骨組織工程在顱骨修補(bǔ)中的研究進(jìn)展

侯曉峰，周佳林，李丹霞，趙志軍，張春陽

(1.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，內(nèi)蒙古 包頭 014040； 2.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 包頭 014010)

去骨瓣減壓術(shù)可以有效緩解患者的高顱壓，拯救了很多重型顱腦損傷患者的生命。然而，術(shù)后由于顱骨的缺失，顱腦易發(fā)生二次傷害，并可能出現(xiàn)腦組織缺血、缺氧、腦脊液循環(huán)紊亂等問題[1]。在術(shù)后穩(wěn)定期，積極進(jìn)行顱骨修補(bǔ)對(duì)于患者腦神經(jīng)功能的恢復(fù)具有重要意義[2-4]。目前普遍認(rèn)為，自體骨是臨床顱骨修補(bǔ)的最佳材料[5-6]。但近年來自體骨的問題也逐漸顯現(xiàn)，包括可用材料的有限性、骨吸收和建模困難等，因此急需尋找新的材料來替代自體骨。其他用于顱骨修補(bǔ)材料主要包括金屬鈦、骨水泥、聚乙烯以及聚醚醚酮等，雖然這些材料均已得到不同程度的應(yīng)用，但也存在感染、免疫排斥、生物相容性差等一系列并發(fā)癥，嚴(yán)重者甚至需要二次手術(shù)[7]。理想的顱骨修補(bǔ)方式應(yīng)使缺損區(qū)恢復(fù)到近乎正常的生理狀態(tài)和結(jié)構(gòu)，而骨組織工程(bone tissue engineering，BTE)的出現(xiàn)使這一理想變成可能。BTE通過體外培養(yǎng)的方式將種子細(xì)胞移植到用于組織再生的支架材料上，并添加生長(zhǎng)因子共同用于缺損區(qū)的修補(bǔ)。BTE不僅促進(jìn)缺損區(qū)邊緣新生骨的不斷生長(zhǎng)，同時(shí)復(fù)合材料也逐漸降解消失，最終缺損區(qū)完全再生，達(dá)到理想狀態(tài)下的修復(fù)。而且用于BTE的材料是可制作、無限的，可以很好地解決自體骨保存困難、取材有限的問題，是一種優(yōu)于自體骨的修補(bǔ)方式?，F(xiàn)就BTE在顱骨修補(bǔ)中的研究進(jìn)展予以綜述。

1 支架材料

支架材料是BTE的主體成分，在BTE中起關(guān)鍵作用。目前支架材料大致可分為以下幾類：①天然高分子材料，生物相容性好、免疫反應(yīng)低，但是機(jī)械強(qiáng)度差，主要包括膠原蛋白、殼聚糖、纖維蛋白、透明質(zhì)酸等；②人工合成高分子聚合物，主要優(yōu)點(diǎn)為骨誘導(dǎo)能力強(qiáng)，但是這種材料親水性差、細(xì)胞吸附能力低，且易誘發(fā)無菌性炎癥，包括聚乳酸、聚乙醇酸和聚乳酸-乙醇酸[poly(lactic-co-glycolic acid)，PLGA]聚合物等；③人工合成無機(jī)材料，具有生物相容性好和骨傳導(dǎo)性能好的優(yōu)點(diǎn)，但其骨誘導(dǎo)能力差，包括羥基磷灰石(hydroxyapatite，HA)和β-磷酸三鈣[8-9]。

理想的支架材料應(yīng)具備以下特點(diǎn)：①良好的生物相容性和生物活性；②可降解性且降解速率穩(wěn)定，降解產(chǎn)物對(duì)人體無毒無害；③一定的力學(xué)強(qiáng)度；④易加工制備；⑤大小合適的孔隙結(jié)構(gòu)以及分布均勻的高孔隙率，便于細(xì)胞附著和增殖。

目前在BTE應(yīng)用于顱骨修補(bǔ)的研究中，由于單一的支架材料難以滿足BTE的要求，常將其中兩種或兩種以上的支架材料進(jìn)行復(fù)合后使用，以期提高效能，具體表現(xiàn)為以下幾點(diǎn)。①提高成骨效能，Tebyanian等[10]分別將膠原蛋白/β-磷酸三鈣與單純膠原蛋白支架用以修補(bǔ)兔顱骨缺損，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，膠原蛋白/β-磷酸三鈣組顱骨缺損處再生更顯著；②增加生物相容性，Ge等[11]將60只SD大鼠作為研究對(duì)象，隨機(jī)分為硅灰石組、硅灰石-HA復(fù)合物組和HA組，結(jié)果顯示，硅灰石組幾乎無新骨形成，而相較于HA組的新骨形成，硅灰石-HA復(fù)合物組的新骨周圍有更多的血管生成，且該組支架材料吸收降解部分與缺損邊緣顯示出良好的生物相容性；③降低炎癥發(fā)生率，感染是支架材料降解過程中的常見問題，特別是使用天然高分子聚合物時(shí)降解產(chǎn)物的積累會(huì)引起宿主的炎癥反應(yīng)，進(jìn)而影響其組織再生能力，這種炎癥反應(yīng)通常由先天性免疫系統(tǒng)細(xì)胞觸發(fā)，包括樹突狀細(xì)胞、肥大細(xì)胞、粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞[12]。為了盡可能地減少炎癥反應(yīng)的發(fā)生，Li等[13]研究發(fā)現(xiàn)，PLGA的酸性降解產(chǎn)物堆積可誘導(dǎo)大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，與單純PLGA相比，將PLGA與明膠/納米HA復(fù)合后，復(fù)合材料發(fā)生炎癥反應(yīng)的概率更低，原因可能為納米HA呈堿性可緩沖PLGA降解產(chǎn)生的酸環(huán)境。另外，相同種類的復(fù)合支架也會(huì)表現(xiàn)出不同的骨誘導(dǎo)能力，Zhou等[14]將HA與白磷鈣石分別制成HA/殼聚糖支架和白磷鈣石/殼聚糖支架并植入大鼠的顱骨缺陷模型中，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，白磷鈣石/殼聚糖支架具有更好的生物相容性，間充質(zhì)干細(xì)胞增殖更顯著，成骨細(xì)胞分化能力更強(qiáng)。復(fù)合支架的制備很好地改善了單一支架骨誘導(dǎo)能力不足的問題，但與理想的支架材料相比仍有差距，為了進(jìn)一步增加復(fù)合支架在顱骨修補(bǔ)中的骨誘導(dǎo)能力，加入某些微量元素可能縮小這種差距。

鋅是人類成長(zhǎng)過程中必不可少的微量元素，有助于骨骼系統(tǒng)的發(fā)育和生長(zhǎng)。Wang等[15]將碳納米管/殼聚糖作為支架修補(bǔ)大鼠顱骨缺損，共分為4組，其中3組分別添加0.2%、1%和2%的鋅，另一組為未添加任何微量元素的空白組，X線及組織學(xué)分析顯示，鋅的添加顯著促進(jìn)了新骨的形成，且添加1%鋅的碳納米管/殼聚糖支架的成骨性能最佳，但由于鋅離子的濃度設(shè)置梯度不均，對(duì)于促進(jìn)骨再生的最佳鋅離子濃度仍需探究。

2 種子細(xì)胞

種子細(xì)胞是BTE的重要組成部分，目前用于顱骨修補(bǔ)的種子細(xì)胞主要包括骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)、脂肪源性干細(xì)胞(adipose-derived stem cells，ADSCs)、肌源性干細(xì)胞(muscle-derived stem cells，MDSCs)、胚胎干細(xì)胞(embryonic stem cells，ESCs)以及誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)，各類種子細(xì)胞優(yōu)缺點(diǎn)見表1[16-20]。理想的種子細(xì)胞應(yīng)具備以下特點(diǎn)：①易于取材且來源豐富，對(duì)機(jī)體損傷小且免疫排斥反應(yīng)少；②易于體外擴(kuò)增，且具有定向分化為成骨細(xì)胞的能力；③易于成活，植入后在體內(nèi)可以保持良好的成骨活性。

表1 各類種子細(xì)胞優(yōu)缺點(diǎn)比較

2.1BMSCs BMSCs又稱為骨髓基質(zhì)細(xì)胞，是從少量的骨髓組織中分離所得，具有良好的骨誘導(dǎo)能力和多分化的潛能。BMSCs作為種子細(xì)胞已廣泛用于BTE，且通過與支架材料復(fù)合，在成骨誘導(dǎo)方面具有良好的協(xié)同作用。Khadka等[21]將BMSCs植入納米HA/聚酰胺6支架上，為臨界大小的大鼠顱骨缺損進(jìn)行修補(bǔ)，電子顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，隨著時(shí)間的推移，BMSCs從支架表面逐漸侵入到材料的孔隙，最后在支架內(nèi)面大量增殖，促進(jìn)了干細(xì)胞在毛孔內(nèi)的分布，使支架具有了內(nèi)外同時(shí)成骨的特性，加快了新骨形成，而且這種內(nèi)外同時(shí)成骨的特性也改善了支架的生物力學(xué)性能。此外，干細(xì)胞培養(yǎng)方式的不同也會(huì)影響成骨性能，有研究發(fā)現(xiàn)，常規(guī)組織培養(yǎng)技術(shù)將間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)成二維單層，會(huì)破壞干細(xì)胞原有的體內(nèi)微環(huán)境，而球狀培養(yǎng)出的間充質(zhì)干細(xì)胞具有更高的成骨潛能，具體表現(xiàn)為上調(diào)成骨基因和相關(guān)蛋白質(zhì)水平，同時(shí)增加鈣沉積，增強(qiáng)大鼠顱骨再生[22]。

近年來，對(duì)BMSCs進(jìn)行修飾可進(jìn)一步增強(qiáng)其成骨分化能力。Yu等[16]將降鈣素基因相關(guān)肽轉(zhuǎn)染后的人BMSCs作為種子細(xì)胞，與膠原蛋白支架結(jié)合用于大鼠顱骨修補(bǔ)，通過免疫組織化學(xué)法和免疫蛋白印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)相關(guān)成骨因子的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與未轉(zhuǎn)染降鈣素基因相關(guān)肽組的人BMSCs相比，轉(zhuǎn)染降鈣素基因相關(guān)肽組的成骨標(biāo)志物骨鈣蛋白和骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bone morphogenetic protein，BMP)-2水平均顯著增高，這可能與一種神經(jīng)纖維的標(biāo)志物——蛋白基因產(chǎn)物9.5陽性有關(guān)。Moncal等[23]在miRNA與3D打印支架相結(jié)合治療顱面重建的研究中發(fā)現(xiàn)，3D打印的膠原蛋白支架與miR-148b轉(zhuǎn)染的人BMSCs結(jié)合，可以促進(jìn)人BMSCs的早期分化，顯著改善骨再生，使臨界大小的大鼠顱骨缺損幾乎得到了完全修復(fù)，表明用于轉(zhuǎn)染的miRNA祖細(xì)胞在顱骨修補(bǔ)中具有潛在價(jià)值。

2.2ADSCs ADSCs作為種子細(xì)胞最大的優(yōu)點(diǎn)在于取材簡(jiǎn)便，產(chǎn)出量大，可以解決BMSCs對(duì)機(jī)體創(chuàng)傷大、干細(xì)胞含量低、骨髓抽取有限的問題。Yoon等[24]將ADSCs與PLGA共聚物構(gòu)建為復(fù)合體，12周后顯示顱骨形成面積顯著增加,說明ADSCs作為種子細(xì)胞對(duì)顱骨生長(zhǎng)起重要作用。有學(xué)者對(duì)ADSCs的骨誘導(dǎo)能力進(jìn)行了比較，認(rèn)為在顱骨缺損修補(bǔ)方面BMSCs與ADSCs作為種子細(xì)胞差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[25]。然而，與BMSCs不同的是，ADSCs的成骨潛力主要依賴于外源性生長(zhǎng)因子的存在[17]，而且不同部位的ADSCs成骨能力也具有較大差異[26]。盡管人們對(duì)ADSCs的了解越來越多，但在臨床上真正評(píng)估ADSCs的可用性還需要進(jìn)行長(zhǎng)期的研究。

2.3MDSCs MDSCs是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種多能成體干細(xì)胞，與脂肪組織相似，是多能間充質(zhì)細(xì)胞的另一來源，具有自我更新和多向分化的潛能，可被誘導(dǎo)分化為神經(jīng)細(xì)胞、成骨細(xì)胞以及內(nèi)皮細(xì)胞[18]。MDSCs作為種子細(xì)胞，已被證實(shí)可在臨界大小的大鼠顱骨缺損模型中促進(jìn)骨再生，特別是在植入外源性生長(zhǎng)因子的情況下[27]。有研究將MDSCs與BMSCs分別置于同樣臨界大小的骨缺損中，6周后兩組新生骨的體積和骨缺損覆蓋率比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明MDSCs與BMSC具有相近或相同的骨再生能力，是一種有發(fā)展前景的種子細(xì)胞[28]。Lough等[29]通過對(duì)BMSCs、ADSCs和MDSCs在小鼠顱骨缺損愈合中的比較分析，發(fā)現(xiàn)3種干細(xì)胞具有相似的成骨性能，且與BMSCs和ADSCs相比，MDSCs促進(jìn)血管化的能力更強(qiáng)。除生長(zhǎng)因子對(duì)MDSCs的促進(jìn)作用外，性別也可能是影響成骨性能的因素。Scibetta等[30]在證實(shí)不同性別大鼠的MDSCs之間存在差異后，為了探究人MDSCs是否也存在性別差異，用BMP-2重組慢病毒載體/綠色熒光蛋白分別轉(zhuǎn)染不同性別的人MDSCs，并將這些細(xì)胞移植到臨界大小的小鼠顱骨缺損中，結(jié)果顯示，男性人MDSCs組新生骨多于女性，且新生骨的密度顯著高于女性。因此，在未來的BTE中，細(xì)胞的性別差異也是需要考慮的因素。盡管MDSCs已應(yīng)用于顱骨修補(bǔ)，但與ADSCs和MDSCs相比，MDSCs的研究仍較少。

2.4ESCs ESCs是理想狀態(tài)下最佳的種子細(xì)胞，具有無限增殖、自我更新和多向分化的特點(diǎn)，并且能夠被誘導(dǎo)分化為人體的任何細(xì)胞。在動(dòng)物顱骨缺損模型中已證實(shí)，人ESCs具有巨大的成骨潛力[19，31]。然而，由于ESCs取材涉及倫理道德的問題，對(duì)于ESCs的研究仍存在爭(zhēng)議。單性生殖ESCs的出現(xiàn)能夠避免ESCs的倫理問題，且在未來可能成為替代ESCs的干細(xì)胞來源[32]。

2.5iPSCs iPSCs是利用病毒載體轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入分化的體細(xì)胞中，使其重編程而得到類似于ESCs的一類細(xì)胞，通過采用導(dǎo)入外源基因的方法使體細(xì)胞去分化為多能干細(xì)胞，具有潛在的無限增殖及多向分化的特征[20]?？得鞯萚33]通過將iPSCs植入不同支架，比較iPSCs在大鼠顱骨缺損中的骨再生潛力并研究iPSCs在植入支架后的生物學(xué)活性和成骨作用，結(jié)果表明，iPSCs可以在新型增強(qiáng)復(fù)合材料支架上附著和增殖，且骨組織的修復(fù)效果較好。iPSCs可以很好地滿足骨缺損修復(fù)過程中植入材料的生物學(xué)和成骨活性要求。同時(shí)，與其他種子細(xì)胞的成骨能力相比，iPSCs具有與人BMSCs相同的成骨潛能[34]。此外，iPSCs同樣存在倫理問題，但最主要的問題為iPSCs具有形成畸胎瘤的風(fēng)險(xiǎn)，可導(dǎo)致動(dòng)物模型發(fā)生極高的致殘率，甚至死亡。Levi等[35]研究發(fā)現(xiàn)，添加生長(zhǎng)因子后所營(yíng)造的高成骨性微環(huán)境可有效降低畸胎瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。因此，將iPSCs應(yīng)用于臨床前需充分了解iPSCs存在的安全隱患，未來需通過更多的研究來解決這些問題。

3 生長(zhǎng)因子

生長(zhǎng)因子在BTE中主要起輔助作用，通過基因工程利用病毒或非病毒作為載體將生長(zhǎng)因子轉(zhuǎn)移到種子細(xì)胞上，以維持種子細(xì)胞的活性，促進(jìn)成骨，并加快顱骨骨缺損區(qū)的血管化。目前用于顱骨修補(bǔ)的生長(zhǎng)因子主要包括BMP、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2(fibroblast growth factor-2，F(xiàn)GF-2)以及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)等，其中BMP誘導(dǎo)成骨能力強(qiáng)，但易發(fā)生炎癥反應(yīng)、 異位骨形成，甚至誘發(fā)腫瘤；FGF-2促進(jìn)小動(dòng)脈形成的能力較強(qiáng)，但其誘導(dǎo)成骨能力不確切，在體內(nèi)半衰期也較短；VEGF主要促進(jìn)毛細(xì)血管的形成，但VEGF劑量較高時(shí)會(huì)抑制成骨[36-39]。

3.1BMP BMP是轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β蛋白家族的一員，具有較強(qiáng)的骨誘導(dǎo)活性，其中BMP-2在BTE中的應(yīng)用最廣，且BMP-2在顱骨缺損修復(fù)中的有效性也已得到深入研究[36,40-41]。但BMP-2在應(yīng)用過程中也出現(xiàn)了很多不良反應(yīng)，如炎癥反應(yīng)、異位骨形成甚至誘發(fā)惡性腫瘤形成。有研究發(fā)現(xiàn)，這些不良反應(yīng)的發(fā)生與高劑量的BMP-2(>40 mg)有關(guān)[42-43]。高劑量的BMP-2常用于老年人的骨缺損，老年人隨著年齡的增長(zhǎng)以及機(jī)體對(duì)生長(zhǎng)因子反應(yīng)的降低，普通劑量的BMP-2難以達(dá)到原有的促進(jìn)骨再生的能力。為了促進(jìn)老年人骨缺損區(qū)生長(zhǎng)，同時(shí)又避免發(fā)生高劑量BMP-2可能引發(fā)的不良反應(yīng)，可將BMP-2與其他生長(zhǎng)因子聯(lián)合應(yīng)用。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，低劑量FGF-2聯(lián)合低劑量BMP-2的骨愈合能力優(yōu)于BMP-2單獨(dú)使用，同時(shí)降低了不良反應(yīng)發(fā)生率，提高了生長(zhǎng)因子利用的安全性[44-45]。同時(shí)，Reyes等[46]研究發(fā)現(xiàn)，基質(zhì)金屬蛋白酶10可以通過增強(qiáng)BMP-2促進(jìn)骨愈合并提高礦化速率加速骨修復(fù)，認(rèn)為基質(zhì)金屬蛋白酶10與BMP-2聯(lián)用可能成為治療顱骨缺損修復(fù)和促進(jìn)再生的有效方法。另外，在BTE用于顱骨修補(bǔ)的過程中，作為同屬于BMP家族的BMP-4[47-48]、BMP-6[49]、BMP-7[50-51]以及BMP-9[52-54]在動(dòng)物顱骨缺損模型中也均表現(xiàn)出了良好的骨誘導(dǎo)能力,但關(guān)于各種BMP骨誘導(dǎo)能力的比較仍有待研究。

3.2FGF-2 FGF-2在BTE中的作用主要為促進(jìn)種子細(xì)胞的增殖和分化，其也有誘導(dǎo)新生血管生成的能力，且主要傾向于小動(dòng)脈的形成。Poudel等[37]研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)GF-2可促進(jìn)小鼠胚胎成骨細(xì)胞的增殖、礦化，在缺損區(qū)，與單純可吸收膠原海綿組相比，裝載FGF-2的膠原海綿可顯著增強(qiáng)小鼠顱骨缺損區(qū)的骨愈合。Kwan等[55]研究發(fā)現(xiàn)，通過化學(xué)控制FGF-2的釋放可以顯著增加ADSCs在體內(nèi)的增殖，從而促進(jìn)顱骨缺損的愈合，這也為BTE的研究提供了一種新方法。另外，F(xiàn)GF-2在不同生物活性支架上誘導(dǎo)成骨細(xì)胞增殖分化的能力也不同。有學(xué)者將硅摻入HA支架后，F(xiàn)GF-2仍能保持對(duì)成骨細(xì)胞的生物活性，更重要的是，成骨細(xì)胞在混合支架上的黏附及增殖能力顯著增強(qiáng)[56]。

3.3VEGF 顱骨缺損后骨愈合需要新生血管的滋養(yǎng)，多種生長(zhǎng)因子可促進(jìn)BTE的血管化，其中以VEGF重建血管的能力最強(qiáng)。血管既充當(dāng)骨骼形成的結(jié)構(gòu)模板，又提供骨骼中細(xì)胞外基質(zhì)合成和礦化以及周轉(zhuǎn)所需的必須細(xì)胞、生長(zhǎng)因子和礦物質(zhì)，是骨發(fā)育和修復(fù)的重要前提。VEGF通過調(diào)節(jié)血管生成，有助于骨與血管的偶合，并直接控制成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的分化和功能[38,57]。Behr等[58]研究發(fā)現(xiàn)，VEGF分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞后，一方面可以誘導(dǎo)新生血管生成，另一方面可以通過間隙連接增加堿性磷酸酶活性和骨髓基質(zhì)細(xì)胞的膠原合成，直接刺激骨祖細(xì)胞分化，促進(jìn)成骨。同時(shí)，Behr等[59]對(duì)VEGF的促成骨能力進(jìn)行了比較分析發(fā)現(xiàn)，在顱骨缺損模型中，VEGF與BMP-2在促進(jìn)骨愈合方面具有相似的能力。且VEGF還能與其他生長(zhǎng)因子協(xié)同，加快骨愈合的進(jìn)程。Peng等[60]研究發(fā)現(xiàn)，BMP-4與VEGF在改善骨形成和骨愈合方面具有協(xié)同作用，其作用機(jī)制主要包括增強(qiáng)血管的生成、提高骨再生部位細(xì)胞的存活率以及增加間充質(zhì)干細(xì)胞向骨骼形成和再生部位的聚集。另外，對(duì)于VEGF劑量的選擇，需要注意的是，VEGF含量過高不僅會(huì)增加破骨細(xì)胞向骨再生位點(diǎn)的聚集，而且可導(dǎo)致間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞譜系分化推進(jìn)，減少可用于骨形成和成骨分化的細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)而導(dǎo)致骨骼形成受損[39]。因此，選擇合適劑量的VEGF對(duì)于確保其促成骨作用并防止骨骼愈合中的有害反應(yīng)至關(guān)重要。

4 問題與展望

BTE具有廣闊的應(yīng)用前景。對(duì)于支架的選擇，復(fù)合支架具有成骨能力更強(qiáng)、生物相容性更好、炎癥發(fā)生率更低的特點(diǎn)，彌補(bǔ)了單一支架的不足。在種子細(xì)胞方面，應(yīng)首選成骨效果確切的BMSCs，且通過使用異體源性的干細(xì)胞可以解決BMSCs來源不足的問題，既避免了取材部位的損傷，又能獲取大量的種子細(xì)胞，但需要注意異體細(xì)胞免疫排斥的問題。而ESCs隨著生物技術(shù)的提高以及倫理學(xué)的突破，有望成為最理想的種子細(xì)胞。針對(duì)生長(zhǎng)因子，BMP-2是目前公認(rèn)的最強(qiáng)的骨誘導(dǎo)因子，但對(duì)于其釋放方式的選擇以及劑量的控制是未來需進(jìn)一步改進(jìn)。盡管BTE在顱骨修補(bǔ)方面取得了很大進(jìn)步，大量的支架、種子細(xì)胞、生長(zhǎng)因子已被用于動(dòng)物顱骨缺損模型的研究，但BTE真正應(yīng)用于臨床還需要更多的實(shí)驗(yàn)與評(píng)估。同時(shí)，關(guān)于復(fù)合材料的降解、材料-骨組織界面結(jié)合相容性分析等顱骨修復(fù)過程中的問題也是急需考慮并解決的問題。相信隨著研究的深入，未來BTE可普遍用于臨床，為更多顱骨缺損患者提供幫助。