

(湛江中心人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東 湛江)

0 引言

檢測消化道出血的隱血試驗(yàn)?zāi)壳坝谢瘜W(xué)法和免疫法兩種，化學(xué)法因易出現(xiàn)假陽性而逐漸被免疫法代替。消化性出血疾病的致病因素較為復(fù)雜，易受到患者飲食、藥物等方面的影響[1]，免疫法隱血試驗(yàn)一般又分為血紅蛋白及轉(zhuǎn)鐵蛋白免疫法，這兩種方法檢現(xiàn)在醫(yī)院得到廣泛使用，免疫法與傳統(tǒng)的化學(xué)法比較其特異性及敏感性都有很大的提高。上消化道出血包括胃出血，而檢測胃出血的胃液隱血試驗(yàn)對早期發(fā)現(xiàn)上消化道出血及腫瘤具有重要參考價值，是臨床診斷的一個參考指標(biāo)，下面我們對胃液隱血試驗(yàn)免疫法的使用情況進(jìn)行一些總結(jié)，現(xiàn)報道如下。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源

50 例胃液標(biāo)本來自本院2019 年9 月至2020 年8 月的胃鏡證實(shí)有胃出血的患者，男32 例，女18 例，年齡16-81 歲；36 例正常對照胃液來自經(jīng)胃鏡檢查證實(shí)沒有胃出血的健康人員，男19 例，女11 例，年齡20-65 歲。

1.2 試劑

萬華牌血紅蛋白便隱血膠體金檢測試紙和萬華牌轉(zhuǎn)鐵蛋白便隱血膠體金檢測試紙，均由萬華普曼生物工程有限公司生產(chǎn)。血紅蛋白法檢測范圍：0.2～2000ug/mL，轉(zhuǎn)鐵蛋白法檢測范圍：10～40ug/mL。

1.3 方法

檢測原理：采用雙抗體夾心法，分別在硝酸纖維素膜上的檢測區(qū)包被轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體(或血紅蛋白抗體)和在控制區(qū)包被羊抗鼠IgG。檢測時，樣品中的轉(zhuǎn)鐵蛋白抗原(或血紅蛋白抗原)可與包被在試劑前端的膠體金—抗體結(jié)合，形成免疫復(fù)合物，由于層析作用復(fù)合物沿膜帶移動。如為陽性樣品，則可分別在檢測區(qū)及控制區(qū)各形成一條色帶；如為陰性樣品，則只在控制區(qū)形成一條色帶。

操作：條型：撕開鋁箔袋，取出檢測試紙條(請勿觸摸到試紙條中段白色部分)；將試紙標(biāo)有MAX 箭頭的一端插入待測胃液樣本中(如胃液太粘稠，用蒸餾水稀釋)，待測樣本界面不得超過MAX 線；待試紙浸入液體后2-5 分鐘判讀結(jié)果，5 分鐘后顯示結(jié)果無效。

結(jié)果判讀：陽性：反應(yīng)線(T)與控制線(C)同時出現(xiàn)一條色帶；

陰性：只在控制線(C)出現(xiàn)一條色帶，而反應(yīng)線(T)無色帶出現(xiàn)。

無效：控制線(C)和反應(yīng)線(T)均無色帶出現(xiàn)或只在反應(yīng)線(T)出現(xiàn)一條色帶，表明試驗(yàn)無效，應(yīng)重新測試。

2 結(jié)果

2.1 50 例胃液免疫法隱血試驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 50 例胃液免疫法隱血試驗(yàn)陽性例數(shù)

2.2 檢測結(jié)果中8 例胃液樣本血紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白隱血試驗(yàn)均陰性，29 例血紅蛋白隱血試驗(yàn)陰性樣本中轉(zhuǎn)鐵蛋白陽性21 例，4 例血紅蛋白隱血試驗(yàn)陽性而轉(zhuǎn)鐵蛋白隱血試驗(yàn)陰性。

3 討論

隱血試驗(yàn)臨床上廣泛應(yīng)用在慢性胃腸道出血、消化道惡性腫瘤早期輔助診斷等方面，不同的檢測方法它的影響因素也不同，測定結(jié)果也擦差異，以前的化學(xué)法隱血試驗(yàn)采用過氧化物酶法，該法受干擾因素較多，例如檢測前吃過動物血、肉類等可造成假陽性[2]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展，免疫膠體金法出現(xiàn)并得到廣泛的應(yīng)用，該法的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性較化學(xué)法都有明顯提高，試紙條上包被的抗體針對的是人類抗原，具有高度專一性，其利用下端的吸水材料吸收水和抗原(胃液的血紅蛋白或轉(zhuǎn)鐵蛋白)后，利用毛細(xì)血管現(xiàn)象向上擴(kuò)散，溶解了膠體金標(biāo)志的抗人血紅蛋白抗體或抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體，并兩者結(jié)合，利用毛細(xì)血管現(xiàn)象向上與測試區(qū)的固相血紅蛋白抗體或轉(zhuǎn)鐵蛋白抗體結(jié)合，此時膠體金聚集呈紅色線條。

轉(zhuǎn)鐵蛋白主要存在于血漿中，在健康人的消化道中幾乎不存在，當(dāng)消化道出血時，轉(zhuǎn)鐵蛋白隨著消化道出血進(jìn)入消化道中而導(dǎo)致在糞便中被檢測到，即轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測呈陽性。由于血紅蛋白易被胃酸、細(xì)菌降解消化，而轉(zhuǎn)鐵蛋白在腸道內(nèi)的自身穩(wěn)定性及抗菌能力都強(qiáng)于血紅蛋白[3,4]，轉(zhuǎn)鐵蛋白不易被胃酸、消化酶、消化道細(xì)菌等分解破壞，相對于血紅蛋白而言，轉(zhuǎn)鐵蛋白在腸道中的穩(wěn)定性強(qiáng)，尤其適宜檢測上消化道出血。血紅蛋白法出現(xiàn)假陰性的原因主要有幾點(diǎn)，如血紅蛋白或紅細(xì)胞經(jīng)過胃、胰、腸等不同pH 消化液和腸道細(xì)菌蛋白酶等的作用而消化殆盡，已經(jīng)不具有原來的活性或抗原變性或消失而導(dǎo)致假陰性；過量血紅蛋白導(dǎo)致反應(yīng)體系中的抗原過剩出現(xiàn)前滯現(xiàn)象；患者血紅蛋白的抗原與單克隆抗體不匹配。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示胃液的血紅蛋白法陽性率42%(21/50)，轉(zhuǎn)鐵蛋白法陽性率76%(38/50)，證實(shí)了轉(zhuǎn)鐵蛋白法優(yōu)于血紅蛋白法。原因是由于血紅蛋白易被胃酸、細(xì)菌降解消化，失去原有的免疫原性和反應(yīng)原性，從而出現(xiàn)假陰性結(jié)果，而轉(zhuǎn)鐵蛋白在腸道內(nèi)的自身穩(wěn)定性及抗菌能力都強(qiáng)于血紅蛋白。轉(zhuǎn)鐵蛋白在糞便中的穩(wěn)定性高于血紅蛋白，經(jīng)56℃30min 處理，抗原活性無變化，而血紅蛋白活性大部分喪失，37℃4 小時轉(zhuǎn)鐵蛋白抗原活性無明顯變化，Hb 蛋白抗原活性喪失65%[5,6]。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示正常組有1 例胃液標(biāo)本兩種方法都陽性，后來經(jīng)仔細(xì)檢查，發(fā)現(xiàn)該樣本來自一位牙齦有出血的人員，牙齦出血吞到胃里造成胃液隱血試驗(yàn)陽性。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示8 例胃液樣本血紅蛋白和轉(zhuǎn)鐵蛋白隱血試驗(yàn)均陰性，原因可能有幾種：如果標(biāo)本中混有甲醛(大于0.5%)或高濃度維生素C 可導(dǎo)致膠體金免疫法結(jié)果假陽性[7]；取樣本不合格；轉(zhuǎn)鐵蛋白量低于檢測限；抗原抗體不匹配等。

結(jié)果顯示29 例血紅蛋白隱血試驗(yàn)陰性樣本中轉(zhuǎn)鐵蛋白陽性21 例，證實(shí)了轉(zhuǎn)鐵蛋白法敏感性及特異性高于血紅蛋白法。部分樣本也有可能血紅蛋白含量過大，引起后帶反應(yīng)導(dǎo)致假陰性[8]，后來其中有4 例樣本稀釋后復(fù)查陽性也證實(shí)這一點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示4 例血紅蛋白隱血試驗(yàn)陽性而轉(zhuǎn)鐵蛋白隱血試驗(yàn)陰性，可能是胃液中的轉(zhuǎn)鐵蛋白量含量低，檢測不出，有文獻(xiàn)報道10%的病例呈現(xiàn)轉(zhuǎn)鐵蛋白含量較低的現(xiàn)象[9]。另一方面，轉(zhuǎn)鐵蛋白為負(fù)向急性蛋白，在各種以炎性反應(yīng)為主的疾病中，如創(chuàng)傷、感染、手術(shù)、心肌梗塞，轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度降低，導(dǎo)致轉(zhuǎn)鐵蛋白試驗(yàn)假陰性，還有遺傳性無轉(zhuǎn)鐵蛋白血癥患者轉(zhuǎn)鐵蛋白患者，此時轉(zhuǎn)鐵蛋白試驗(yàn)出現(xiàn)陰性[10]。

胃液隱血試驗(yàn)具有非創(chuàng)傷特點(diǎn)，是輔助診斷包括胃出血等上消化道出血的簡便方法及指標(biāo)，單克隆抗體免疫法是采用雙抗體夾心法特異地檢測人血紅蛋白抗原，基本可以排除食物、藥物等因素的干擾，特異性強(qiáng)，靈敏度高，標(biāo)本中的微量血紅蛋白能被檢測，目前已被認(rèn)可為大便隱血試驗(yàn)的確認(rèn)方法[11]。但該方法不足的是正常的牛理性失血時，某些健康者特別是服用刺激胃腸道的藥物后可造成假陽性；該方法仍然基于抗原抗體反應(yīng)，當(dāng)兩者比例不當(dāng)或不匹配或血紅蛋白抗原因?yàn)槔砘蛩刈冃曰蛳У鹊挠绊懸壮霈F(xiàn)假陰性結(jié)果。轉(zhuǎn)鐵蛋白檢測消化道出血具有高特異性和不易被細(xì)菌分解的特點(diǎn)，克服了血紅蛋白因變性產(chǎn)生假陰性的缺點(diǎn)，為檢測消化道出血的良好指標(biāo)[12]。

綜上所說，免疫法隱血試驗(yàn)特異性強(qiáng)、靈敏度高，操作簡便，不受飲食的干擾，轉(zhuǎn)鐵蛋白法測定胃液樣本靈敏度及特異性都優(yōu)于血紅蛋白法，兩者結(jié)合檢測，可提高檢測陽性率。但該法不能對胃腸道出血性病變做結(jié)論性的診斷，只能作為篩查或輔助診斷用，而不能代替臨床內(nèi)窺鏡、X 線和其他檢查，對于陽性結(jié)果，應(yīng)結(jié)合臨床做進(jìn)一步檢查。