密花豆的保育學(xué)研究進(jìn)展△

朱艷霞，林楊，黃燕芬，秦雙雙，韋坤華

廣西壯族自治區(qū)藥用植物園 廣西藥用資源保護(hù)與遺傳改良重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣西 南寧 530023

雞血藤是豆科密花豆屬（Spatholobus）植物密花豆Spatholobus suberectusDunn 的干燥藤莖，具有補(bǔ)血活血、調(diào)經(jīng)止痛、舒筋活絡(luò)的功效，主治月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)、經(jīng)閉、風(fēng)濕痹痛、麻木癱瘓、血虛萎黃[1]，始載于清代《本草備要》[2]。近代研究表明，雞血藤主要化學(xué)成分包括黃酮類（如芒柄花素、黃苷草苷、芒柄花苷、染料木素等）、萜類、甾醇類、蒽醌類、木脂素類、香豆素類、酚酸類等成分，具有調(diào)節(jié)血液系統(tǒng)、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、抗菌、抑制黑色素沉著等多種藥理活性[3]。雞血藤顆粒、花紅片、正天丸、婦科千金片等200 多個(gè)中成藥的原料中均包含雞血藤，市場(chǎng)用量較大[4]。隨著醫(yī)藥行業(yè)對(duì)雞血藤相關(guān)產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)，其市場(chǎng)需求量不斷加大，過(guò)度采挖導(dǎo)致我國(guó)野生資源十分短缺，商品藥材多從越南、緬甸、柬埔寨進(jìn)口。因此，了解密花豆資源現(xiàn)狀、掌握其生長(zhǎng)發(fā)育規(guī)律、加強(qiáng)保育學(xué)研究，對(duì)促進(jìn)雞血藤產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展、實(shí)現(xiàn)資源可持續(xù)利用具有重要意義。

1 資源現(xiàn)狀

密花豆屬植物約40 種，其中密花豆為我國(guó)特產(chǎn)，主要分布于云南、廣西、廣東和福建等地海拔800～1700 m 的山地疏林、密林溝谷或灌叢中[5]。廣東境內(nèi)野生資源主要分布于粵北、粵東北、粵中及粵西山區(qū)；廣西境內(nèi)主要分布于賀州、玉林、梧州、防城港等南部地區(qū)的山地林中；云南主要分布于云南南部地區(qū)；福建也有少量分布。其中，廣東、廣西境內(nèi)野生種群多生長(zhǎng)于不易到達(dá)的深山林中，資源已瀕臨枯竭；云南的野生種群保存較好，但資源蘊(yùn)藏量較少[6]。

經(jīng)市場(chǎng)調(diào)查，目前我國(guó)安國(guó)、亳州、荷花池、玉林四大藥材市場(chǎng)上的雞血藤藥材主要從越南、緬甸、柬埔寨等東盟國(guó)家進(jìn)口，統(tǒng)貨批發(fā)價(jià)為9～10 元/kg，選貨為11～12 元/kg，大貨主要供應(yīng)華潤(rùn)三九醫(yī)藥股份有限公司、北京同仁堂股份有限公司、廣西靈峰藥業(yè)有限公司等藥品生產(chǎn)企業(yè)，市場(chǎng)年需求量約1～2萬(wàn)t。

2 遷地保育

2.1 密花豆生物學(xué)特性

密花豆為大型木質(zhì)藤本，喜纏繞，不耐寒，稍耐陰，喜歡深厚、肥沃、濕潤(rùn)、疏松、排水良好的林間熟地，但在貧瘠干旱的地方也能夠生長(zhǎng)，適應(yīng)性比較強(qiáng)，具有較好的抗逆性能力。其幼年生長(zhǎng)較慢，3～4年后可迅速生長(zhǎng)[7]。花期6月，果期11—12月，結(jié)實(shí)率低，莢果近鐮形，長(zhǎng)8～11 cm，含種子1 粒，種子扁長(zhǎng)圓形，長(zhǎng)約18.19 mm，寬約8.93 mm，厚5.06 mm，千粒質(zhì)量537.53 g[8]。新鮮種子含水量27.27%，發(fā)芽率96.70%，隨種子含水量的降低其發(fā)芽率逐漸降低，當(dāng)含水量為12.08%時(shí)，發(fā)芽率降至70.00%[9]。

2.2 引種馴化

2.2.1 引種材料 采用種子繁殖的密花豆于12 月采收成熟種子，隨采隨播；采用扦插繁殖的密花豆全年均可進(jìn)行繁殖，從生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的母株上剪取長(zhǎng)20～25 cm 且?guī)?～3 個(gè)芽的木質(zhì)化枝條作插穗。

2.2.2 物候期觀察 通過(guò)對(duì)引種到廣西藥用植物園的密花豆長(zhǎng)期觀察得出，扦插苗苗期生長(zhǎng)比較緩慢，扦插后約20～30 d 插條陸續(xù)生根及萌芽，50～60 d 插條平均生根可達(dá)3 條以上。育苗3～6 個(gè)月后，在苗高>40 cm 時(shí)移栽。移栽后第一年，植株灌木狀，主藤莖長(zhǎng)1～2 m，人工輔助牽引使其纏繞上高大喬木或藤架，全年生物量積累為1～2 kg/株。移栽后第二年，主藤莖長(zhǎng)3～4 m，側(cè)枝增至2～4 條，生物量積累至4～6 kg/株。移栽后第三年，生長(zhǎng)速度加快，主藤莖徒長(zhǎng)，長(zhǎng)可達(dá)10 m 以上，基部莖粗2 cm 左右，生物量積累至10 kg/株以上。移栽后第四至十年，側(cè)枝數(shù)不斷增加，主莖優(yōu)勢(shì)不明顯，每年5—9 月為快速生長(zhǎng)期，11 月至次年2 月為緩慢生長(zhǎng)期，基部莖粗2～5 cm，藤莖長(zhǎng)20～40 m，生物量積累至40 kg/株以上，樹(shù)冠面積可達(dá)20 m2以上。

2.2.3 生態(tài)適應(yīng)性 密花豆的生態(tài)適應(yīng)性較強(qiáng)，山林間、溪邊及灌叢均可生長(zhǎng)。席飛飛等[10]研究表明，在火龍果和荔枝樹(shù)下栽培5 年的雞血藤植株表現(xiàn)出良好的適應(yīng)性，但火龍果樹(shù)下栽培的雞血藤存活率、生物量、生理生化指標(biāo)等均明顯高于荔枝樹(shù)下栽培的雞血藤。葉面噴施25 mg·L-1硫酸鋅+50 mg·L-1硼砂能促進(jìn)黃酮類化合物的積累[11]。施用添加適量硼砂的農(nóng)家肥較有利于醇溶性浸出物、總黃酮、原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素的含量的形成與積累[12]。李斌等[13]研究表明，隨著栽培年限的增加，總黃酮的含量有逐漸增加的趨勢(shì)，但均低于廣西野生品。呂惠珍等[14]研究表明，隨著栽培年限的增加，水浸出物含量也有逐漸增加的趨勢(shì)。

2.3 種苗繁育

2.3.1 扦插繁殖 由于密花豆結(jié)實(shí)率低，難以獲得大量種子，因此生產(chǎn)上常用無(wú)性繁殖。密花豆插穗生根類型為皮部生根型，生根較容易。扦插繁殖是密花豆最常見(jiàn)的繁殖方式。黃雪彥等[15]研究表明，扦插最佳條件為300 mg·L-1的ABT1 號(hào)生根粉浸泡2 h，選用具有2～3 個(gè)芽體的木質(zhì)化硬枝，于春季扦插于珍珠巖或砂壤質(zhì)黃心土，生根率>87%。謝金蘭等[16]研究表明，以1～3 年生粗度>0.8 cm 的木質(zhì)化枝條做插穗，用500 mg·L-1雙吉爾生根粉（GGR）浸泡插穗基部1 h，于春季扦插于黃心土的育苗基質(zhì)上，生根效果最好。曲芬霞等[17]研究表明，利用8年生以下、莖粗為0.7～1.0 cm 的木質(zhì)化枝條做插穗，100 mg·L-1的吲哚丁酸（IBA）和200 mg·L-1ABT2號(hào)生根粉混合溶液浸泡2 h，于12 月下旬至次年1 月中旬扦插效果最佳。蘇輝蘭等[18]研究表明，育苗基質(zhì)以泥炭土-蛭石（1∶1）為佳，50 mg·L-1吲哚乙酸（IAA）浸泡插穗1 h后生根率最好，可達(dá)4.36條/株。榮廣天等[19]研究表明，選擇木質(zhì)化程度高的枝條為插穗，用300 mg·L-1萘乙酸（NAA）浸泡30 min，能較大程度的提高成活率。蘆進(jìn)財(cái)[20]對(duì)雞血藤扦插苗的質(zhì)量進(jìn)行了分級(jí)，初步得出以苗高、分枝數(shù)、莖粗為分級(jí)指標(biāo)，一等苗苗高>7.4 cm、分枝數(shù)>3、莖粗>3.49 mm，二等苗苗高1.6～7.3 cm、分枝數(shù)2～3、莖粗2.38～3.48 mm，不合格苗苗高≤1.5 cm、分枝數(shù)≤1、莖粗≤2.37 mm。

2.3.2 壓條繁殖 密花豆藤莖長(zhǎng)，分枝多，且多年生植株的匍匐枝條較多，適于壓條繁殖。盧沅沅等[21]選用當(dāng)年生木質(zhì)化枝條于11 月作壓條處理，15～30 d可見(jiàn)白色細(xì)嫩的根系，次年開(kāi)春即可剪下枝條栽植，壓條繁殖的生根速度較快，但繁殖效率較低。

2.3.3 組培繁殖 密花豆枝條的汁液多，組織培養(yǎng)時(shí)材料易發(fā)生褐化。吳桂容等[22]以嫩葉為材料，篩選出愈傷組織誘導(dǎo)的理想培養(yǎng)基為MS 培養(yǎng)基+1.0 mg·L-16-芐氨基嘌呤（6-BA）+0.5 mg·L-1NAA+30 g·L-1蔗糖+0.1 g·L-1維生素C，誘導(dǎo)率達(dá)95%，此培養(yǎng)基也具有防止愈傷組織褐化的效果。張亞芳[23]研究表明，愈傷織誘導(dǎo)的最適外植體是嫩葉，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS 培養(yǎng)基+0.9 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.2 mg·L-1激動(dòng)素（KT）+30 g·L-1蔗糖+8 g·L-1瓊脂，誘導(dǎo)率達(dá)88.3%，不定芽分化的最適培養(yǎng)基為MS 培養(yǎng)基+2.5 mg·L-16-BA+0.4 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1赤霉素（GA3）+30 g·L-1蔗糖+8 g·L-1瓊脂，生根誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖+8 g·L-1瓊脂，內(nèi)源激素動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)愈傷組織誘導(dǎo)和芽分化過(guò)程，IAA 含量增加有利于愈傷組織形成，GA3含量增加有利于芽分化[24]。

2.4 種質(zhì)資源保存

密花豆為大粒種子，成熟時(shí)含水量較高，保存前需將種子含水量干燥至10%以下，密封貯藏于0～10 ℃。

3 回歸保育

3.1 回歸保育的適宜區(qū)域

適合密花豆回歸引種的區(qū)域是亞熱帶水源充足的常綠闊葉林或次生毛竹林，還應(yīng)滿足以下條件：1）遠(yuǎn)離城市、公路，人跡罕至，生長(zhǎng)環(huán)境不易被破壞；2）區(qū)域內(nèi)有或曾有野生密花豆分布，生態(tài)環(huán)境與密花豆的適生環(huán)境相似；3）生態(tài)環(huán)境良好，附近沒(méi)有污染源；4）植被覆蓋良好，以適合密花豆生長(zhǎng)的森林類型為佳，物種較完善，具有一定數(shù)量的密花豆伴生植物。

3.2 回歸保育實(shí)踐

3.2.1 選地與整地 育苗地選擇有遮陰設(shè)施的平整地塊，排水良好，土層肥沃深厚。種植基地宜選擇氣候溫暖、潮濕陰涼、海拔800～1700 m、坡度40°～80°的山地疏林或密林溝谷或灌叢。結(jié)合林地春季除草進(jìn)行，依山勢(shì)、坡度及林木生長(zhǎng)的密度挖穴，穴深20 cm，將雜草和枯枝落葉埋入土中進(jìn)行漚制以作基肥，有條件的可以施充分腐熟的有機(jī)肥。定植密度50～100株/畝（1畝≈666.67 m2）。

3.2.2 扦插育苗 每年11 月至次年2 月，選擇1～2年生無(wú)病蟲(chóng)害、健壯的木質(zhì)化枝條，剪成帶2～3節(jié)、長(zhǎng)約20 cm 的莖段，莖段基部要斜剪約45°，頂部剪平。將其下端4～5 cm 浸入150 mg·L-1ABT1 號(hào)生根粉溶液中，浸泡30 min 取出稍晾干，也可用已有虛根的莖進(jìn)行扦插。莖段60°角斜插入直徑10～15 cm的營(yíng)養(yǎng)袋中，壓緊，澆足水。營(yíng)養(yǎng)土配質(zhì)量比為本土∶有機(jī)肥（9∶1）。有機(jī)肥可選擇腐熟的雞糞肥、牛糞肥、綠肥、餅肥等。苗期合理澆水保濕，避免積水爛根。育苗前期遮陰度80%；苗高≥10 cm 后，遮陰度為50%；苗高≥20 cm，可除去遮陰物；苗高≥40 cm即可出圃移栽。

3.2.3 移栽 每年4—6 月，雨后移栽。移栽時(shí)苗高以40～50 cm 為宜，過(guò)高應(yīng)修剪枝葉，并剪掉大部分葉片。移栽時(shí)，去除營(yíng)養(yǎng)袋，每穴1 株，覆土壓緊，澆足定根水。

3.2.4 伴生植物 根據(jù)雞血藤的生長(zhǎng)需人為創(chuàng)造其生長(zhǎng)條件，在水、肥、光照達(dá)到要求的同時(shí)，還可搭配種植一些伴生植物，如兩面針Zanthoxylum nitidum(Roxb.) DC.、羅傘樹(shù)Ardisia quinquegonaBlume、鵝掌柴Schefflera heptaphylla(Linnaeus)Frodin、草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai、蘿芙木Rauvolfia verticillata(Lour.) Baill.等灌木，日常管理上需要避免伴生植物長(zhǎng)勢(shì)過(guò)于強(qiáng)盛。

3.2.5 人工管理 補(bǔ)苗移栽30 d 后，發(fā)現(xiàn)死亡的及時(shí)補(bǔ)種。結(jié)合林地除草，在移栽后30 d，對(duì)小苗周圍的雜草進(jìn)行拔除。水分管理因林下植被豐富，空氣濕度高、土壤保水性好，正常的降水已可滿足雞血藤的生長(zhǎng)用水需求，無(wú)需人工澆水。中耕除草視雜草生長(zhǎng)情況，進(jìn)行拔除，每年除草2～3 次。結(jié)合除草，適當(dāng)在苗基部進(jìn)行培土。每年追肥1～2 次（施肥時(shí)期為3—4 月和8—10 月），可在雨后進(jìn)行撒施復(fù)合肥，有條件的可以施充分腐熟的有機(jī)肥。

4 采收加工

4.1 采收期

雞血藤藥材一般于秋、冬兩季采收[1]。通過(guò)分析廣西桂林野生密花豆中黃烷醇、異黃酮、黃酮醇等21 種活性成分的動(dòng)態(tài)積累規(guī)律可知，11 月上旬至12 月上旬采收的雞血藤藥材綜合質(zhì)量較好[25]，通過(guò)測(cè)定人工栽培于廣西賀州和南寧的4～10 年密花豆中浸出物含量，得出4 年生以上枝條浸出物含量均達(dá)到《中華人民共和國(guó)藥典》（以下簡(jiǎn)稱《中國(guó)藥典》）2005 年版標(biāo)準(zhǔn)[14]。通過(guò)分析人工栽培于廣東清遠(yuǎn)的密花豆中浸出物、總黃酮、原兒茶酸、兒茶素和表兒茶素的含量與生長(zhǎng)年限的變化規(guī)律得出，活性成分含量均隨著生長(zhǎng)年限的增加呈遞增，7—9 月采收的4～6 年生枝條浸出物含量均達(dá)到《中國(guó)藥典》2010年版標(biāo)準(zhǔn)[26]。

4.2 加工

雞血藤質(zhì)地堅(jiān)硬，一般趁鮮切成橢圓形、長(zhǎng)矩圓形或不規(guī)則的斜片，再干燥，切片的厚度為0.3～1.0 cm。研究表明，鮮片中異黃酮和水浸出物含量高于蒸片高于浸片[27]。

5 展望

目前，我國(guó)密花豆野生資源逐漸減少，開(kāi)展遷地保育研究與實(shí)踐對(duì)資源保護(hù)和可持續(xù)利用具有重要意義。雖然已經(jīng)開(kāi)展的密花豆資源調(diào)查、引種馴化、種苗繁育、回歸保育等方面的研究取得了豐碩成果，但諸多方面還有待深入研究。首先，種子貯藏特性研究，即種子貯藏對(duì)低溫的耐性如何，對(duì)脫水的耐性如何，安全貯藏的臨界含水量是多少，種子壽命有多長(zhǎng)，如何改善貯藏條件、延長(zhǎng)種子壽命，達(dá)到長(zhǎng)期安全保存種質(zhì)的目的？第二，組培快繁技術(shù)研究，包括對(duì)組培苗快速生產(chǎn)各個(gè)環(huán)節(jié)，外植體選擇、滅菌、初代培養(yǎng)、增殖培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗等的參數(shù)條件優(yōu)化，建立組培苗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，制定組培苗移栽技術(shù)規(guī)程等。第三，藥效成分形成的機(jī)理研究，一方面通過(guò)基因測(cè)序，挖掘次生代謝途徑的功能基因，一方面利用功能基因組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)和系統(tǒng)生物學(xué)的方法研究生態(tài)環(huán)境因子（溫度、光照、水分、土壤等）和人為因素（修剪、搭架、施肥等）對(duì)次生代謝產(chǎn)物合成積累的影響規(guī)律。