聯(lián)合檢測(cè)CK5/6、CK7和TTF-1在腹壁腫塊轉(zhuǎn)移癌來(lái)源鑒別中的作用

劉 潔，周 晟

轉(zhuǎn)移癌并不一定是癌癥的晚期，臨床通?？梢娪休^明顯的原發(fā)灶，其特性、治療原則也與原發(fā)灶類似，行手術(shù)治療或僅行放、化療，不同的原發(fā)灶均有不同的治療方案，因此確定原發(fā)灶的部位具有重要意義。免疫組化染色可以明確轉(zhuǎn)移癌來(lái)源，如角蛋白抗體CK20在胃腸道癌、膽管癌、胰腺癌中均呈陽(yáng)性，而在肺癌、乳腺癌、腎癌中均呈陰性；Tg陽(yáng)性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移；vimentin陽(yáng)性支持肉瘤的診斷；前列腺特異性抗原PSA陽(yáng)性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移。但有些單一的標(biāo)志物較難確定轉(zhuǎn)移癌的原發(fā)灶，選擇幾種抗體聯(lián)合檢測(cè)可縮小轉(zhuǎn)移癌原發(fā)灶的查找范圍。近年有學(xué)者采用TTF-1抗體判斷非小細(xì)胞肺癌和肺腺癌[1]，也有學(xué)者應(yīng)用CK7聯(lián)合其他抗體在肝癌中的表達(dá)進(jìn)行分析[2]。本文采用免疫組化EnVision法檢測(cè)256例腹壁腫塊中CK5/6、CK7和TTF-1的表達(dá)，分析三者與不同來(lái)源轉(zhuǎn)移癌的相關(guān)性，并探討三者在判斷腫瘤原發(fā)灶的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料收集2017年1月～2019年3月我院病理科送檢的腹壁腫塊，病理診斷為其他部位來(lái)源轉(zhuǎn)移癌的組織蠟塊合計(jì)256例，其中肺癌189例、結(jié)腸癌20例、直腸癌4例、肝癌4例、乳腺癌35例、卵巢癌4例；連續(xù)4 μm厚切片4張，編號(hào)為1、2、3、4，置于60 ℃烤箱中2 h，冷卻后進(jìn)行染色。

1.2 方法將1號(hào)切片行HE染色，2、3和4號(hào)切片分別行CK5/6、CK7和TTF-1免疫組化EnVision兩步法染色，具體操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，一抗稀釋比為1 ∶400，組織切片常規(guī)脫蠟、水化，用PBS緩沖液連續(xù)沖洗2次，每次3 min；一、二抗孵育，DAB顯色，蘇木精復(fù)染經(jīng)乙醇脫水干燥，中性樹膠封固，置于40倍光鏡下觀察。用PBS緩沖液取代一抗作為陰性對(duì)照，陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)：CK5/6定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，CK7定位于細(xì)胞質(zhì)，TTF-1定位于細(xì)胞核，陽(yáng)性染色均為棕黃色顆粒。由經(jīng)驗(yàn)豐富的病理科醫(yī)師對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行判斷，無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞或陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<1%為陰性，≥1%為陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 腹壁腫塊轉(zhuǎn)移癌中CK5/6、CK7、TTF-1的表達(dá)CK5/6在92例腹壁腫塊轉(zhuǎn)移癌中呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率為35.9%(92/256)，其中來(lái)源于肺81例，占比高達(dá)88.0%(81/92)；CK7在45例腹壁腫塊轉(zhuǎn)移癌中呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率為17.6%(45/256)，其中來(lái)源于肺20例，占44.4%(20/45)，來(lái)源乳腺占46.7%(21/45)；TTF-1在169例腹壁腫塊轉(zhuǎn)移癌中呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率為66.0%(169/256)，均來(lái)源于原發(fā)肺的轉(zhuǎn)移癌組織(圖1～3)。

2.2 三種抗體在腹壁腫塊轉(zhuǎn)移癌中的聯(lián)合表達(dá)本組中CK5/6、CK7、TTF-1有8種組合模式，通過(guò)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)CK5/6+/CK7+/TTF-1+和CK5/6-/CK7+/TTF-1+組肺癌來(lái)源占比較高，達(dá)89.4%(169/189)，提示CK7+/TTF-1+對(duì)肺來(lái)源腫瘤有較高的特異性；而結(jié)、直腸來(lái)源的腫瘤CK5/6-/CK7-/TTF-1-；乳腺癌中CK7+，但CK5/6-/TTF-1-；卵巢癌中通常CK5/6+/CK7-/TTF-1-，占比高達(dá)100%(4/4)；肝癌中通常CK5/6-/CK7+/TTF-1-，在本實(shí)驗(yàn)中占比高達(dá)100%(4/4)(表1)。

表1 三種抗體在腹壁腫塊轉(zhuǎn)移癌中的聯(lián)合表達(dá)[n(%)]

①②③圖1 肺鱗癌組織中CK5/6呈陽(yáng)性,EnVision兩步法圖2 乳腺癌組織中CK7呈陽(yáng)性,EnVision兩步法圖3 肺腺癌組織中TTF-1呈陽(yáng)性,EnVision兩步法

3 討論

原發(fā)灶不明轉(zhuǎn)移癌占惡性腫瘤的5%～10%，目前治療手段有限，患者預(yù)后較差。如果能確定轉(zhuǎn)移癌的原發(fā)灶，對(duì)于其后續(xù)治療及預(yù)后評(píng)估有重大意義。近年，免疫治療在結(jié)直腸癌卵巢轉(zhuǎn)移中取得顯著進(jìn)展[3-4]。聯(lián)合CK7與TTF-1檢測(cè)在鑒別不同病理類型的非小細(xì)胞肺癌中有一定作用[5]，但在其他部位來(lái)源癌的鑒別診斷中存在不足。本組將CK7、TTF-1、CK5/6三種抗體聯(lián)合應(yīng)用對(duì)256例標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示三種抗體聯(lián)合應(yīng)用可以將腹壁腫塊轉(zhuǎn)移癌的原發(fā)灶判斷范圍進(jìn)一步縮小。

CK5/6屬于基底細(xì)胞角蛋白，分子量較大，在正常組織中的鱗狀上皮和導(dǎo)管上皮的基底細(xì)胞以及部分鱗狀上皮生發(fā)層細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、間皮細(xì)胞中呈陽(yáng)性，在腺上皮細(xì)胞中呈陰性；因此可用于鱗癌和肺腺癌、間皮瘤和腺癌的鑒別診斷。CK7是許多腺上皮及移行上皮中的堿性角蛋白，分子量較小，通常在腺癌、卵巢癌、肺癌和乳腺癌上皮癌中常呈陽(yáng)性，而在結(jié)腸、前列腺、胃腸道上皮中呈陰性。TTF-1是甲狀腺轉(zhuǎn)錄因子，在甲狀腺腺上皮和肺上皮細(xì)胞中呈陽(yáng)性；在肺小細(xì)胞癌、原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性肺腺癌、大細(xì)胞未分化肺癌、非典型神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中TTF-1多呈陽(yáng)性，而在肺鱗癌、典型類癌中TTF-1多呈陰性。

本組通過(guò)三種不同抗體的聯(lián)合檢測(cè)，進(jìn)行8種模式的劃分，將不同原發(fā)灶癌做了部分排除，明確腫瘤可能存在哪些范圍，根據(jù)它們出現(xiàn)的比例考慮其發(fā)生的可能性，減少一些不必要抗體的使用。如CK7和TTF-1雙陽(yáng)性，那么肺原發(fā)來(lái)源的可能性較高，CK5/6和CK7可進(jìn)一步用來(lái)鑒別肺鱗癌和肺腺癌；CK5/6、CK7和TTF-1三者均陰性的轉(zhuǎn)移癌，應(yīng)考慮結(jié)腸癌、乳腺癌和直腸癌可能，而不考慮為肺癌、卵巢癌、肝癌，并結(jié)合患者的病史及臨床檢查，采用相對(duì)應(yīng)的特異性抗體確定轉(zhuǎn)移癌的原發(fā)灶。

目前腫瘤特異性標(biāo)志物越來(lái)越多，應(yīng)用也越來(lái)越廣泛，各種組合層出不窮；本組只選取三種經(jīng)典標(biāo)志物作為組合，降低了組合的數(shù)量，增加判斷的直達(dá)度和辨識(shí)率，為將來(lái)更精確、更復(fù)雜的組合做出初步探索。本組中CK5/6、CK7和TTF-1是多種腫瘤的特異性指標(biāo)，有助于判斷部分腹壁腫塊轉(zhuǎn)移癌的來(lái)源，對(duì)于縮小轉(zhuǎn)移癌原發(fā)灶的搜尋范圍具有指導(dǎo)意義。