暈痛平合劑鎮(zhèn)痛作用及提取工藝的研究

凌利英 殷小云 張艷艷 蒙海燕 蔣寶華

摘要：目的? 探討暈痛平合劑中所含的揮發(fā)油鎮(zhèn)痛作用，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。方法? 暈痛平合劑采用扭體實(shí)驗(yàn)給小鼠分別腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/20g體重，觀察小鼠注射醋酸20分鐘內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)次數(shù);利用正交實(shí)驗(yàn)L9（34）優(yōu)化揮發(fā)油的提取工藝，確定最佳提取方法。結(jié)果? 結(jié)果表明含揮發(fā)油組的暈痛平合劑鎮(zhèn)痛效果顯著;正交實(shí)驗(yàn)揮發(fā)有最佳提取工藝是A3B2C3，即加10倍量水，浸泡1小時(shí)，蒸餾提取6小時(shí)。

關(guān)鍵詞：暈痛平合劑;揮發(fā)油;鎮(zhèn)痛;工藝優(yōu)化;正交實(shí)驗(yàn)

【中圖分類號(hào)】R446 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1673-9026（2021）15--01

暈痛平合劑是我院院內(nèi)制劑，在臨床已經(jīng)應(yīng)用多年，藥品的主要成份為桃仁、紅花、枳殼、延胡索、香附、赤芍、天麻、川芎、砂仁、柴胡、半夏、芥子、石菖蒲、桔梗、甘草。桃仁、紅花具有活血祛瘀、通經(jīng)脈作用，與赤芍、川芎配伍，可用于瘀血阻滯、瘀阻為器或血行不暢之證?；颊咭蛲鈧峦?，瘀血阻絡(luò)多見。延胡索活血止痛;香附疏肝理氣、調(diào)經(jīng)止痛。上藥配伍，共同發(fā)揮活血祛瘀，理氣通絡(luò)止痛之功能。枳殼破氣消痞，芥子利氣散結(jié)、通絡(luò)止痛。石菖蒲開竅醒神。桔梗祛痰排膿。生甘草緩急止痛。共同發(fā)揮化瘀、通絡(luò)止痛、祛痰功能。本方所用之外傷頭痛、頭暈、頭脹等癥，乃由于外傷所致，氣滯血瘀、瘀則不通、不通則痛。血瘀則清竅失常，則頭痛、頭暈、頭脹。腎失和降則息嘔吐。諸藥相和，諸癥好轉(zhuǎn)。

暈痛平合劑現(xiàn)規(guī)格為250ml/瓶，每次服用量為50ml，服用劑量較大，因此準(zhǔn)備在合劑的基礎(chǔ)上開發(fā)口服液劑型，對(duì)口服液配制工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)做進(jìn)一步研究，在此研究基礎(chǔ)上擬對(duì)揮發(fā)油的成分予以保留，但揮發(fā)油的保留是否能夠提高暈痛平合劑的臨床療效，需要進(jìn)一步研究。本次實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖翘接懝に囍刑崛]發(fā)油的必要性，對(duì)揮發(fā)油、含揮發(fā)油的藥品及不含揮發(fā)油的藥品的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行比較，并對(duì)揮發(fā)油的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。

1.鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)研究

1.1受試藥物

實(shí)驗(yàn)一組：暈痛平合劑（不含揮發(fā)油） 規(guī)格0.825g/ml（825g生藥，制成1000ml液體）批號(hào)：160601，藥物組成：桃仁、紅花、枳殼、延胡索、香附、赤芍、天麻、川芎、砂仁、柴胡、半夏、芥子、石菖蒲、桔梗、甘草，桃仁、紅花，來源：河北省遷安市中醫(yī)醫(yī)院制劑室;實(shí)驗(yàn)二組：揮發(fā)油組（批號(hào)：160602）：按照稱取520g的飲片，破碎成粗粉，置密閉回流裝置中提取揮發(fā)油，收集揮發(fā)油，備用;實(shí)驗(yàn)三組：暈痛平合劑含揮發(fā)油組（批號(hào)：160603）：參照二組的方法提取揮發(fā)油，并將藥物殘?jiān)铀凑諘炌雌胶蟿┑奶崛」に嚴(yán)^續(xù)提取兩次，配制成1000ml的液體制劑，并加入揮發(fā)油，作為含揮發(fā)油組備用。

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：昆明種小白鼠，數(shù)量40只，體重18-22g，均為雄性，購自：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院衛(wèi)生環(huán)境醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，合格證號(hào)：SCXK-（軍）2009-003。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器? 電子天平、500ml燒杯、棉簽、1ml注射器。

1.4試劑 冰醋酸，天津市申泰化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號(hào)：140420。

1.5劑量設(shè)計(jì)? 暈痛平合劑，規(guī)格：0.825g/ml（825g生藥，制成1000ml液體），將揮發(fā)油、含揮發(fā)油的暈痛平合劑及不含揮發(fā)油的暈痛平合劑均配成0.825g/ml生藥的樣品溶液，依次分為1、2、3組，試驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配成0.8g生藥/ml的供試液。

2.試驗(yàn)方法

2.1各個(gè)試驗(yàn)均將動(dòng)物隨機(jī)分成四組，分別為樣品1、2、3組及對(duì)照組。每組10支小鼠，樣品1、2、3組按照22g/kg灌胃不同藥液，對(duì)照組灌服等容積的蒸餾水，每日一次，連續(xù)給藥7天。

2.2鎮(zhèn)痛試驗(yàn)：末次給藥后30分鐘，各組小鼠分別腹腔注射0.6%醋酸0.2ml/20g體重，觀察小鼠注射醋酸15分鐘內(nèi)出現(xiàn)扭體反應(yīng)次數(shù)。用下列公式計(jì)算扭體抑制率[1]。

2.3試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果顯示：三組樣品均能不同程度的減少15分鐘內(nèi)腹腔注射0.6%醋酸引起的扭體次數(shù)，試驗(yàn)表明樣品均有一定的鎮(zhèn)痛作用，但含揮發(fā)油的暈痛平合劑鎮(zhèn)痛作用更加顯著（P<0.01）

以上試驗(yàn)表明，揮發(fā)油有不同程度的鎮(zhèn)痛作用，含揮發(fā)油的暈痛平合劑較不含揮發(fā)油的暈痛平合劑的效果明顯提升，此試驗(yàn)提示了提取揮發(fā)油的必要性。

2.揮發(fā)油提取工藝的優(yōu)化

2.1.揮發(fā)油提取工藝的研究? 以揮發(fā)油的收取量為參考指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)對(duì)提取的加水量、浸泡時(shí)間及蒸餾時(shí)間進(jìn)行試驗(yàn)考察。

2.2材料與儀器：

材料：桃仁、紅花、枳殼、延胡索、香附、赤芍、天麻、川芎、砂仁、柴胡、半夏、芥子、石菖蒲、桔梗、甘草，來源：安徽滬春堂中藥飲片有限公司，經(jīng)檢測(cè)均為合格產(chǎn)品。揮發(fā)油測(cè)定器（唐山器?；邢薰荆?shí)驗(yàn)用水為蒸餾水，無水硫代硫酸鈉，石油醚。

2.3方法與結(jié)果

2.3.1? 通過預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)加水量、浸泡時(shí)間、蒸餾時(shí)間是影響揮發(fā)油提取的主要因素。因此，為了探討揮發(fā)油的提取工藝，以揮發(fā)油量為參考指標(biāo)，采用正交實(shí)驗(yàn)對(duì)提取的加水量、浸泡時(shí)間、蒸餾時(shí)間進(jìn)行考察，選擇最佳的揮發(fā)油提取工藝參數(shù)，為大生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

2.3.2? 因素水平表? 以加水量（倍）A，浸泡時(shí)間（h）B，蒸餾時(shí)間（h）C為工藝考察因素，采用L9（34）進(jìn)行正交試驗(yàn)，因素水平表如表2。

2.3.3? ?提取工藝篩選 按正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，按處方的1/10比例分別稱取已粉碎好的藥材，放入揮發(fā)油蒸餾器中，提取收集揮發(fā)油，參照揮發(fā)油測(cè)定法乙法《中國藥典2015年版一部附錄2204》測(cè)定法實(shí)驗(yàn)，得揮發(fā)油含量（%）。正交實(shí)驗(yàn)表及揮發(fā)油考察結(jié)果見表3。

從表4的方差分析表可以看出，極差最大的是C（蒸餾時(shí)間），其次是浸泡時(shí)間及提取的次數(shù)，但A、B的結(jié)果均不具有顯著性;從表3的最佳數(shù)據(jù)直觀分析可知，A3B1C3的結(jié)果較為理想。結(jié)合表3及表4數(shù)據(jù)，同時(shí)考慮生產(chǎn)的成本，根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定提取揮發(fā)油的最佳工藝組合是A3B2C3，即加10倍量水，浸泡1小時(shí)，蒸餾提6小時(shí)。

2.3.4最佳工藝驗(yàn)證

為了驗(yàn)證上述結(jié)論的準(zhǔn)確性，按照最佳工藝條件A3B2C3，稱取處方量的10分之一，按照最佳工藝條件A3B2C3進(jìn)行了3次試驗(yàn)，結(jié)果見表5。

從表中5次實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，揮發(fā)油的收率均處于最高，說明工藝可行，可以在大生產(chǎn)中應(yīng)用。

3 討論

由于腹膜有廣泛的感覺神經(jīng)分布，某些化學(xué)物質(zhì)（如冰醋酸等）注入小鼠腹腔內(nèi)可刺激臟層和壁層腹膜，引起深部、大面積且持久的疼痛，致使小鼠產(chǎn)生扭體反應(yīng)，表現(xiàn)為腹部兩側(cè)內(nèi)凹、軀體扭曲、后肢伸展和臀部高起等行為反應(yīng)，統(tǒng)稱為扭體反應(yīng)。該反應(yīng)在注射15min內(nèi)出現(xiàn)頻率最高，故注射后15min內(nèi)發(fā)生的扭體次數(shù)作為疼痛的定量指標(biāo)。如醋酸引起的疼痛刺激通過感覺神經(jīng)纖維傳送到脊髓，然后到達(dá)大腦皮質(zhì)產(chǎn)生疼痛感覺。中央和外周鎮(zhèn)痛劑舒緩疼痛通過感覺中樞的一體化和抑制或減少疼痛感覺的進(jìn)入，因此中樞的止痛很容易通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)效果。

暈痛平合劑處方中的川芎含有藁本內(nèi)酯，藁本內(nèi)酯有很強(qiáng)的解痙、平喘、鎮(zhèn)靜作用，能改善微循環(huán)，松弛平滑肌[2];香附中含有的揮發(fā)油主要是a-香附酮及a-香附烯，其中a-香附酮被認(rèn)定為較強(qiáng)的前列腺素生物合成抑制劑，被認(rèn)為是鎮(zhèn)痛作用的有效成分之一[3];砂仁揮發(fā)油的主要成分為乙酸龍腦酯，具有保胎、殺蟲、抗炎、抗腫瘤、止痛、止瀉、改善記憶力等作用[4];石菖蒲中含有揮發(fā)油，主要為β-細(xì)辛醚，α-細(xì)辛醚，兩者均有鎮(zhèn)靜作用和抗驚厥作用[5];枳殼中揮發(fā)油的主要成分是檸檬烯與芳樟醇，檸檬烯有鎮(zhèn)咳、祛痰、抗菌作用，芳樟醇有防腐、抗病毒、鎮(zhèn)靜作用[6];柴胡揮發(fā)油中含有較多的亞油酸，有一定的抗驚厥作用[5];以上飲片的揮發(fā)油的保留可提高暈痛平合劑的臨床鎮(zhèn)痛的治療作用，而且動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也驗(yàn)證了提取揮發(fā)油對(duì)鎮(zhèn)痛作用顯著。

因此對(duì)暈痛平合劑原有工藝進(jìn)行改進(jìn)，提取川芎、香附、砂仁、石菖蒲、枳殼、柴胡六味飲片的揮發(fā)油，殘?jiān)c其他剩余的幾味飲片合并水提，可有效的提升暈痛平合劑的臨床治療效果。

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