PRF在臨床中的進(jìn)展

李鑫淼 張頌頌 張浩

【摘要】目前，隨著富含血小板的纖維蛋白（PRF）的開發(fā)大大簡化了血小板濃縮生物材料（如富血小板血漿（PRP））的制備過程，并促進(jìn)了它們的臨床應(yīng)用。PRF的臨床有效性已經(jīng)在臨床研究中得到證實，那么改良型富含血小板的纖維蛋白（A-PRF）在臨床中的效果如何？是否有進(jìn)一步的提升？本文將針對A-PRF在臨床中的應(yīng)用及療效，為合理應(yīng)用A-PRF提供科學(xué)參考與臨床指導(dǎo)，作一綜述報道。

【關(guān)鍵詞】富血小板纖維蛋白;改良型富血小板纖維蛋白;生物學(xué)特性;制備技術(shù);臨床應(yīng)用

引言：

2001年法國科學(xué)家Choukroun提取出第二代血小板濃縮制品富血小板纖維蛋白（PRF），它的出現(xiàn)徹底改變了人們對血小板濃縮物的認(rèn)知，因為它與第一代血小板濃縮物（PRP）有著明顯的差距。A-PRF作為PRF的衍生物，其制備方法、保留時間、纖維蛋白結(jié)構(gòu)以及生物學(xué)特性有著不同。

1 A-PRF的生物學(xué)特性

A-PRF作為PRF的衍生物，首先要清楚PRF的生物學(xué)特性。血小板是由巨細(xì)胞在骨髓中形成的，是一種盤狀和環(huán)狀結(jié)構(gòu)。一般它們的壽命為8至10天，并且細(xì)胞質(zhì)包含許多顆粒，其含量在活化時被分泌。例如：α-顆粒含有許多蛋白質(zhì)，血小板特異性的（β-血小板球蛋白）或非血小板特異性的（血小板反應(yīng)蛋白，纖維蛋白原和其他凝血因子，生長促進(jìn)劑，纖維蛋白溶解抑制劑，免疫球蛋白等）。因此，PRF中的血小板細(xì)胞因子定量是理解這種生物材料的重要步驟，因為這些可溶性分子是關(guān)鍵的炎癥和愈合介質(zhì)。實際上，要確定其非常重要的是它們與纖維蛋白基質(zhì)結(jié)合的方式，而不是定量分析。

血小板細(xì)胞因子：1.轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-β）是一個由30多個成員組成的家族。它是產(chǎn)量最高的，盡管它在增殖方面的影響是高度可變的，但是對于大多數(shù)細(xì)胞類型，它是所有細(xì)胞因子中最強大的。例如，它已證明可以抑制破骨細(xì)胞而刺激成骨細(xì)胞的增值。PDGF（血小板衍生的生長因子）是增殖和存活的重要調(diào)節(jié)劑。根據(jù)其特定受體的分布，它們能夠容易地誘導(dǎo)刺激這些細(xì)胞的發(fā)育。IGF軸：細(xì)胞保護(hù)劑。胰島素樣生長因子（IGF）I和II是大多數(shù)細(xì)胞類型增殖和分化的正向調(diào)節(jié)劑。PRF基質(zhì)包裹了血液和血小板中的糖胺聚糖（肝素，透明質(zhì)酸），糖胺聚糖與小的循環(huán)肽具有很強的親和力，并且具有強大的能力支持細(xì)胞遷移和愈合過程。研究發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)所述細(xì)胞因子均未在上清液或滲出液中發(fā)現(xiàn)。即使在血清滲出后，它們?nèi)员焕г赑RF纖維蛋白基質(zhì)中，暗示著這些分子在纖維蛋白聚合物分子結(jié)構(gòu)中的緊密結(jié)合。相比于PRF，A-PRF組織相容性好、無排異反應(yīng)、質(zhì)地柔韌、富有彈性，其具有更立體的三維結(jié)構(gòu)，包括血小板和白細(xì)胞（90%的血小板和50%的白細(xì)胞）的細(xì)胞數(shù)量有所增加。與PRF相比，可釋放更高濃度的生長因子，包括PDGF，VEGF，IGF，F(xiàn)GF，TGF-β。A-PRF可以使細(xì)胞募集的細(xì)胞因子水平的增加和利于成骨細(xì)胞分化的單核細(xì)胞的水平升高。A-PRF中的白細(xì)胞有助于消除壞死碎片，從而防止在缺損部位感染。它們還通過細(xì)胞因子和趨化因子的上調(diào)來幫助募集再生部位天然的未分化間充質(zhì)細(xì)胞和來自骨膜層的全能細(xì)胞。

2 A-PRF的制備技術(shù)

GHANAATI等于2014年通過低速延時離心自體靜脈血的方法制備了第三代血小板制品：改良型富血小板纖維蛋白（A-PRF）。用采血管取靜脈血9～10ml，然后將采血管迅速置于低速離心機(jī)（Eppendorf 5810R，德國）離心，1500 r/min，14 min。離心后可見血液分3層，中間的淡黃色凝膠即A-PRF。通過一些實驗研究發(fā)現(xiàn)血小板和血漿含量的保存取決于所用的壓縮方法。在臨床應(yīng)用中，通常將中層PRF凝塊用干紗布擠壓制膜，然后將較厚的富含血小板的纖維蛋白（PRF）壓縮以適合植入部位。但是，人們擔(dān)心這種壓縮是否會破壞血小板以及是否會使大量有價值的生長因子丟失。為了支持這種可能性，Burnouf證明了實際上被認(rèn)為與組織再生有關(guān)的大量生長因子可以通過擠壓來去除。

因此，人們開始選用特定的壓縮機(jī)制膜，與用干紗布壓縮的PRF膜相比，在用壓縮機(jī)制備的PRF（C-PRF）膜中血漿含量，3D-纖維蛋白網(wǎng)和血小板的保存更加完整。在測試的生長因子中，C-PRF含有較高水平的PDGF亞型，并顯著刺激了細(xì)胞增殖和新血管形成。C-PRF可用于移植，同時最大程度地減少生物活性因子的損失。通過標(biāo)準(zhǔn)化制膜，與PRP相比，在A-PRF中白細(xì)胞和血小板沿膜的整個表面分布良好，并且不被視為團(tuán)塊?；|(zhì)形成良好，在它們之間存在一些孔隙，這將使血管增生，還會持續(xù)釋放生長因子。這些研究發(fā)現(xiàn)，會使A-PRF發(fā)揮出更大的價值，從而更好的服務(wù)于臨床。

3 A-PRF在臨床中的應(yīng)用

血小板濃縮技術(shù)的熱潮就始于口腔和頜面部外科手術(shù)。通過查閱學(xué)習(xí)國內(nèi)外文獻(xiàn)與手術(shù)病例可以有效直接的觀察到A-PRF在臨床試驗中的的應(yīng)用，國外學(xué)者在應(yīng)用A-PRF對牙齦游離移植后骨傷口愈合的影響這項研究中，可以看出A-PRF本身不僅是支架，而且是具有連續(xù)釋放生長因子的作用，A-PRF在術(shù)后30天內(nèi)有益于組織的恢復(fù)而且還會減輕術(shù)后疼痛等問題，但A-PRF一般作用時效為三個月。我們從A-PRF在中厚皮片供區(qū)創(chuàng)面中的臨床應(yīng)用可以觀察到，當(dāng)應(yīng)用A-PRF時，可加快中厚皮供區(qū)創(chuàng)面愈合，減輕術(shù)后疼痛，減少瘢痕增生，改善愈后形態(tài)，為臨床醫(yī)師選擇促進(jìn)中厚皮供區(qū)軟組織愈合及再生的生物材料提供新的思路與方法。通過觀察我國學(xué)者在A-PRF在兔顱骨誘導(dǎo)成骨中的組織學(xué)實驗的結(jié)果，A-PRF可促進(jìn)成骨細(xì)胞有效表達(dá)骨保護(hù)素，抑制RANK與RANKL的結(jié)合，從而抑制破骨細(xì)胞形成以及骨吸收功能，使成骨細(xì)胞及成骨功能占優(yōu)勢，這時成骨破骨的動態(tài)平衡中成骨大于破骨，大量新生骨形成，具有誘導(dǎo)新骨形成的能力。相關(guān)學(xué)者通過研究改A-PRF膜包裹顆粒軟骨移植的長期組織學(xué)改變，我們可以很明顯的看到A-PRF膜包裹顆粒軟骨移植物遠(yuǎn)期形態(tài)類似于自體筋膜包裹顆粒軟骨移植物，但在厚度上較筋膜包裹顆粒軟骨移植物稍薄，表明A-PRF膜擁有與自體筋膜類似的包裹性能，在起到聚合顆粒軟骨的同時，也可通過其特有的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)及各種生長因子為顆粒軟骨的存活提供一個良好的外界環(huán)境，A-PRF可以提高軟骨細(xì)胞的再生潛力，并有效促進(jìn)軟骨細(xì)胞的再生與修復(fù)。A-PRF對軟骨移植的存活率有顯著的益處，應(yīng)用A-PRF膜作為包裹材料包裹顆粒軟骨較為實用，作為一種自體生物材料，暫未發(fā)現(xiàn)改良型富血小板纖維蛋白對顆粒軟骨移植和受區(qū)產(chǎn)生任何負(fù)面效應(yīng)。因此，我們通過實驗研究發(fā)現(xiàn)A-PRF在臨床中的優(yōu)勢，為我們開展新的臨床手術(shù)方法提供了堅實的基礎(chǔ)。

結(jié)語：

本文對A-PRF在臨床中的研究領(lǐng)域進(jìn)行了綜述報道，列舉了一些應(yīng)用A-PRF的研究成果，然而，文獻(xiàn)中經(jīng)常忽略白細(xì)胞濃度，甚至很少建議以白細(xì)胞濃縮率和白細(xì)胞配方作為參數(shù)，即使許多臨床結(jié)果可能與這些治愈因素有關(guān)。所以只有更好的了解此類產(chǎn)品的多態(tài)性、適應(yīng)性、理化性能以及生物學(xué)特性，才能夠?qū)⑵涑浞趾侠淼貞?yīng)用到臨床工作中，從而達(dá)到良好的組織修復(fù)效果。

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作者簡介：李鑫淼;男;1995.04.16;黑龍江省齊齊哈爾市;漢族;碩士研究生;研究方向：新材料新方法