細(xì)胞外基質(zhì)在肝細(xì)胞性肝癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用

（西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 肝膽外科，四川 瀘州 646000）

肝細(xì)胞性肝癌（HCC）是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤性疾病，其因各種病理原因誘發(fā)，如遺傳因素、肝炎病毒、酒精肝、脂肪肝、肝纖維化、肝硬化等。近年來(lái)微環(huán)境對(duì)癌組織的影響受到重視，其中細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）對(duì)HCC發(fā)生發(fā)展研究逐漸深入，涉及腫瘤的生長(zhǎng)、凋亡、耐藥、侵襲、轉(zhuǎn)移等等。細(xì)胞外基質(zhì)由復(fù)雜的分子網(wǎng)絡(luò)組成，這些分子具有不同的生化特性從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、存活、運(yùn)動(dòng)和分化。它是一個(gè)不斷改建的動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)以維持組織的穩(wěn)態(tài)環(huán)境。其組成部分不斷地相互作用，其隔離和局部釋放生長(zhǎng)因子和其他信號(hào)分子，并作為細(xì)胞受體的配體來(lái)傳遞細(xì)胞黏附、遷移、增殖、凋亡等信號(hào)。此外，細(xì)胞通過(guò)合成、降解、重組和化學(xué)修飾不斷地重建和重構(gòu)ECM，這些過(guò)程是復(fù)雜的，需要嚴(yán)格控制，以維持組織穩(wěn)態(tài)。ECM穩(wěn)態(tài)的喪失被認(rèn)為是癌癥的特征之一，通常定義了腫瘤進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中的過(guò)渡事件。因此，ECM不僅作為腫瘤生長(zhǎng)的結(jié)構(gòu)支撐，更作為腫瘤微環(huán)境的重要組成，參與HCC發(fā)生發(fā)展的過(guò)程[1]。目前對(duì)于ECM的研究已經(jīng)深入基因?qū)用妫塾诰珳?zhǔn)調(diào)控ECM的重塑。并且逐步探索出部分ECM蛋白成分或成分的亞單位，用于幫助臨床上對(duì)于腫瘤疾病的診斷和治療。

1 ECM 蛋白的作用

1.1 纖連蛋白（FN）

FN在細(xì)胞黏附、遷移、生長(zhǎng)和分化中起重要作用。FN能與細(xì)胞外鈣黏蛋白/衰老關(guān)鍵蛋白抗原1（fibulin-1）復(fù)合體相結(jié)合，并依賴(lài)細(xì)胞表面分子syndecan-4和整合素α5β1抑制ERK1/2信號(hào)傳導(dǎo)，進(jìn)而抑制細(xì)胞遷移[2]。纖連蛋白1（FN1）能引發(fā)干擾素-α1型受體（IFNαR1）啟動(dòng)子的多態(tài)性表達(dá)，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)PI3K/Akt信號(hào)通路在HCC細(xì)胞中受到強(qiáng)烈干擾，且該信號(hào)通路可被胞外FN1所觸發(fā)[3]。有研究[4]表示FN1和整合素β1蛋白水平的降低能干擾PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，從而抑制HCC的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移。Xu等[5]確定FN1是HCC細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子CP2（TFCP2）的靶標(biāo)，也是HCC轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵介質(zhì)，同時(shí)TFCP2結(jié)合位點(diǎn)的基序定位于FN1的啟動(dòng)子中。抑制FN1轉(zhuǎn)錄翻譯程序可阻止過(guò)表達(dá)的TFCP2誘導(dǎo)的HCC細(xì)胞侵襲性增加。在富含F(xiàn)N的基質(zhì)上通過(guò)整合素α5β6和α9β1的作用參與實(shí)現(xiàn)了癌細(xì)胞聚集體的遷移。此外，整合素α5β6驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞遷移獨(dú)立于腫瘤細(xì)胞中潛在的轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（TGF-β）激活和Smad依賴(lài)性信號(hào)傳導(dǎo)而發(fā)生[6]。另外發(fā)現(xiàn)結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）和整合素α5β6可能通過(guò)與它們的共同配體信號(hào)：FN基質(zhì)以及信號(hào)伴侶TGF-β1相互作用來(lái)調(diào)節(jié)細(xì)胞的活化和纖維化[7]。同時(shí)，F(xiàn)N與腫瘤微環(huán)境中的其他基質(zhì)細(xì)胞也存在串?dāng)_情況進(jìn)而發(fā)揮促腫瘤作用。例如，在研究腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）在促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中的作用時(shí)[8]，發(fā)現(xiàn)TAM促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移的傾向是由于它們與腫瘤細(xì)胞的復(fù)雜串?dāng)_所致，而這種串?dāng)_主要是由于腫瘤微環(huán)境中腫瘤細(xì)胞分泌的蛋白質(zhì)介導(dǎo)的，并發(fā)現(xiàn)人肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549分泌的包含EDA的纖連蛋白（EDAFN）被鑒定為A549細(xì)胞分泌蛋白組中的一種明顯的免疫原性蛋白，該蛋白與THP-1單核細(xì)胞上的TLR-4結(jié)合，通過(guò)NF-κB信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)驅(qū)動(dòng)促炎反應(yīng)。同時(shí)，EDAFN通過(guò)其自分泌活性誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，從而增強(qiáng)了其轉(zhuǎn)移能力。另外，在研究食管鱗狀細(xì)胞癌時(shí)[9]發(fā)現(xiàn)潛在轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白1（LTBP1）能誘導(dǎo)組織中腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（CAFs）轉(zhuǎn)化，并增強(qiáng)CAF分泌FN1。同時(shí)在頭頸部鱗狀細(xì)胞癌中[10]發(fā)現(xiàn)CAF組裝的FN介導(dǎo)CAF-癌細(xì)胞兩者的關(guān)聯(lián)和定向遷移。CAF通過(guò)增加非肌肉肌球蛋白II-和血小板衍生的生長(zhǎng)因子受體α（PDGFα）介導(dǎo)的細(xì)胞收縮性和牽引力來(lái)匹配基質(zhì)中的FN，并通過(guò)整合素α5β1將FN引發(fā)的胞外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)至胞內(nèi)。有研究[11]發(fā)現(xiàn)FN與耐順鉑的腫瘤細(xì)胞更能發(fā)生黏附，同時(shí)FN能通過(guò)MAPK/p38/ERK1/2信號(hào)通路途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞增殖，并且在順鉑敏感細(xì)胞中以P38磷酸化為主，在順鉑耐藥細(xì)胞中以ERK1/2磷酸化為主。并且同時(shí)發(fā)現(xiàn)了FN調(diào)控P53磷酸化促進(jìn)順鉑敏感腫瘤細(xì)胞的凋亡。但是纖連蛋白在HCC發(fā)生發(fā)展中并不都是負(fù)面作用，例如，有研究[12]發(fā)現(xiàn)FN的Arg-Gly-Asp（RGD）基序與整合素β1之間的相互作用被跨膜糖蛋白CD147與整合素β1競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)核而中斷。而CD147與整合素β1結(jié)合后激活下游信號(hào)通路并增強(qiáng)腫瘤惡性，而ECM中包覆的FN增強(qiáng)了E-鈣黏蛋白和Par3的表達(dá)，從而防止因CD147誘導(dǎo)的E-鈣黏蛋白泛素化及Par3降解/β-catenin核轉(zhuǎn)位通路引發(fā)的細(xì)胞極性丟失。Kim等[13]證明血清中甲胎蛋白（AFP）和FN1的組合可提高診斷HCC的準(zhǔn)確性，特別是對(duì)于區(qū)分AFP水平正常的HCC患者，從而可以幫助判斷HCC早期患者的病情進(jìn)展。

1.2 層粘連蛋白（LN）

HCC在富含肝星狀細(xì)胞（HSC）產(chǎn)生的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白，包括LN在內(nèi)的微環(huán)境中發(fā)展。層粘連蛋白根據(jù)其蛋白鏈（α鏈、β鏈、γ鏈）組成不同而命名。在研究[14]發(fā)現(xiàn)LM-332對(duì)胰腺導(dǎo)管腺癌（PDAC）的作用時(shí)LM-332的多個(gè)亞基單位中，α3、β3和γ2在腫瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）中的發(fā)揮著不同作用。層粘連蛋白332（LM-332）為整合素α3β1和α6β4的配體，可向細(xì)胞內(nèi)傳遞生物信號(hào)。研究[15]發(fā)現(xiàn)LM-332在黏著斑激酶（FAK）的泛素化參與下，通過(guò)整合素α3β1途徑誘導(dǎo)HepG3細(xì)胞耐索拉菲尼。同時(shí)，LM-332可增加角蛋白K19表達(dá)[16]，使mTOR磷酸化并降低磷酸化組蛋白H3表達(dá)，這表明LM-332可使細(xì)胞有絲分裂減少。從而發(fā)現(xiàn)LM-332可維持和支持細(xì)胞“干性”，并導(dǎo)致HCC細(xì)胞的化學(xué)抗性。層粘連蛋白α3亞基（LAMA3）的基因突變與口腔鱗狀細(xì)胞癌（OSCC）的侵襲性相關(guān)[17]。并有研究團(tuán)隊(duì)[18-19]指出LM-332的亞基LN-γ2鏈可能是HCC監(jiān)測(cè)的潛在生物標(biāo)志物。通過(guò)免疫組化也證實(shí)[20]LN-γ2鏈?zhǔn)强谇簧圜[狀細(xì)胞癌（OTSCC）不良預(yù)后的指標(biāo)。血清中LN-γ2和去γ-羧基凝血酶原（DCP）的組合對(duì)于HCC的實(shí)驗(yàn)室診斷可能更敏感。層粘連蛋白β1（LAMB1）能夠被PDGFRα信號(hào)的激活而觸發(fā)細(xì)胞核中干燥綜合征B抗原（La/SSB）向細(xì)胞質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)，通過(guò)激活其內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點(diǎn)增強(qiáng)了LAMB1蛋白質(zhì)合成，進(jìn)而導(dǎo)致層黏連蛋白111（LN-111）的分泌增加。同時(shí)LAMB1/LN-111刺激了整合素α2β1（ITG）依賴(lài)性的粘著斑激酶FAK/Src原癌基因非受體酪氨酸激酶信號(hào)傳導(dǎo)，它還促進(jìn)了ITG特異性下游靶標(biāo)Rho相關(guān)的蛋白激酶2（ROCK2）的卷曲螺旋，以自分泌方式誘導(dǎo)K19表達(dá)，促進(jìn)侵襲偽足形成和細(xì)胞侵襲[21]。LAMC1 mMRNA編碼層粘連蛋白γ1鏈，LAMC1的過(guò)表達(dá)預(yù)示不良預(yù)后并增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲和遷移。同時(shí)發(fā)現(xiàn)miR-124負(fù)調(diào)節(jié)LAMC1蛋白表達(dá)，抑制HCC細(xì)胞的遷移和侵襲。但LAMC1 miRNA應(yīng)答元件（MRE）通過(guò)吸收miR-124，促進(jìn)CD151（有促腫瘤效應(yīng)）表達(dá)，從而促進(jìn)了HCC惡性腫瘤的發(fā)生[22-23]。另外，層粘連蛋白受體（LR）能與色素上皮衍生因子（PEDF）相互作用[24]，通過(guò)ERK1/2信號(hào)通路導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)變化，如N-cadherin和slug的上調(diào)，E-cadherin的下調(diào)，從而介導(dǎo)HCC細(xì)胞的遷移和侵襲。

1.3 透明質(zhì)酸（HA）

HA是糖胺聚糖家族的一員。有研究[25]表明，HA受體CD44，在暴露于致癌物的肝細(xì)胞中通過(guò)STAT3軸依賴(lài)的方式誘導(dǎo)其表達(dá)。一旦表達(dá)，CD44加強(qiáng)AKT活化以誘導(dǎo)Mdm2的磷酸化和核轉(zhuǎn)位，并終止p53應(yīng)答、逃離細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡。這使得DNA損傷的肝細(xì)胞能夠逃避p53誘導(dǎo)的死亡和衰老，并對(duì)增殖信號(hào)做出反應(yīng)，這些信號(hào)促進(jìn)細(xì)胞突變的固定，并將其傳遞給子細(xì)胞，進(jìn)而成為HCC的祖細(xì)胞。同時(shí)，Gao等[26]證實(shí)CD44的敲除可導(dǎo)致HCC細(xì)胞MET，并抑制遷移和侵襲。同時(shí)證明該作用至少部分是通過(guò)抑制ERK/Snail途徑實(shí)現(xiàn)的。另有多項(xiàng)研究[27-28]表明，透明質(zhì)酸介導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)受體（HMMR) 的基因是與非酒精性脂肪性肝炎（NASH）和HCC相關(guān)的關(guān)鍵基因，且其在HCC中的mRNA和蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)。HMMR通過(guò)激活G1/S和G2/M檢查點(diǎn)轉(zhuǎn)換來(lái)促進(jìn)體外HCC細(xì)胞增殖，同時(shí)伴隨著促細(xì)胞周期調(diào)節(jié)劑（包括細(xì)胞周期蛋白D1、細(xì)胞周期蛋白E和細(xì)胞周期蛋白B1）的顯著增加。且與臨床病理特征相比，HMMR的表達(dá)是一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后因素，HMMR高表達(dá)的患者預(yù)后較差。另一類(lèi)透明質(zhì)酸受體[29]RHAMM能夠被HBx通過(guò)激活了PI3K/Akt/Oct-1途徑而表達(dá)上調(diào)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞定居，導(dǎo)致轉(zhuǎn)移作用增強(qiáng)。當(dāng)透明質(zhì)酸（HA）與膠原蛋白同時(shí)存在并作為細(xì)胞的培養(yǎng)基時(shí)，只需要相當(dāng)柔軟的基質(zhì)（300Pa）硬度就能引發(fā)HCC細(xì)胞Huh7擴(kuò)散，導(dǎo)致細(xì)胞的生長(zhǎng)、形態(tài)和運(yùn)動(dòng)方式類(lèi)似于這些細(xì)胞在堅(jiān)硬的基質(zhì)（＞30 kPa）上的方式。并且證實(shí)HA和整合素配體（如膠原蛋白1）刺激的同步信號(hào)可以產(chǎn)生肌醇磷脂介導(dǎo)的細(xì)胞骨架信號(hào)，如PIP2/PIP3表達(dá)增加，進(jìn)而誘導(dǎo)PI3K/Akt及其下游信號(hào)通路來(lái)介導(dǎo)細(xì)胞骨架收縮，細(xì)胞黏附、遷移、增殖等生物活動(dòng)[30]。還有研究[31]表明來(lái)源于HCC組織中的HA能夠觸發(fā)了腫瘤微環(huán)境中嗜中性粒細(xì)胞的功能性自噬特異性蛋白（LC3）和自噬體的顯著增加，同時(shí)發(fā)現(xiàn)抑制Erk1/2、p38和NF-κB信號(hào)的激活可以顯著減弱這種腫瘤引起的嗜中性粒細(xì)胞自噬。這種自噬還與MMP-9的持續(xù)產(chǎn)生以及癌細(xì)胞的晚期遷移有關(guān)。表明抑制這種自噬能有效抑制HCC發(fā)生發(fā)展。另外，有團(tuán)隊(duì)[32]在研究透明質(zhì)酸中加入TGF-β作為人工硬度可調(diào)的生化及物理?xiàng)l件共存的ECM。并證明固定有TGF-β1（i-TGF）的僵硬基質(zhì)是誘導(dǎo)細(xì)胞出現(xiàn)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化唯一條件，其中i-TGF增加了特定的TGF-β1受體（TβRI）的表達(dá)以激活PI3K途徑，并擴(kuò)大細(xì)胞黏附以誘導(dǎo)整合素β1的表達(dá)增加。然后通過(guò)整合素β1/vinculin/p-FAK途徑增強(qiáng)機(jī)械轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致PI3K活化。以此證明ECM的化學(xué)和物理機(jī)械信號(hào)同時(shí)對(duì)HCC細(xì)胞產(chǎn)生的影響。而一項(xiàng)涉及316例患者的回顧性分析[33]也表明了細(xì)胞透明質(zhì)酸與腫瘤的不良特征和預(yù)后不良顯著相關(guān)。

1.4 膠原蛋白

膠原蛋白是ECM的主要結(jié)構(gòu)蛋白。膠原蛋白纖維為細(xì)胞外基質(zhì)提供抗拉強(qiáng)度，限制組織的膨脹性。HCC組織中的膠原蛋白有多重類(lèi)型。I型膠原蛋白α1（COL1A1）[34]是I型膠原蛋白的主要成分，COL1A1賦予HCC細(xì)胞生存優(yōu)勢(shì)和增強(qiáng)的致癌性。siRNA介導(dǎo)的COL1A1表達(dá)沉默（siCOLIA1），siCOL1A1通過(guò)減弱干性標(biāo)志物SOX2，OCT4和CD133的表達(dá)，消除了依賴(lài)Slug的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）和HCC干性基因標(biāo)記，從而抑制了HCC細(xì)胞的增殖克隆性，運(yùn)動(dòng)性，侵襲性和腫瘤球的形成。III型膠原蛋白相關(guān)分子[35-36]：III型前膠原的N端前肽（PIIINP）可在血液中檢測(cè)出來(lái)，并證明了該生物標(biāo)志物的測(cè)量可能是成年人和兒童非酒精性脂肪肝存在肝纖維化的可靠證據(jù)。VI型膠原蛋白alpha3（Col6a3）是肝纖維化的生物標(biāo)志物[37]，其裂解形式內(nèi)啡肽（ETP）在脂肪組織功能障礙，胰島素抵抗和乳腺癌的發(fā)展中起著至關(guān)重要的作用。ETP在非酒精性脂肪肝疾?。∟AFLD）的發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色，并且在非酒精性脂肪性肝炎（NASH）和肝細(xì)胞癌（HCC）的發(fā)生中起重要作用，以此證明ETP水平升高與慢性肝病有緊密聯(lián)系。由肝星狀細(xì)胞HSC自分泌的膠原三螺旋重復(fù)序列1（CTHRC1）[38]在肝纖維化中顯著上調(diào)，其促進(jìn)HSC從靜止?fàn)顟B(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)榛罨癄顟B(tài)，并通過(guò)激活TGF-β信號(hào)傳導(dǎo)增強(qiáng)HSC的遷移。膠原蛋白形成過(guò)程中的關(guān)鍵酶是P4HA2[39]，NF-κB可以與P4HA2的啟動(dòng)子結(jié)合以激活其轉(zhuǎn)錄，同時(shí)lncRNA LMCD1-AS1充當(dāng)let-7g的分子海綿，以轉(zhuǎn)錄后誘導(dǎo)let-7g的靶基因即P4HA2表達(dá)，所以可通過(guò)抑制NF-κB/P4HA2和LMCD1-AS1/let-7g/P4HA2來(lái)抑制異常的膠原蛋白沉積而減輕肝纖維化。有研究[40]表示膠原蛋白同族體3（Shc3）表達(dá)與微血管浸潤(rùn)，癌癥分期和不良預(yù)后相關(guān)。其與主要穹頂?shù)鞍紫嗷プ饔?，?dǎo)致獨(dú)立于Shc1和c-Raf的MEK1/2和ERK1/2激活，并誘導(dǎo)了上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，促進(jìn)了HCC細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。Shc3異位表達(dá)與MVP/MEK/ERK形成復(fù)合物，增強(qiáng)ERK的活化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖并在HCC索拉菲尼耐藥中發(fā)揮重要作用。腫瘤在生長(zhǎng)中的微環(huán)境是動(dòng)態(tài)和非線性的生態(tài)系統(tǒng)，其中的癌細(xì)胞適應(yīng)其局部微環(huán)境，這些適應(yīng)進(jìn)一步改變了微環(huán)境，引發(fā)了更多變化。例如導(dǎo)管原位癌[41]（DCIS）的無(wú)血管特征使管腔周壁呈酸性，癌細(xì)胞必須適應(yīng)這種酸性環(huán)境才能生存。初期癌癥中的酸性環(huán)境會(huì)誘導(dǎo)癌細(xì)胞本身產(chǎn)生膠原蛋白，并通過(guò)與ECM重塑酶（如TGM2和LOXL2）的交聯(lián)，重塑腫瘤微環(huán)境以適應(yīng)酸性環(huán)境而促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。且有研究[42]提出DCIS病變周?chē)z原組織與疾病的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。另一個(gè)因產(chǎn)生膠原蛋白而使微環(huán)境改變以促腫瘤生長(zhǎng)的例子[43]是在慢性乙型肝炎病毒（HBV）引發(fā)的HCC組織中，HBV編碼的蛋白X（HBx）可通過(guò)缺氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）/賴(lài)氨酰氧化酶（LOX）途徑調(diào)控膠原蛋白的沉積，從而參與ECM重塑改變腫瘤微環(huán)境以促進(jìn)HCC轉(zhuǎn)移。

2 ECM 硬度對(duì)HCC的作用

除了上述ECM中的重要蛋白組分作為化學(xué)信號(hào)影響著HCC細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展，也有ECM的物理機(jī)械信號(hào)在改變細(xì)胞的生物學(xué)活動(dòng)。有研究團(tuán)隊(duì)[44]發(fā)現(xiàn)更硬的細(xì)胞外基質(zhì)環(huán)境可以促進(jìn)非編碼RNA miR-3682-3p的表達(dá)，其標(biāo)靶并抑制PHLDA1的表達(dá)進(jìn)而抑制癌細(xì)胞凋亡并促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。在HCC組織中的HSC中[45]，基質(zhì)硬度的增加通過(guò)RHOA激活PI3K/Akt信號(hào)傳導(dǎo)以誘導(dǎo)E1結(jié)合蛋白p300的磷酸化，并使p300發(fā)生核轉(zhuǎn)位，在那里它上調(diào)了能使HSC活化和轉(zhuǎn)移增強(qiáng)的基因的轉(zhuǎn)錄，比如CXCL2基因的轉(zhuǎn)錄，證明ECM硬度增加能誘導(dǎo)HSC活化為肌成纖維細(xì)胞。較高的基質(zhì)剛度能夠顯著增強(qiáng)惡性表型并獨(dú)立誘導(dǎo)HCC細(xì)胞中EMT的發(fā)生，且有三個(gè)信號(hào)通路共同聚集于Snail的表達(dá)來(lái)參與了硬度介導(dǎo)的EMT作用，包括整合素介導(dǎo)的S100A11膜易位，eIF4E磷酸化和TGFβ1自分泌三個(gè)通路，從而參與HCC細(xì)胞的侵襲和遷移[46]。還發(fā)現(xiàn)基質(zhì)硬度增加通過(guò)CX C4型趨化因子受體（CXCR4）降低UBTD1的水平[47]，UBTD1參與了蛋白酶體依賴(lài)性的主要細(xì)胞機(jī)械換能器YAP的降解。所以當(dāng)UBTD1水平下降，YAP降解過(guò)程受阻，導(dǎo)致針對(duì)YAP的基因和YAP下游信號(hào)的激活。并且CXCR4增加了基質(zhì)硬度，介導(dǎo)增殖、EMT并維持細(xì)胞干性。同時(shí)，發(fā)現(xiàn)ECM誘導(dǎo)的JNK和p38/MAPK信號(hào)通路誘導(dǎo)YAP激活的過(guò)程在促進(jìn)HCC細(xì)胞的有氧糖酵解和細(xì)胞遷移中起主要作用。有實(shí)驗(yàn)[48]證明較高的基質(zhì)硬度能通過(guò)整合素β1/α5/JNK/c-JUN信號(hào)通路誘導(dǎo)HCC細(xì)胞中的賴(lài)氨酸氧化酶樣2（LOXL2）上調(diào)。LOXL2促進(jìn)纖連蛋白的產(chǎn)生及MMP-9和CXCL12的表達(dá)以及骨髓來(lái)源樹(shù)突狀細(xì)胞（BMDC）的募集以協(xié)助細(xì)胞轉(zhuǎn)移前微環(huán)境的形成?；|(zhì)硬度可能通過(guò)激活整合素β1/Akt/mTOR/SOX2信號(hào)通路參與HCC的干性特征的調(diào)節(jié)過(guò)程[49]。ECM硬度增加下調(diào)了MMP-9的表達(dá)和分泌，而導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)無(wú)法正常降解，同時(shí)上調(diào)了TIMP-1的分泌（不是HSC分泌）更加促進(jìn)了基質(zhì)硬度的增加。同時(shí)觀察到肝細(xì)胞癌相關(guān)的纖維化組織中活化的HSC中MMP-9的表達(dá)顯著降低也從側(cè)面證實(shí)基質(zhì)硬度增加與HSC調(diào)控的MMP-9/TIMP-1比例失調(diào)在肝纖維化持續(xù)存在（正反饋效應(yīng)）之間的聯(lián)系[50]。

3 展 望

HCC的進(jìn)展受到細(xì)胞外基質(zhì)的多重因素影響和調(diào)控，在無(wú)法盲目降解或敲除ECM中任意蛋白成分（可能會(huì)促進(jìn)HCC的轉(zhuǎn)移）的情況下，找到某種特定的方法而靶向調(diào)節(jié)ECM中成分，精準(zhǔn)控制ECM重塑，成為了目前臨床及基礎(chǔ)研究中重點(diǎn)和難點(diǎn)。同時(shí)，現(xiàn)階段的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)仍然缺乏完整有效且合適的ECM模型來(lái)模擬HCC細(xì)胞的生長(zhǎng)環(huán)境，當(dāng)前實(shí)驗(yàn)研究更多只是研究單一的或幾種組合的ECM蛋白成分對(duì)HCC細(xì)胞的作用，這無(wú)法全面探索ECM整體與HCC細(xì)胞之間的相互作用，所以探索并盡可能模擬出完整的ECM蛋白微環(huán)境，用以培養(yǎng)HCC細(xì)胞以探究ECM多成分對(duì)細(xì)胞的作用是未來(lái)可行的研究方向。隨著大數(shù)據(jù)時(shí)代的到來(lái)，基因工程和程序化研究應(yīng)合理利用起來(lái)，結(jié)合臨床案例，尋找更多對(duì)于調(diào)控ECM成分有效的基因組，推動(dòng)精準(zhǔn)調(diào)控HCC微環(huán)境成分的研究和發(fā)展。