知母及其不同炮制品的指紋圖譜建立與抗氧化活性的譜效關(guān)系研究

賈毓欣 劉海帆 司明東 李新蕊 宋軍娜 鄭玉光 馬東來(lái)

摘 要 目的：建立知母及其不同炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的指紋圖譜，并考察其與抗氧化活性的譜-效關(guān)系。方法：分別采用高效液相色譜法（HPLC）和高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（HPLC-ELSD），色譜條件分別為色譜柱Thermo BDS Hypersil C18、流動(dòng)相乙腈-0.2%醋酸水溶液、流速1.0 mL/min、柱溫30 ℃、檢測(cè)波長(zhǎng)258 nm、進(jìn)樣量10 μL以及色譜柱XDB-C18、流動(dòng)相乙腈-0.2%醋酸水溶液（梯度洗脫）、流速0.9 mL/min、柱溫30 ℃、霧化器溫度40 ℃、氮?dú)饬魉?.6 mL/min、進(jìn)樣量10 μL。分別以芒果苷、知母皂苷BⅡ?yàn)閰⒄眨捎谩吨兴幧V指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A版）》繪制20批知母及其炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的指紋圖譜并進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)，標(biāo)定共有峰。以1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率為指標(biāo)，考察20批知母及其炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的抗氧化活性。以DPPH自由基清除率為因變量、共有峰峰面積為自變量，采用偏最小二乘回歸法分別分析知母乙醇提取物和丙酮提取物與抗氧化活性的譜-效關(guān)系。結(jié)果：從20批知母炮制品乙醇提取物指紋圖譜中標(biāo)定出共有峰8個(gè)（M1～M8），指認(rèn)出芒果苷（色譜峰M7）;相似度為0.389～1.000;從丙酮提取物指紋圖譜中標(biāo)定出共有峰7個(gè)（S1～S7），指認(rèn)出知母皂苷BⅡ（色譜峰S5）;相似度為0.044～0.999。20批知母及其炮制品乙醇提取物的DPPH自由基清除率為21.23%～81.39%，生知母顯著低于鹽知母、酒知母（P<0.001）;丙酮提取物的DPPH自由基清除率為49.73%～83.78%，生知母顯著高于鹽知母、酒知母、炒知母（P<0.001）。知母乙醇提取物圖譜中峰M2～M7的標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)均大于0，與抗氧化活性成正相關(guān);僅峰M7的變量重要性投影（VIP）值大于1。知母丙酮提取物圖譜中峰S4～S7的標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)均大于0，與抗氧化活性成正相關(guān);VIP值大小排序依次為峰S5>S6>S4，且VIP值均大于1。結(jié)論：成功建立知母乙醇提取物和丙酮提取物的指紋圖譜。芒果苷（峰M7）可能是知母乙醇提取物抗氧化作用的主要藥效物質(zhì);知母皂苷BⅡ（峰S5）、峰S6、峰S4可能是知母丙酮提取物抗氧化作用的主要藥效物質(zhì)。

關(guān)鍵詞 知母;乙醇提取物;丙酮提取物;抗氧化活性;譜-效關(guān)系;偏最小二乘回歸法

中圖分類號(hào) R282;R917 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2020）22-2706-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2020.22.04

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish the fingerprint of ethanol extract and acetone extract from Anemarrhena asphodeloides and its different processed products， and to investigate the spectrum-effect relationship between the fingerprint and the antioxidant activity. METHODS： HPLC method and HPLC-ELSD method were adopted. The determination was performed on Thermo BDS Hypersil C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-0.2% acetic acid at the flow rate of 1.0 mL/min. The column temperature was 30 ℃， and the detection wavelength was set at 258 nm. The sample size was 10 μL. The determination was performed on XDB-C18 columnwith mobile phase consisted of acetonitrile-0.1% acetic acid（gradient elution）at the flow rate of 0.9 mL/min. The column temperature was 30 ℃. The temperature of atomizer was 40 ℃ and the flow rare of N2 was 1.6 mL/min. The sample size was 10 μL. Using mangiferin and timosaponin BⅡ as reference， Fingerprint Similarity Eva- luation System of TCM Chromatogram （2004A edition） was adopted to draw the fingerprint of ethanol extract and acetone extract from 20 batches of A. asphodeloidesand its different processed products to confirm common peaks. Using scavenging rate of 1， 1-diphenyl-2-trinitrophenylhydrazine （DPPH） radical as index， antioxidant activities of ethanol extract and acetone extract from 20 batches of A. asphodeloides and its processed products were investigated. Using scavenging rate of DPPH radical as dependent variable， common peak area as independent variable， PLSR was used to analyze the spectrum-effect relationship of ethanol extract and acetone extract from A. asphodeloides with antioxidantion activity. RESULTS： Eight peaks （M1-M8） were identified in the fingerprints of ethanol extracts from 20 batches of processed A. asphodeloides. Mangiferin （chromatogram peak M7） was identified with similarity of 0.389-1.000; seven comon peaks （S1-S7） and timosaponin BⅡ （peak S5） were identified in the fingerprint of acetone extract， and the similarity was 0.044-0.999. DPPH radical scavenging rate of ethanol extract from 20 batches of A. asphodeloides and its processed products was 21.23%- 81.39%， and A. asphodeloides was significantly lower than salt-processed A. asphodeloides with salt wine-processed A. asphodeloides （P<0.001）; and that of acetone extract was 49.73%-83.78%， and A. asphodeloides was significantly higher than stir-baked A. asphodeloides with salt， wine or fire （P<0.001）. The standardized regression coefficients of peaks M2-M7 in the spectrum of ethanol extract from A. asphodeloides were all greater than 0， which was positively correlated with antioxidant activity. Only the variable importance projection （VIP） value of peak M7 was greater than 1， which had an important contribution. The standardized regression coefficients of peaks S4-S7 in the acetone extract spectrum of A. asphodeloides were greater than 0， and were positively correlated with antioxidant activity. The order of VIP values was peak S5>S6>S4， and the VIP values were all greater than 1. CONCLUSIONS： The fingerprint of the different processed products A. asphodeloides and its antioxidant activity spectral effect relationship were successfully established;mangiferin （peak M7） may be the main antioxidant substance of ethanol extract from A. asphodeloides. Timosaponin BⅡ （peak S5）， peak S6 and peak S4 may be the main antioxidant substance in acetone extract from A. asphodeloides.

KEYWORDS? ?Anemarrhena asphodeloides; Ethanol extract; Acetone extract; Antioxidant acitivity; Spectrum-effect relationship; Partial least squares regression

知母為百合科植物知母Anemarrhena asphode-? ? loides Bge.的干燥根莖，具有清熱瀉火、生津潤(rùn)燥之功效;現(xiàn)代藥理研究表明，知母具有抗炎、抗血小板聚集、抗腫瘤等作用[1]。知母始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[2]，藥用歷史悠久，主產(chǎn)于我國(guó)河北、山西、山東、陜西等地，其主要化學(xué)成分有黃酮類、甾體皂苷類、木質(zhì)素類和有機(jī)酸類等[3-5]。臨床常用的炮制品有鹽知母、酒知母和炒知母等，不同炮制品間化學(xué)成分含量或藥效活性各有差異，這主要與不同炮制方法所致化學(xué)成分變化各不相同有關(guān)[6-7]。但目前有關(guān)知母炮制品的研究多集中在化學(xué)成分分析或藥理活性等單一研究上[8-9]，鮮有將化學(xué)成分與藥理活性相結(jié)合以探討知母及其炮制品藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的譜-效關(guān)系的研究。

中藥作為一個(gè)復(fù)雜整體，僅通過(guò)指紋圖譜或單一藥效活性評(píng)價(jià)其質(zhì)量?jī)?yōu)劣是不全面的[10-11]。中藥譜效關(guān)系是將中藥指紋圖譜中的多組分變化與其藥效活性相關(guān)聯(lián)，對(duì)中藥進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)，以避免單一指標(biāo)評(píng)價(jià)的片面性。因此，本文基于前期研究成果[12]，以知母乙醇提取物和丙酮提取物為對(duì)象，建立知母不同廠家、不同炮制品的指紋圖譜;在抗氧化活性研究基礎(chǔ)上，利用偏最小二乘回歸法（PLSR）分析指紋圖譜共有峰與抗氧化活性的譜-效關(guān)系，以期為進(jìn)一步闡明知母抗氧化活性的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Agilent-1260型高效液相色譜儀，含紫外檢測(cè)器和蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（ELSD）（美國(guó)Agilent公司）;UV-2600型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（日本Shimadzu公司）;ME204E型電子天平（德國(guó)Sartorius公司）;KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）;Milli-Q型超純水儀（美國(guó)Milipore公司）。

1.2 藥品與試劑

芒果苷對(duì)照品（批號(hào)：P04M9F60454，純度：≥98.0%）、知母皂苷BⅡ?qū)φ掌罚ㄅ?hào)：R14D9F77658，純度：≥98.0%）均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司;1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：STBD2362V，純度：>98.0%）;乙腈和醋酸等均為色譜純，其余試劑均為分析純，水為自制超純水。

炒知母飲片、酒知母飲片、鹽知母飲片和生知母飲片均經(jīng)河北中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定與炮制教研室鄭玉光教授鑒定為百合科植物知母A. asphodeloides Bge.的干燥根莖，飲片標(biāo)本保存于河北中醫(yī)學(xué)院藥材標(biāo)本室。樣品來(lái)源信息見(jiàn)表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 知母乙醇提取物HPLC指紋圖譜的建立

2.1.1 知母乙醇提取物供試品溶液的制備 參考2020年版《中國(guó)藥典》（一部）方法[1]，精密稱取知母或其炮制品飲片粉末（過(guò)60目篩，下同）0.1 g，置于具塞錐形瓶中，加入70%乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率：400 W，頻率：40 kHz）處理30 min，放冷至室溫，再次稱定質(zhì)量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，混勻，過(guò)0.45 μm濾膜，即得知母乙醇提取物供試品溶液。

2.1.2 對(duì)照品溶液的制備 取芒果苷對(duì)照品適量，精密稱定，用70%乙醇定容于50 mL量瓶中，制成質(zhì)量濃度為50.2 μg/mL的對(duì)照品溶液。

2.1.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性考察 色譜柱：Thermo BDS Hypersil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙腈-0.2%冰醋酸水溶液（15 ∶ 85，V/V）;流速：1.0 mL/min;柱溫：25 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：258 nm;進(jìn)樣量：10 μL。取芒果苷對(duì)照品溶液、知母乙醇提取物供試品溶液（編號(hào)：Z4）和陰性對(duì)照溶液（70%乙醇），按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，芒果苷色譜峰與相鄰色譜峰間的分離度均大于1.50，拖尾因子介于0.95～1.05之間;按芒果苷峰計(jì)理論板數(shù)均大于6 000，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，詳見(jiàn)圖1。

2.1.4 精密度試驗(yàn) 取同一批次的知母乙醇提取物供試品溶液（編號(hào)：Z4）適量，按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。結(jié)果，以芒果苷峰為參照，計(jì)算得各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD分別為0.23%和1.03%（n=6），表明方法精密度良好。

2.1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批次的知母乙醇提取物供試品溶液（編號(hào)：Z4）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、16、24 h時(shí)按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，以芒果苷峰為參照，計(jì)算得各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD分別為0.19%和1.94%（n=6），表明知母乙醇提取物供試品溶液在室溫下放置24 h的穩(wěn)定性良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次樣品（編號(hào)：Z4）粉末1.0 g，共6份，精密稱定，按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備乙醇提取物供試品溶液，再按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，以芒果苷峰為參照，計(jì)算得各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD分別為0.20%和2.27%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.1.7 知母乙醇提取物的指紋圖譜研究 取20批知母及其炮制品適量，按“2.1.1”項(xiàng)下方法制備乙醇提取物供試品溶液，再按“2.1.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。將所得色譜圖導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A版）》中，以Z1圖譜為參照?qǐng)D譜，設(shè)置時(shí)間窗口為0.1 min，對(duì)指紋圖譜中的共有峰進(jìn)行多點(diǎn)校正，匹配生成20批知母及其炮制品乙醇提取物的疊加指紋圖譜;并采用平均數(shù)法生成對(duì)照指紋圖譜（R1），詳見(jiàn)圖2。從20批知母及其炮制品乙醇提取物的HPLC指紋圖譜中標(biāo)定出共有峰8個(gè)（M1～M8）;與芒果苷對(duì)照品的HPLC分析結(jié)果（見(jiàn)圖1A）對(duì)比，指認(rèn)峰M7為芒果苷。

采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A版）》對(duì)20批知母及其炮制品乙醇提取物的指紋圖譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。結(jié)果，20批知母及其炮制品乙醇提取物的相似度為0.389～1.000，說(shuō)明知母及其不同炮制品乙醇提取物的化學(xué)成分存在明顯差異，詳見(jiàn)表2。

2.2 知母丙酮提取物的HPLC-ELSD指紋圖譜研究

2.2.1 知母丙酮提取物供試品溶液 參考2020年版《中國(guó)藥典》（一部）方法[1]，稱取知母及其炮制品飲片粉末（過(guò)60目篩，下同）0.15 g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入30%丙酮100 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率：400 W，頻率：40 kHz）處理30 min，放冷至室溫，再次稱定質(zhì)量，用30%丙酮補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過(guò)0.45 μm濾膜，即得丙酮提取物供試品溶液。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取知母皂苷BⅡ?qū)φ掌愤m量，精密稱定，用30%丙酮定容于50 mL量瓶中，得質(zhì)量濃度為0.49 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.3 色譜條件與系統(tǒng)適用性考察 色譜柱：XDB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）;流動(dòng)相：乙腈（A）-0.2%冰醋酸水溶液（B），梯度洗脫（0～5 min，5%A;5～15 min，5%A→35%A;15～20 min，35%A→100%A;20～25 min，100%A）;柱溫：30 ℃;流速：0.9 mL/min;霧化器溫度：40 ℃;氮?dú)饬魉伲?.6 mL/min;進(jìn)樣量為：10 μL。取知母皂苷BⅡ?qū)φ掌啡芤?、知母丙酮提取物供試品溶液（編?hào)：Z4）和陰性對(duì)照溶液（30%丙酮），按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，知母皂苷BⅡ的色譜峰與相鄰色譜峰間的分離度均大于1.50，拖尾因子介于0.95～1.05之間;按知母皂苷BⅡ峰計(jì)理論板數(shù)均大于10 000，且陰性對(duì)照無(wú)干擾，詳見(jiàn)圖3。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 取同一批次的知母丙酮提取物供試品溶液（編號(hào)：Z4）適量，按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄色譜圖。結(jié)果，以知母皂苷BⅡ峰為參照，計(jì)算得各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD分別為0.17%和0.89%（n=6），表明方法精密度良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批次的知母丙酮提取物供試品溶液（編號(hào)：Z4）適量，分別于室溫下放置0、2、4、8、16、24 h時(shí)按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，以知母皂苷BⅡ峰為參照，計(jì)算得各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD分別為0.22%和1.65%（n=6），表明知母丙酮提取物供試品溶液在室溫下放置24 h的穩(wěn)定性良好。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批次的樣品（編號(hào)：Z4）粉末1.0 g，共6份，精密稱定，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備丙酮提取物供試品溶液，再按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果，以知母皂苷BⅡ峰為參照，計(jì)算得各共有峰相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的RSD分別為0.32%和2.07%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

2.2.7 知母丙酮提取物的指紋圖譜研究 取20批知母及其炮制品適量，按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備丙酮提取物供試品溶液，再按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。將色譜圖導(dǎo)入《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A版）》中，按“2.1.8”項(xiàng)下方法生成知母炮制品丙酮提取物的疊加指紋圖譜和對(duì)照指紋譜圖（R2），詳見(jiàn)圖4。從20批知母及其炮制品丙酮提取物的指紋圖譜中標(biāo)定出共有峰7個(gè)（S1～S7），與知母皂苷BⅡ?qū)φ掌返腍PLC分析結(jié)果（見(jiàn)圖3A）比對(duì)，指認(rèn)峰S5為知母皂苷BⅡ。

采用《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)（2004A版）》對(duì)20批知母及其炮制品丙酮提取物的指紋圖譜進(jìn)行相似度評(píng)價(jià)。結(jié)果，20批知母及其炮制品丙酮提取物的相似度為0.044～0.999，說(shuō)明知母及其不同炮制品丙酮提取物的化學(xué)成分存在明顯差異，詳見(jiàn)表3。

2.3 DPPH自由基抗氧化活性的測(cè)定

在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，本研究將知母乙醇提取物和知母丙酮提取物的濃度分別設(shè)定為3.8、2.1 g/mL（以提取物質(zhì)量計(jì)）。參考劉愛(ài)朋等[13]報(bào)道方法，分別精密量取知母乙醇提取物和丙酮提取物溶液2 mL，精密加入0.16 mmol/L DPPH乙醇溶液1 mL，混勻，靜置30 min，以5 000 r/min離心5 min，取上清液，用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)在517 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（A1）。另用水2 mL替換樣品溶液，與DPPH乙醇溶液混合后，同法測(cè)定吸光度（A0）。用水1 mL替換DPPH乙醇溶液，與樣品溶液混合后，同法測(cè)定吸光度（A2）。上述試驗(yàn)均平行操作3次，取平均值，并按下列公式計(jì)算DPPH自由基清除率：DPPH自由基清除率=（A1-A2）/A0×100%，結(jié)果見(jiàn)表4。

2.4 譜-效關(guān)系分析

參考文獻(xiàn)方法[14]，利用SIMCA 14.1軟件，以20批知母及其炮制品乙醇提取物或丙酮提取物的DPPH清除率為因變量，共有峰的峰面積為自變量，采用PLSR法分析，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)和變量重要性投影（VIP）值，評(píng)價(jià)知母及其炮制品乙醇提取物和丙酮提取物與抗氧化活性的譜-效關(guān)系。

2.4.1 乙醇提取物的譜-效關(guān)系 知母及其炮制品乙醇提取物圖譜中，峰M2～M7的標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)均大于0，提示其與抗氧化活性成正相關(guān)[15];僅色譜峰M7（芒果苷）的VIP值大于1，提示其對(duì)抗氧化活性具有重要貢獻(xiàn)[16]，詳見(jiàn)圖5。

2.4.2 丙酮提取物的譜-效關(guān)系 知母及其炮制品丙酮提取物圖譜中，峰S4～S7的標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)均大于0，提示其與抗氧化活性成正相關(guān)[15];VIP值排序?yàn)樯V峰S5（知母皂苷BⅡ）>S6>S4，且VIP值均大于1，提示其對(duì)抗氧化活性具有重要貢獻(xiàn)[16]，詳見(jiàn)圖6。

3 討論

知母中富含多種藥效成分，本文以2020年版《中國(guó)藥典》（一部）規(guī)定的知母乙醇提取物和丙酮提取物為對(duì)象，建立了其指紋圖譜，并對(duì)其相似度進(jìn)行了評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，20批知母及其炮制品乙醇提取物和丙酮提取物指紋圖譜中分別標(biāo)定出共有峰8、7個(gè)，相似度分別為0.389～1.000、0.044～0.999，表明知母及其炮制品中化學(xué)成分有顯著差異，因此在臨床應(yīng)區(qū)別使用。

本文以DPPH自由基的清除率為抗氧化活性的藥效學(xué)指標(biāo)，分析了知母及其不同炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的抗氧化活性。結(jié)果顯示，知母不同炮制品的乙醇提取物和丙酮提取物的抗氧化能力存在顯著差異，鹽知母乙醇提取物的抗氧化能力最強(qiáng)，而生知母丙酮提取物的抗氧化能力最強(qiáng)。

為了進(jìn)一步揭示知母及其炮制品乙醇提取物和丙酮提取物成分與抗氧化活性之間的內(nèi)在聯(lián)系，本文采用PLSR法分析了20批知母及其炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的指紋圖譜共有峰峰面積與抗氧化活性的譜-效關(guān)系。結(jié)果顯示，知母乙醇提取物中僅芒果苷（M7）的標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)大于0且VIP值大于1，提示芒果苷可能是知母乙醇提取物抗氧化作用的主要藥效物質(zhì);丙酮提取物中知母皂苷BⅡ（峰5）、峰6、峰4的標(biāo)準(zhǔn)化回歸系數(shù)大于0且VIP值大于1，提示其可能是知母丙酮提取物抗氧化作用的主要藥效物質(zhì)，其中知母皂苷BⅡ的抗氧化活性最顯著。

綜上所述，本研究成功建立了知母及其炮制品乙醇提取物和丙酮提取物的指紋圖譜，初步證實(shí)了芒果苷和知母皂苷BⅡ是知母及其炮制品抗氧化活性的藥效重要物質(zhì)基礎(chǔ)。但本文在研究指紋圖譜與抗氧化活性的譜-效關(guān)系時(shí)，只考察了共有峰與DPPH自由基清除活性的關(guān)聯(lián)，并未考察非共有峰，這為今后的研究提供了思路，同時(shí)還有待于對(duì)未知成分進(jìn)行鑒定和含量分析。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2020-07-13 修回日期：2020-10-20）

（編輯：鄒麗娟）