上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化在炎癥性腸病相關(guān)腸纖維化中的作用

賈文秀， 王 冬， 羅雨欣， 張曉嵐

河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院消化內(nèi)科，河北 石家莊 050035

炎癥性腸病(inflammatory bowel disease，IBD)包括克羅恩病(Crohn’s disease，CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)，是一種病因和發(fā)病機制至今尚不十分清楚的非特異性腸道疾病，具有慢性及反復(fù)發(fā)作的特點。IBD已成為一種全球性疾病，其在歐洲和北美的患病率為0.3%，新興工業(yè)化國家的發(fā)病率呈逐年遞增趨勢[1]。纖維化在UC和CD中存在差異定位，且與炎癥的定位密切相關(guān)，在UC中，細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)的沉積局限于黏膜及黏膜下層，而CD相關(guān)腸纖維化可涉及胃腸道的全層腸壁。腸纖維化是IBD發(fā)展過程中不可避免的過程，被認為是腸道組織對于慢性炎癥和過度損傷的、不可逆的傷口愈合反應(yīng)，其主要病理改變是以膠原為主的ECM在腸組織的過度合成和異常沉積，腸纖維化可導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥[2]，從狹窄形成到腸梗阻、穿孔和瘺管的發(fā)生，最終將轉(zhuǎn)化為需要手術(shù)治療[3]。有數(shù)據(jù)表明，30%的CD患者及5%的UC患者需要手術(shù)治療腸梗阻，CD患者術(shù)后復(fù)發(fā)率高達50%[4]。同時，UC患者的纖維化可導(dǎo)致腸壁硬度增加，引起如結(jié)腸動力異常、肛門直腸功能障礙、直腸急迫和尿失禁等臨床表現(xiàn)，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量[5]。可見，防治甚至逆轉(zhuǎn)腸纖維化已成為臨床IBD治療中亟待解決的重要問題[6-7]。

腸道間質(zhì)細胞是參與腸纖維化發(fā)生的關(guān)鍵細胞，是產(chǎn)生ECM的主要細胞，包括腸成纖維細胞(intestinal fibroblasts，IFBs)、腸肌成纖維細胞(intestinal myofibroblasts，IMFs)和平滑肌細胞等[8]，活化的腸成纖維細胞主要來源于組織中的間質(zhì)細胞、上皮或內(nèi)皮轉(zhuǎn)化的間質(zhì)細胞、骨髓干細胞分化的存在于外周血循環(huán)的纖維細胞[9]。近年研究表明，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是腸成纖維細胞來源的一條重要途徑[10]。

EMT是指在某些病理、生理及環(huán)境等因素作用下，上皮細胞失去細胞極性及細胞間連接，且上皮細胞標(biāo)志物如E細胞鈣黏蛋白(E-cadherin)、細胞角蛋白(cytokeratin，CK)逐漸消失，而間質(zhì)細胞標(biāo)志物如成纖維細胞特異蛋白1(fibroblast-specific protein 1，F(xiàn)SP1)、平滑肌激動蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)、N細胞鈣黏蛋白(N-cadherin)、纖維黏連蛋白(fibronectin，F(xiàn)N)等逐漸增多的過程。

1 EMT的分型與分子標(biāo)志物

1.1 EMT的分型EMT根據(jù)其病理生理作用分為3型：Ⅰ型EMT參與胚胎及器官形成；Ⅱ型EMT參與炎癥環(huán)境中組織纖維化形成；Ⅲ型EMT主要涉及上皮腫瘤細胞轉(zhuǎn)化成轉(zhuǎn)移瘤細胞的過程，參與腫瘤細胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。EMT并非簡單地上皮細胞向成纖維細胞的廣泛轉(zhuǎn)化，而是上皮細胞可逆地獲得間質(zhì)細胞的特性并增強機制聯(lián)系的一種級聯(lián)反應(yīng)[11]。隨著研究的日趨深入，Ⅱ型EMT在器官纖維化中的作用得到越來越多的關(guān)注。其在炎癥持續(xù)作用下，上皮細胞脫離黏膜層，穿過受損的基底膜，遷移至間質(zhì)組織，最終完全失去上皮細胞表型，獲得間質(zhì)細胞表型，并產(chǎn)生ECM，導(dǎo)致腸纖維化。

1.2 EMT的分子標(biāo)志物

1.2.1 細胞表面標(biāo)志物：E-cadherin是參與細胞間黏附連接的主要分子，發(fā)揮著維持細胞極性與組織結(jié)構(gòu)完整性的功能，其表達丟失可使細胞失去極性并與周圍細胞分離。在各型EMT過程中，E-cadherin表達均顯著下調(diào)，因而被認為是EMT最主要的上皮細胞標(biāo)志物。同時，在EMT的發(fā)生過程中，E-cadherin表達的丟失往往伴隨N-cadherin表達的增加，這也就是“cadherin-switch”學(xué)說。與E-cadherin表達部位不同，N-cadherin是一種非上皮性鈣黏蛋白，主要表達于纖維母細胞、神經(jīng)組織和肌肉組織中，能夠促進上皮細胞與間質(zhì)細胞之間的相互黏附，參與EMT過程中的調(diào)控。

整合素主要介導(dǎo)細胞與ECM之間的相互黏附。在正常情況下，整合素ανβ6不表達，但在EMT發(fā)生過程中，其表達上調(diào)，并與TGF-β定位相同。ανβ6可激活TGF-β前體，應(yīng)用ανβ6抑制劑能顯著降低組織前膠原蛋白α1、α-SMA、TGF-β1、TGF-β2水平[12]。因整合素廣泛表達于上皮細胞和間質(zhì)細胞中，故常以其具體形式如整合素ανβ6作為EMT發(fā)生的標(biāo)志。

1.2.2 細胞骨架標(biāo)志物：成纖維細胞特異蛋白1(也稱S100A4)是經(jīng)典的成纖維細胞標(biāo)志物，是多種器官組織重構(gòu)過程中成纖維細胞的標(biāo)志之一，常用來鑒定來自EMT的成纖維細胞。Flier等[13]應(yīng)用免疫熒光雙標(biāo)證實，經(jīng)TGF-β刺激后，IEC-6細胞中同時表達E-cadherin及FSP1，且E-cadherin表達量逐漸降低，F(xiàn)SP1表達量逐漸升高，證實了EMT這一過程。

波形蛋白是細胞骨架中間絲蛋白的一種。主要附著于細胞核、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及線粒體的旁邊或末端，對支撐及錨固原生質(zhì)內(nèi)的細胞器起著重要的作用，同時能維持細胞形狀，保持細胞質(zhì)的完整性及穩(wěn)定細胞骨架的作用。然而波形蛋白在成年人體內(nèi)分布廣泛，不僅表達于成纖維細胞、內(nèi)皮細胞，還表達于上皮細胞，故其是否可作EMT的標(biāo)志物仍有待商榷。

此外，α-SMA是表達于血管平滑肌細胞和肌上皮細胞的肌動蛋白，器官纖維化相關(guān)的Ⅱ型EMT與表達α-SMA的肌成纖維細胞有關(guān)，而與腫瘤相關(guān)的Ⅲ型EMT中亦伴隨α-SMA表達量升高。

1.2.3 轉(zhuǎn)錄因子：目前，參與EMT的主要轉(zhuǎn)錄因子包括Snail、Twist和鋅指E(zinc finger E-box binding homeobox，ZEB)等。它們在EMT早期即被激活，并在發(fā)育、纖維化和癌癥發(fā)生過程中發(fā)揮著核心作用。由于這些轉(zhuǎn)錄因子具有不同的表達譜，因而對EMT的貢獻取決于啟動EMT的信號傳導(dǎo)途徑及參與的細胞或組織類型。它們通常彼此相互作用，共同協(xié)調(diào)上皮基因的抑制和間質(zhì)基因的誘導(dǎo)，完成上皮細胞向間質(zhì)細胞的轉(zhuǎn)變。

鋅指轉(zhuǎn)錄因子Snail是研究較多的轉(zhuǎn)錄因子，其家族成員包括 Snail1、Snail2(Slug)和Snail3 (Smuc)，可以被多種信號途徑激活，促進EMT過程。其中，Snail和Slug在正常黏膜的神經(jīng)纖維、神經(jīng)節(jié)細胞和紅細胞中均有表達，但上皮、成纖維細胞、間皮細胞或平滑肌細胞并不表達。它是E-cadherin轉(zhuǎn)錄的強效抑制劑，E-cadherin啟動子的EPal元件通過E-box序列與Snail的C2H2鋅指蛋白羧基端相互作用，與Smad3結(jié)合激活轉(zhuǎn)錄，繼而抑制E-cadherin表達，即促進EMT過程。

同Snail，ZEBs可通過自身C2H2鋅指蛋白區(qū)域結(jié)合E-盒，從而抑制某些上皮連接和極性基因，如E-cadherin，同時激活調(diào)控間質(zhì)標(biāo)志物表達的基因，完成EMT中上皮細胞表型向間質(zhì)細胞表型的轉(zhuǎn)變。有研究[14]表明，miR-200b的抗纖維化作用則是通過抑制EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子ZEB1和ZEB2表達進而抑制EMT過程的。

此外，屬于堿性螺旋-環(huán)-螺旋蛋白家族的Twist，亦被證實參與了中胚葉形成、組織纖維化發(fā)生、腫瘤形成與轉(zhuǎn)移。

2 EMT在腸纖維化發(fā)生中的作用機制

EMT的發(fā)生與多種細胞因子、蛋白分子、微環(huán)境及微小RNA(microRNA)[15]等有關(guān)，涉及到龐大的細胞信號傳導(dǎo)途徑和復(fù)雜的基因調(diào)控過程。其中轉(zhuǎn)化生長因子-β(transforming growth factor-β，TGF-β)是最為重要的致纖維化因子，同時也是誘導(dǎo)EMT過程中的重要分子[16-19]。

2.1 TGF-β與EMTTGF-β信號網(wǎng)絡(luò)主要包括兩種信號傳導(dǎo)通路：Smad依賴通路和非Smad依賴通路。其中Smads是TGF-β信號通路的中心介質(zhì)，也是EMT中最為關(guān)鍵的調(diào)控因子。除此之外，TGF-β也能通過激活絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)、Ras同系物基因家族成員A(ras homolog gene family member A，RhoA)和磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase，PI3K)等非Smad依賴通路參與EMT的過程。

2.1.1 Smad依賴通路：Smad蛋白是將TGF-β1信號從細胞膜上的受體轉(zhuǎn)入到細胞核內(nèi)過程中最重要的轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，其和TGF-β1共同組成的信號通路稱為TGF-β1/Smad信號通路。TGF-β1與其受體結(jié)合使受體相關(guān)Smad蛋白(R-Smad)磷酸化，磷酸化的R-Smads與Smad4形成復(fù)合物，進入細胞核內(nèi)調(diào)節(jié)相關(guān)靶基因轉(zhuǎn)錄，促進EMT相關(guān)分子表達。TGF-β1/Smad通路可通過Snail、ZEB和堿性螺旋-環(huán)-螺旋(basic helix-loop-helix，bHLH)等轉(zhuǎn)錄因子家族，抑制上皮細胞標(biāo)志，如E-cadherin的表達，同時上調(diào)間質(zhì)細胞標(biāo)志物的表達。在細胞水平上，Xu等[8]應(yīng)用TGF-β誘導(dǎo)IEC-6發(fā)生EMT，可見刺激組較對照組E-cadherin表達含量逐漸降低，α-SMA表達含量逐漸升高；同樣在動物水平，應(yīng)用TNBS誘導(dǎo)的腸纖維化小鼠模型中，可見姜黃素治療組結(jié)腸標(biāo)本Masson染色膠原含量減少，纖維化程度低。進一步檢測治療組p-Smad、Smad2/3蛋白水平，可見其低于對照組，說明TGF-β1可通過Smad途徑誘導(dǎo)EMT，抑制TGF-β1，其下游信號分子Smad隨之減少。

2.1.2 非Smad依賴通路：TGF-β能通過絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)，如細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(extracellular signal-regulated kinase，ERK)、p38和c-Jun氨基端激酶(c-Jun-N-terminal kinase，JNK)等傳遞信號并激活某些轉(zhuǎn)錄因子誘導(dǎo)靶基因的表達，此過程并不依賴Smad信號通路。體外培養(yǎng)大鼠小腸隱窩上皮細胞系IEC-6，應(yīng)用放射線誘導(dǎo)EMT，可檢測到TGF-β及Snail的蛋白表達量升高，同時ERK及p38 MAPK蛋白含量升高，由此證明TGF-β可通過MAPK途徑誘導(dǎo)腸纖維化中EMT發(fā)生。在葡聚糖硫酸鈉(dextran sodium sulfate，DSS)誘導(dǎo)的小鼠慢性結(jié)腸炎相關(guān)的腸纖維化模型中，應(yīng)用選擇性ROCK抑制劑AMA0825可降低TGF-β1誘導(dǎo)的心肌素相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子和p38絲裂原活化蛋白激酶的激活，進而起到選擇性抗纖維化作用[20]。TGF-β也可通過TAK1和MKK4激活JNK MAPK通路調(diào)節(jié)EMT的發(fā)生發(fā)展。TGF-β除依賴MAPK傳遞分子信號外，還可依賴RhoA，Ozdamar等[21]研究表明，TβRⅡ激酶使TβR Ⅰ的ser345殘基磷酸化，直接與Par6相互作用。而Par6能間接定位于RhoA，不激活Smad通路，直接促使TGF-β依賴的細胞間連接的溶解作用而介導(dǎo)EMT。

2.2 其他信號通路與EMTEMT的誘導(dǎo)作用還可依賴于Wnt和Notch等信號通路，如糖元合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β)介導(dǎo)Wnt信號通路通過磷酸化依賴蛋白降解作用調(diào)節(jié)產(chǎn)生豐富的β-catenin，并與細胞核內(nèi)TCF/LEF1發(fā)生作用，從而介導(dǎo)EMT發(fā)生。也可經(jīng)Notch通路激活Jagged1，并依次激活bHLH相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，最終這些轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合在EMT基因上的適當(dāng)位點，調(diào)節(jié)EMT相關(guān)基因的表達。

3 腸纖維化中EMT的相關(guān)實驗研究

EMT在多種臟器的纖維化形成中起到重要作用，在小鼠腎纖維化模型中，約35%成纖維細胞源自腎上皮細胞的EMT轉(zhuǎn)化；在小鼠肝纖維化模型中，約45%成纖維細胞來源于上皮細胞[13]。目前研究已證實，EMT也是腸纖維化形成的重要機制之一。由上皮細胞經(jīng)EMT轉(zhuǎn)化而來的肌成纖維細胞是腸纖維化發(fā)生過程中的重要效應(yīng)細胞，可產(chǎn)生大量富含膠原蛋白的ECM，促進纖維化形成。

在三硝基苯磺酸(trinitrobenzenesulfonic acid，TNBS)誘導(dǎo)的小鼠腸纖維化模型中，F(xiàn)lier等[13]應(yīng)用雙轉(zhuǎn)基因技術(shù)對小鼠腸上皮細胞譜系示蹤，使小鼠上皮細胞表達LacZ基因，其基因產(chǎn)物為β-gal，結(jié)果證實TNBS組小鼠結(jié)腸經(jīng)Masson染色后較溶劑組膠原纖維沉積更為明顯，β-gal+細胞并非局限于腸上皮區(qū)域，同時出現(xiàn)在ECM沉積區(qū)，進一步統(tǒng)計得出β-gal+FSP1+的細胞至少約占FSP1+總細胞數(shù)的1/3，由此證實，約33%的腸成纖維細胞源自腸上皮細胞。同樣，在右旋DSS誘導(dǎo)的小鼠腸纖維化模型中，檢測到TGF-β、Smad3、IL-13 mRNA水平較對照組升高，E-cadherin水平下調(diào)，EMT相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子Snail、ZEB1蛋白水平較對照組升高[9]。在大鼠小腸異位移植產(chǎn)生的大鼠腸纖維化模型中也發(fā)現(xiàn)了EMT的證據(jù)。在移植后第21天，可檢測到Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原的增加，并且可見α-SMA和波形蛋白的表達。同時在腸移植物中可檢測到TGF-β、IL-13及相關(guān)轉(zhuǎn)錄分子Snail的表達[22]。

有研究證實氧化應(yīng)激可誘導(dǎo)EMT發(fā)生，體外培養(yǎng)大鼠小腸隱窩上皮細胞IEC-6細胞系，應(yīng)用晚期氧化蛋白產(chǎn)物(advanced oxidation protein products，AOPP)刺激，4 d后可見細胞形態(tài)由不規(guī)則多角形變?yōu)榧氶L的紡錘形，同時免疫熒光染色顯示AOPP刺激組上皮標(biāo)志物E-cadherin表達下降，間質(zhì)標(biāo)志物Vimentin、FSP1及I型膠原表達升高，證實了EMT這一過程[10]。應(yīng)用TGF-β及IL-17A刺激大鼠小腸隱窩上皮IEC-6細胞系，同樣可觀察到EMT過程[8, 14, 23]。對于人類小腸上皮細胞HT-29細胞系，WNT2b通過FZD4激活在HT-29細胞中誘導(dǎo)EMT[24]。

腸上皮類器官(intestinal epithelial organoids，IEOs)最近已被用于制作體外模型，可以重現(xiàn)腸纖維化的體內(nèi)環(huán)境。目前開發(fā)了一種基于IEO的腸道纖維化模型，該模型來自人類多能干細胞，TGF-β干預(yù)多能干細胞衍生的IEO可誘導(dǎo)肌成纖維細胞群產(chǎn)生及增殖，并且可檢測到相關(guān)纖維化基因表達增加。TGF-β對小腸和結(jié)腸來源的IEO的干預(yù)誘導(dǎo)了類器官的破壞和細胞集落的形成，并且可見α-SMA和波形蛋白陽性的紡錘形間質(zhì)樣細胞產(chǎn)生[25]?；诖祟惼鞴俚纳掀?間充質(zhì)轉(zhuǎn)換模型可用于篩選抗纖維化藥物并指導(dǎo)纖維化的治療。

4 腸纖維化中EMT的相關(guān)臨床研究

在臨床研究中，為進一步驗證EMT是否存在于IBD相關(guān)腸纖維化患者中，F(xiàn)lier等[13]將IBD患者術(shù)后腸組織標(biāo)本冰凍切片行免疫熒光染色，可見E-cadherin及α-SMA雙標(biāo)細胞。此外，有學(xué)者收集了18例CD患者及10例非IBD患者結(jié)腸組織標(biāo)本進行研究，發(fā)現(xiàn)CD患者腸組織標(biāo)本較對照組腸組織標(biāo)本炎癥程度及纖維化程度更重，并且通過免疫組織化學(xué)法染色，可見CD患者的腸組織標(biāo)本中有豐富的TGF-β1、α-SMA、成纖維細胞活化蛋白(fibroblast activation protein，F(xiàn)AP)、Slug表達，且其表達量與纖維化程度呈正相關(guān)；同時發(fā)現(xiàn)CD患者腸組織標(biāo)本中E-cadherin不僅見于上皮層細胞，在黏膜下層及纖維化區(qū)細胞中也可見表達[26]。纖維化區(qū)E-cadherin及α-SMA的同時表達，驗證了EMT參與了CD相關(guān)腸纖維化的發(fā)生。而對于UC患者，其結(jié)腸組織也可見明顯的α-SMA、纖連蛋白表達及Ⅰ型膠原和Ⅲ型膠原沉積；但對于初發(fā)/兩年內(nèi)行結(jié)腸切除術(shù)的難治性UC患者與病程超過10年的UC患者比較而言，纖維化程度差異無統(tǒng)計學(xué)意義[27]。已經(jīng)證明在UC患者中可觀察到EMT相關(guān)基因的表觀遺傳修飾。在UC患者的結(jié)腸黏膜中發(fā)現(xiàn)了CDH1(編碼E-cadherin)啟動子的高甲基化。此外，Karatzas等[28]在UC患者的直腸炎癥黏膜標(biāo)本中檢測到其他EMT相關(guān)基因的DNA甲基化狀態(tài)的修飾，同時分析發(fā)現(xiàn)，與對照組非炎性黏膜相比，EMT相關(guān)的5種基因的啟動子(CDH1、CDH13、NEUROG1、CDX1和miR-1247)在炎性直腸黏膜中高度甲基化。

綜上所述，EMT在分子、細胞、器官水平均參與了腸纖維化的形成。

5 阻斷EMT過程可干預(yù)腸纖維化進程

EMT是一種可逆過程，并且由于上皮細胞可以獲得間質(zhì)特征，類似的間質(zhì)細胞可以通過所謂的間質(zhì)-上皮轉(zhuǎn)換(mesenchymal-to-epithelial transition，MET)過程轉(zhuǎn)化為上皮衍生物。EMT-MET轉(zhuǎn)化是胚胎發(fā)生和器官發(fā)育過程中的一個基本步驟，其中某些上皮細胞的內(nèi)在可塑性允許它們在上皮和間質(zhì)狀態(tài)之間切換。雖然目前尚無專門的藥物治療纖維化性腸狹窄，但多種抗纖維化分子或藥物已在動物實驗中顯現(xiàn)效果，這可為未來IBD相關(guān)腸纖維化的治療提供新途徑。

黃蜀葵花總黃酮可抑制TGF-β1誘導(dǎo)的IEC-6形態(tài)學(xué)變化及遷移和侵襲，并上調(diào)上皮標(biāo)志物的表達，降低間質(zhì)標(biāo)志物的表達，同時阻斷Smad和MAPK信號通路。此外，研究還發(fā)現(xiàn)si-Smad和MAPK抑制劑可有效減弱IEC-6細胞中TGF-β1誘導(dǎo)的EMT。且黃蜀葵花總黃酮和si-Smad或MAPK抑制劑共同干預(yù)TGF-β1誘導(dǎo)IEC-6細胞EMT的過程，比其中任何一種抑制具有更強的作用[29]。Xu等[8]在TGF-β誘導(dǎo)IEC-6發(fā)生EMT過程中同時加入姜黃素治療，可見治療組較對照組E-cadherin蛋白表達含量高，α-SMA蛋白表達含量低；同樣在TNBS誘導(dǎo)的腸纖維化大鼠動物模型中，可見姜黃素治療組較對照組結(jié)腸Masson染色膠原含量減少，纖維化程度低，說明了姜黃素通過PPAR-γ介導(dǎo)的TGF-β/Smad信號通路來預(yù)防腸纖維化中EMT的過程。此外，中和甲狀旁腺激素受體1(parathyroid hormone receptor 1，PTH1R)或拮抗甲狀旁腺素類激素(parathyroid hormone-like hormone，PTHLH)生物活性阻止了TGF-β1誘導(dǎo)的EMT。PTH1R可以增強蛋白激酶A(protein kinase A，PKA)信號并激活下游核轉(zhuǎn)錄因子，包括與Runt相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子2(Runx2)，結(jié)果表明PTHLH通過PKA-Runx2途徑觸發(fā)腸上皮細胞中的EMT，其可以作為CD中腸纖維化的治療靶標(biāo)[30]。同樣，F(xiàn)lier等[13]應(yīng)用BMP-7特異性抑制TGF-β1，發(fā)現(xiàn)通過TNBS誘導(dǎo)的慢性結(jié)腸炎相關(guān)腸纖維化小鼠模型結(jié)腸纖維化程度減輕，間質(zhì)標(biāo)志物表達減少，說明BMP-7通過抑制TGF-β1可有效阻止腸纖維化進程。同時，Paul等[31]發(fā)現(xiàn)，AIP4通過介導(dǎo)HIC5的泛素化來抑制IL-17引起的腸纖維化。有研究報道，在放射性腸炎相關(guān)腸纖維化小鼠模型中，應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)使上皮細胞來源的細胞永久性表達強綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)，應(yīng)用可溶性膳食纖維干預(yù)后，可見黏膜下層及上皮下層的膠原沉積減輕，EGFP+/Vimentin+和EGFP+/α-SMA+共表達細胞在造模2周時可見，在模型制造4周及12周時逐漸減少，EMT程度逐漸減輕[32]。同樣，通過使用骨髓間質(zhì)干細胞衍生的微泡(microvesicle，MV)的有效遞送miR-200b可抑制TNBS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎相關(guān)腸纖維化模型中EMT過程并改善纖維化[14]。

6 結(jié)語

腸纖維化的發(fā)生涉及到多種生物學(xué)機制，抑制炎癥并不能阻止腸纖維化的發(fā)展[33]，EMT的發(fā)生是腸纖維化形成的一種重要機制，抑制EMT發(fā)生發(fā)展，甚至逆轉(zhuǎn)EMT為腸纖維化的防治提供了新的思路和方法[2, 31, 34]，但腸纖維化中EMT的具體調(diào)節(jié)機制尚未完全明了，其發(fā)生和發(fā)展受到多種信號通路的共同調(diào)控，深入探究EMT在腸纖維化中的作用機制，對纖維化治療藥物的開發(fā)具有十分重要的意義。