抗帕寧湯劑對帕金森病大鼠多巴胺能神經(jīng)元保護作用

劉立峰，趙佳琪 (北華大學:.基礎醫(yī)學院，.醫(yī)學技術學院，吉林 吉林 132013)

中醫(yī)將帕金森病(Parkinson’s disease,PD)歸為“顫癥”“拘攣”“振掉”以及“痙癥”等疾病范疇[1]，認為是肝腎虧虛、氣血不足、風氣內(nèi)動所致，主要是從補腎活血息風的角度進行治療，在臨床中取得一定成效[2]。以此為理論依據(jù)選取滋補肝腎的熟地、枸杞，祛風的全蝎，息風定顫的天麻等藥材自擬抗帕寧湯劑方，建立PD大鼠模型，觀察抗帕寧湯劑對PD模型大鼠行為學的影響，并探討其作用機制，以期為抗帕寧湯劑臨床治療PD奠定理論與實驗基礎。

1 資料與方法

1.1 材 料

動物為清潔且健康、不限性別的Wister大鼠，體重250 g左右，周齡8～10周。

自擬抗帕寧湯劑配比：將熟地、枸杞、珍珠母、天麻、肉蓯蓉、膽南星、全蝎等按6∶6∶5∶4∶3∶3∶1的比例稱重后加水煎制，滅菌環(huán)境下4 ℃保存。對于全蝎等不宜煎煮的中藥材以粉碎等方式混入溶液中。美多巴(上海羅氏制藥，國藥準字H10930198)。

1.2 方 法

采用MPTP偏側(cè)紋狀體兩點注入法制備PD模型大鼠，隨機分為模型組,美多巴組,抗帕寧湯高、中、低劑量組,每組10只。3個組別抗帕寧湯劑量依次是15、7.5、3.75 g/(kg·d)。并設假手術組為對照組，灌胃治療1個月。觀察各組大鼠治療前后誘導的行為學變化及對紋狀體單胺類神經(jīng)遞質(zhì)、中腦酪氨酸羥化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的影響。

1.3 觀察指標

①旋轉(zhuǎn)行為檢測：大鼠灌胃前以及灌胃后的14、28 d，分別對各個組別的大鼠注射APO，引起其旋轉(zhuǎn)行為。觀察用藥后各組大鼠從第10分鐘到第40分鐘的旋轉(zhuǎn)行為及旋轉(zhuǎn)次數(shù)。

②神經(jīng)遞質(zhì)檢測：每組均取10只大鼠，斷頭取出腦組織，快速將雙側(cè)紋狀體取出，稱重后標記，放入到液化氮之中，儲存在-70 ℃的冰箱中。測定前于室溫中逐漸融化,放入到冷處理過的0.4 mmol/L高氯酸液中，配成100 g/L的溶液，攪勻離心，取約50 μL上清液為樣本。利用液相色譜設備對各組大鼠的單胺遞質(zhì)進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié) 果

2.1 抗帕寧湯對PD大鼠旋轉(zhuǎn)行為的影響

抗帕寧湯劑高劑量組和低劑量組經(jīng)過灌胃1個月后，其旋轉(zhuǎn)行為見顯著改善，中劑量組在灌胃2周及1個月后，其旋轉(zhuǎn)行為也見顯著改善，P均<0.05，具體見表1。

2.2 多巴胺能神經(jīng)遞質(zhì)的檢測結(jié)果

抗帕寧湯劑3種劑量的大鼠紋狀體的多巴胺、二羥苯乙酸及高香草酸的含量均顯著提升，其中以中劑量的組別增加的幅度最高，具體表2。

表 1 不同組別大鼠治療前后旋轉(zhuǎn)圈數(shù)

表 2 不同組別大鼠紋狀體單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平比較

3 討 論

PD是困擾老年人群的常見中樞神經(jīng)疾病，隨著年齡的增高其發(fā)病率增加。患者的肢體震顫，機體各項功能退化，對其生存質(zhì)量造成嚴重影響[3]。目前中醫(yī)領域主要是從補腎活血息風的角度進行治療，按照這一思路,本研究對癥自擬抗帕寧湯劑方探討對PD的治療[4-5]。方中包括熟地、枸杞、珍珠母、天麻、肉蓯蓉、膽南星、全蝎等多味藥材。其中熟地、枸杞、肉蓯蓉具有補益肝腎的作用，珍珠母、天麻、膽南星等平肝熄風且可定顫止痙，加上具有祛風功效的蟲類藥材全蝎，諸藥合效共同起到滋補肝腎、息風活血的功效，正對該病的病因。為進一步明確這一方劑對于PD的臨床效果，研究制作PD模型大鼠，選取不同劑量的抗帕寧湯方劑開展相關臨床實驗。大鼠旋轉(zhuǎn)行為改變情況與中腦、多巴胺以及TH密切相關，反映出神經(jīng)元壞死程度，可以作為帕寧湯對神經(jīng)元的保護作用的指標。TH是多巴胺的主要合成調(diào)節(jié)因素，與多巴胺的關系密切,通過多巴胺等神經(jīng)遞質(zhì)檢測可了解抗帕寧湯對于神經(jīng)元的保護作用。研究結(jié)果顯示，抗帕寧組各劑量的旋轉(zhuǎn)行為及神經(jīng)元遞質(zhì)等情況均顯著好于模型組，且中劑量組的效果更為理想。

綜上，抗帕寧湯能夠有效改善PD模型大鼠旋轉(zhuǎn)行為，并提升紋狀體中多巴胺和其代謝物水平，有助于保護多巴胺能神經(jīng)元,并且采用中劑量時期效果最顯著。