60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑高效液相色譜分析方法研究

韋沙迪，張小敏，夏姍姍，莫俊銳，石偉賢，王愛臣

(惠州市銀農(nóng)科技股份有限公司，惠州 516257)

60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑是一種混配殺菌劑，其有效成分為氟嗎啉{flumorph，(E,Z)-4-[3-(4-氟苯基)-3-(3, 4-二甲氧基苯基)丙烯酰]嗎啉}和唑嘧菌胺{ametoctradin，5-乙基-6-辛基[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-7-胺}，其結(jié)構(gòu)式如下：

惠州市銀農(nóng)科技股份有限公司開展了氟嗎啉和唑嘧菌胺復(fù)配干懸浮劑用于葡萄霜霉病和馬鈴薯晚疫病的防治研究。目前有關(guān)氟嗎啉和唑嘧菌胺干懸浮劑的分析方法未見報道。本文采用高效液相色譜法測定了60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑中的有效成分含量。該方法具有操作簡便、快速、分離效果好等特點，準確度和精密度均能達到定量分析的要求，可作為企業(yè)生產(chǎn)過程中該產(chǎn)品質(zhì)量控制方法。

1 試驗部分

1.1 儀器

Waters e2695型高效液相色譜儀配2489型紫外檢測器及 Empower 3色譜工作站和自動進樣器；JP040S超聲波清洗機(深圳潔盟超聲波設(shè)備有限公司)；XSE205DU型分析天平(0.01 mg，德國梅特勒)；ZORBAX Extend-C18色譜柱(5 μm，250 mm×4.6 mm，不銹鋼柱)。

1.2 試劑

氟嗎啉標(biāo)樣(質(zhì)量分數(shù)≥99.2%，國家農(nóng)藥質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心)；唑嘧菌胺標(biāo)樣(質(zhì)量分數(shù)≥99.7%，德國 Dr.Ehrenstorfer)；甲醇(色譜純，Merck)；水：新蒸二次蒸餾水。

1.3 液相色譜操作條件

流動相：對甲醇(流動相A)與水(流動相B)比例進行梯度設(shè)定[1-2]，見表 1。流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；檢測波長：236 nm；進樣體積：5 μL。在上述色譜條件下，氟嗎啉E-體、氟嗎啉Z-體和唑嘧菌胺的保留時間分別約為7.7、8.9、14.5 min。

表1 流動相A和B的比例

上述操作參數(shù)是典型的，可根據(jù)不同儀器特點，對給定的操作參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果。典型的氟嗎啉標(biāo)樣、唑嘧菌胺標(biāo)樣和60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑試樣高效液相色譜圖分別見圖 1、圖2。

圖1 氟嗎啉和唑嘧菌胺標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑試樣高效液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標(biāo)樣溶液的配制

分別稱取0.05 g氟嗎啉標(biāo)樣和0.05 g唑嘧菌胺標(biāo)樣(精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇，超聲5 min使溶解，冷卻至室溫，再用甲醇定容，以0.45 μm的濾頭過濾備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

稱取含氟嗎啉0.05 g的試樣(精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，加入40 mL甲醇，超聲5 min使其溶解，冷卻至室溫，再用甲醇定容，以0.45 μm濾頭過濾備用。

1.4.3 測定

在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針的相對響應(yīng)值變化小于1.5%，即可按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進行測定，記錄峰面積。

1.4.4 計算

將測得的2針試樣溶液及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的氟嗎啉(或唑嘧菌胺)峰面積分別進行平均，試樣中氟嗎啉(或唑嘧菌胺)的質(zhì)量分數(shù)X(%)按下式計算：

式中：A1為2針標(biāo)樣溶液中氟嗎啉(或唑嘧菌胺)峰面積的平均值；A2為2針試樣溶液中氟嗎啉(或唑嘧菌胺)峰面積的平均值；m1為氟嗎啉(或唑嘧菌胺)標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；P為標(biāo)樣中氟嗎啉(或唑嘧菌胺)的質(zhì)量分數(shù)，%。

1.4.5 允許差

2次平行測定結(jié)果之差，氟嗎啉、唑嘧菌胺均應(yīng)不大于0.5%，取其算術(shù)平均值為測定結(jié)果。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

通過島津LC-20AT高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得氟嗎啉和唑嘧菌胺的紫外波長掃描圖。由圖3可知氟嗎啉和唑嘧菌胺最大吸收波長分別在236 nm和292 nm左右，如果選擇唑嘧菌胺的最大吸收波長292 nm作為檢測波長，色譜圖中唑嘧菌胺的峰響應(yīng)太高，氟嗎啉的響應(yīng)值過低，而選擇236 nm作為檢測波長時，二者響應(yīng)值接近，所以將檢測波長定為236 nm。色譜柱選擇常用的反相填料ZORBAX Extend-C18柱。流動相選擇甲醇和水，對二者不同比例進行試驗發(fā)現(xiàn)當(dāng)甲醇比例較高時氟嗎啉和唑嘧菌胺出峰較快，氟嗎啉異構(gòu)體和雜質(zhì)難以達到基線分離；當(dāng)甲醇比例較低時二者出峰較慢時，氟嗎啉異構(gòu)體和雜質(zhì)可以實現(xiàn)基線分離，但唑嘧菌胺出峰太慢，非常不利于樣品的日常檢驗；而在梯度濃度洗脫下，氟嗎啉異構(gòu)體與雜質(zhì)既能得到很好的分離，峰形對稱，基線平穩(wěn)，又分析時間較短，利于日常生產(chǎn)監(jiān)控，工作效率提高。

圖3 氟嗎啉和唑嘧菌胺的紫外波長掃描圖

2.2 線性關(guān)系

準確稱取0.052 48 g氟嗎啉標(biāo)樣、0.051 26 g唑嘧菌胺標(biāo)樣，置于25 mL量瓶中，移取上述標(biāo)樣母液0.5、2.5、5、7.5 mL分別于不同的10 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，制成濃度為10%～200%的線性溶液。在上述HPLC操作條件下，測定溶液。以標(biāo)樣溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準曲線。試驗測得氟嗎啉線性方程Y=152 24.403 3x+3 540.243 5，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 9，唑嘧菌胺線性方程Y=2 898.827 0x-1 481.019 1，線性相關(guān)系數(shù)為：0.999 9。

2.3 分析方法的精密度試驗

60%氟嗎啉·唑嘧菌胺干懸浮劑中氟嗎啉占比30%、唑嘧菌胺占比30%。準確稱取5份60%氟嗎啉?唑嘧菌胺干懸浮劑試樣，在上述色譜操作條件下進行分析，氟嗎啉精密度的標(biāo)準偏差為0.12%，變異系數(shù)為0.39%；唑嘧菌胺精密度的標(biāo)準偏差為0.17%，變異系數(shù)為0.59%。

圖4 氟嗎啉線性關(guān)系圖

圖5 唑嘧菌胺線性關(guān)系圖

2.4 分析方法的準確度試驗

首先，按照配方比例要求，將除氟嗎啉、唑嘧菌胺原藥外的所有成分混合，攪拌均勻，為制劑空白。再稱取0.05 g氟嗎啉、0.05 g唑嘧菌胺原藥，按制劑標(biāo)稱值添加到制劑空白中，按照上述方法共制成5個樣品，分別對每個樣品中的氟嗎啉、唑嘧菌胺含量進行測定。氟嗎啉和唑嘧菌胺平均回收率分別為99.4%、99.6%，該方法回收率良好，測定結(jié)果準確可靠。

3 結(jié) 論

試驗結(jié)果表明氟嗎啉濃度為104.96～2 099.20 μg/mL(r=0.999 9)、唑嘧菌胺濃度為102.50～2 050.40 μg/mL(r=0.999 9)時，本方法線性關(guān)系良好；氟嗎啉和唑嘧菌胺精密度變異系數(shù)分別為：0.59%和0.39%；氟嗎啉和唑嘧菌胺的平均回收率分別為99.4%和99.6%。本方法的準確度和精密度較高，線性關(guān)系良好，其具有簡便、快速、準確及分離效果好的優(yōu)點，是一種可行的分析方法。