移植細胞實現(xiàn)肝臟有效再殖的機制研究

閻 琛，劉清桂，陳佳佳，孫 宇，楊 桃，朱海英，陳 費，王敏君

(第二軍醫(yī)大學細胞生物學教研室，上海 200433)

原位肝移植是目前公認的治療肝衰竭等終末期肝病最為有效的方法，但是因供體肝臟緊缺，免疫排斥，高額費用等缺陷往往限制了其在臨床上的推廣與應用。如今，細胞移植被認為是原位肝移植在臨床治療上的替代方案，以其手術(shù)創(chuàng)傷小，低免疫排斥，可塑性高和可重復性高，成本低等優(yōu)點，為肝衰竭等終末期肝病開辟了嶄新途徑。移植的細胞再殖肝臟后可緩解肝功能持續(xù)衰竭并可促進自身肝細胞的更替和再生，可為患者獲得原位肝移植提供等待機會或者可直接代替肝移植而治療肝臟疾病。而細胞移植治療取得療效的金標準是實現(xiàn)肝臟再殖。肝臟再殖是移植的外源細胞及其所增殖的子代細胞參與損傷肝臟結(jié)構(gòu)的修復并正常發(fā)揮肝細胞生理功能。但是研究顯示肝細胞移植后，其移植細胞在肝臟的再殖效率往往不足2%[1]，這樣的再殖效率無法滿足整個肝功能發(fā)揮的需求，極大地限制了其在臨床上的廣泛應用。肝臟再殖的兩大關(guān)鍵因素是供體細胞有效地植入受體肝臟以及植入宿主肝臟后細胞的快速增殖。大量研究已經(jīng)表明，當賦予供體細胞比宿主細胞更強的生長或生存優(yōu)勢時，肝細胞就可以有效地再殖肝臟并恢復肝細胞功能。在動物模型實驗的移植試驗中，基于選擇性優(yōu)勢的肝細胞再殖的傳統(tǒng)性策略主要有兩個：一是抑制受體肝細胞使其不能通過自身增殖來恢復肝細胞功能，二是賦予供體肝細胞更強的生長或生存優(yōu)勢來促進其再殖。然而，近年來也有研究顯示，在非選擇性優(yōu)勢下，細胞移植后也可以實現(xiàn)肝臟的再殖[2]。更為重要的是，宿主肝細胞損傷和外源細胞的移植會改變肝臟微環(huán)境，引起微環(huán)境中相關(guān)因子如炎癥因子白細胞介素6(interleukin-6，IL-6)，肝細胞生長因子(hepatocyte growth factor，HGF)，成纖維細胞生長因子(fibroblast growth factor，F(xiàn)GF)和胰島素樣生長因子2(insulin-like growth factor 2，IGF2)的表達，是移植細胞實現(xiàn)肝臟再殖的另一個重要機制[3-5]。因此，本文主要揭示動物模型中成功完成肝臟再殖實現(xiàn)正常肝功能的模型構(gòu)建機制，為臨床上終末性肝臟疾病細胞治療策略的推廣和應用提供可行的思路。

1 選擇性優(yōu)勢促進肝臟再殖

選擇性優(yōu)勢是指相較于宿主肝細胞，移植細胞具有更強的生長和生存優(yōu)勢。大量實驗表明，當賦予移植細胞更強的生長或生存優(yōu)勢時，植入細胞就可以快速增殖并實現(xiàn)肝臟有效再殖。而選擇性優(yōu)勢實現(xiàn)肝臟有效再殖需要具備以下2個條件：①相較于內(nèi)源性宿主細胞，移植肝細胞必須獲得較強的增殖或生存優(yōu)勢；②急性或慢性肝臟損傷導致內(nèi)源性細胞的清除或功能喪失為移植細胞在宿主肝臟的再殖提供足夠的增殖動力和空間。

1.1 宿主肝細胞先天功能異?；蛟鲋骋种剖羌毎僦车南葲Q條件

肝細胞占肝組織細胞的比重高達70%，作為肝臟功能的主要承擔者，發(fā)揮糖原合成、脂質(zhì)代謝、分泌膽汁等功能。而肝細胞功能異常或缺失則會引起肝臟器官機能的異常從而導致肝臟疾病如肝纖維化、肝硬化甚至急性或慢性肝臟衰竭的發(fā)生，因此機體急需外源細胞來替代宿主肝細胞而發(fā)揮正常的肝臟功能，為移植細胞成功再殖受體肝臟提供了優(yōu)勢。尿激酶纖維蛋白溶酶原活化子(urokinase plasminogen activator，uPA)轉(zhuǎn)基因動物模型和延胡索酰乙酰乙酸水解酶(fuarylacetoacetatehydrolase，F(xiàn)ah)基因敲除模型是宿主代謝功能異常而促進移植細胞再殖肝臟的經(jīng)典模型。在uPA動物模型中，肝細胞過表達uPA會導致肝臟凝血功能障礙從而引發(fā)肝損傷。當野生型肝細胞或肝前體細胞移植入uPA受體小鼠肝臟后，移植細胞可在宿主肝臟中增殖并替換功能缺陷的宿主肝臟從而完成對宿主肝臟的再殖，其肝臟重構(gòu)效率可以達到80%以上[6-7]。延胡索酰乙酰乙酸水解酶基因敲除模型模擬了臨床上Ⅰ型酪氨酸血癥，由于延胡索酰乙酰乙酸水解酶的缺乏，酪氨酸分解代謝受阻，無法生成延胡索酸、乙酰乙酸和琥珀酸鹽，而使得毒性次級代謝產(chǎn)物的蓄積，引起肝臟嚴重損傷。100個正常的移植肝細胞在受體肝臟中就能重建出整個肝臟5%的細胞，約2×105個細胞，并重建肝小葉的結(jié)構(gòu)與功能[8]。FAH小鼠肝臟損傷的模型不僅已成功實現(xiàn)了成熟肝細胞的肝臟再殖和肝酶代謝異常的糾正，該模型已經(jīng)成為了檢驗移植細胞是否能夠轉(zhuǎn)化并具備成熟肝細胞功能的一種標準。目前，非成熟肝細胞如肝前體細胞、重編程誘導的肝干細胞、3D類器官等的肝臟再殖都在FAH小鼠模型上成功實現(xiàn)[9-10]。Markus Grompe課題組還新發(fā)現(xiàn)小分子抑制劑CEHPOBA可以模擬FAH酶的缺陷功能，同樣引起肝臟功能損傷而為細胞移植的再殖奠定了基礎(chǔ)[11]。

uPA小鼠和FAH小鼠模型是最早構(gòu)建、應用最廣、最為經(jīng)典的肝臟再殖模型，隨著該領(lǐng)域研究的不斷深入，越來越多的再殖模型逐漸建立。例如，LEC大鼠和Atp7b-/-小鼠也是一種代謝缺陷為前提的細胞再殖模型，主要模擬臨床上的Wilson病。該模型是由于編碼銅轉(zhuǎn)運的ATP7b基因突變，一方面降低血清中銅藍蛋白含量，另一方面又減少銅從膽汁排泄，使得銅貯留在肝細胞內(nèi)從而造成肝細胞凋亡壞死。研究表明將間充質(zhì)干細胞移植進入LEC大鼠模型中，肝功能得到顯著恢復[12]。PiZ小鼠是模擬臨床上α-1抗胰蛋白酶缺乏癥的動物模型，該模型是由于高表達人源性的編碼α-1抗胰蛋白酶的突變基因PiZ，使得其編碼的外源性Z-ATT蛋白聚合物沉積在小鼠肝細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中，導致肝細胞不斷的死亡與再生，為供體肝細胞的移植提供了選擇性優(yōu)勢。實驗證明將正常的人源性肝細胞或基因校正過的小鼠肝細胞移植進受體肝臟，血清中的胰蛋白酶水平得到了大幅度降低，肝臟功能明顯恢復[13]。D-半乳糖胺(D-galactosamine)是一種肝細胞磷酸尿嘧啶核苷干擾劑，可造成肝彌漫性壞死和炎癥，模擬臨床病毒性肝炎。其損傷機理是半乳糖胺能競爭性結(jié)合尿苷三磷酸，使得核酸、糖蛋白、脂糖等物質(zhì)合成受抑制，限制了細胞器及酶的生成和補充，細胞器受損。而小動物、大動物以及臨床病人的間充質(zhì)干細胞移植研究都表明體外移植的細胞可以改善肝功能異常并能夠再殖到宿主肝臟[14]。對乙酰氨基酚(acetaminophen，APAP)誘導急性肝功能衰竭模型主要由于肝細胞代謝APAP產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物具有氧化毒性，使得生物膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化而導致肝細胞變性壞死。進行肝細胞或者干細胞移植后可以明顯緩解肝功能異常的現(xiàn)象[15]。然而急性肝衰竭模型的再殖研究顯示移植細胞再殖損傷肝臟的效率非常低，可能跟宿主肝臟沒有多余的空間給移植細胞增殖相關(guān)。進行性的肝臟纖維化是由于肝臟對于慢性損傷不斷地做出修復反應，導致肝再生小結(jié)節(jié)周圍膠原纖維的累積，實質(zhì)細胞被瘢痕組織所取代，從而造成肝功能的損傷。將肝細胞移植進入由硫代乙酰胺(thioacetamide，TAA)誘導的肝纖維化模型中，肝細胞可以成功再殖宿主肝臟并能夠取代原來纖維化的組織進而實現(xiàn)損傷肝臟的修復[16]。

正常生理條件下，成熟的肝細胞一般處于靜息狀態(tài)(G0期)，更替周期長達200～300 d，幾乎檢測不到增殖的肝細胞。但是一旦肝臟遭受到損傷或刺激，這些靜息的肝細胞可以發(fā)揮強大的增殖能力，快速進行代償反應，重新進入細胞周期，實現(xiàn)細胞增殖。然而當宿主肝細胞增殖被抑制，為外源肝細胞在損傷肝臟刺激下的再殖提供增殖優(yōu)勢。倒千里光堿屬于吡咯里西啶生物堿家族，可以特異性被肝臟攝取，其代謝的毒性中間產(chǎn)物可以使DNA烷基化，從而特異性地抑制細胞周期G2/M期。在倒千里光堿和四氯化碳肝損傷的刺激下，移植細胞植入受體肝臟后可以快速進行增殖并修復受損的肝功能[17]。與此同時，研究發(fā)現(xiàn)將肝細胞移植進入倒千里光堿預處理的肝臟還有助于急慢性膽管損傷的再生與修復[18]。與倒千里光堿屬于同一家族的野百合堿，同樣具有抑制宿主肝細胞增殖的功能，為供體肝細胞再殖肝臟創(chuàng)造了條件[19]。然而，研究還發(fā)現(xiàn)生物堿誘導的再殖模型對于移植細胞發(fā)展成肝細胞癌有著一定的促進作用[3]。此外，受到X射線輻射的肝細胞會發(fā)生自由基介導的DNA氧化損傷，從而造成增殖能力的受損，并且在給予宿主肝臟缺血再灌注、肝葉切除、甲狀腺素T3、生長因子等增殖刺激后移植細胞也都能夠有效再殖受體肝臟[20-21]。盡管輻射是一種非侵入性、易行性好、安全性高的肝臟再殖手段，但是輻射誘發(fā)的胃腸綜合征和動脈粥樣硬化是該再殖模型潛在的不良反應，因此如何在靶向照射減少并發(fā)癥的同時達到抑制宿主肝細胞增殖的效果是目前臨床上有待進一步解決的問題。

細胞衰老主要表現(xiàn)為細胞永久性增殖阻滯，細胞生理功能降低，同時伴隨衰老相關(guān)蛋白的異常表達。研究顯示倒千里光堿、輻照結(jié)合2/3肝切除不僅抑制了宿主肝細胞的增殖，并且還誘發(fā)宿主肝細胞的衰老[3，22]，為移植細胞的再殖創(chuàng)造了前提條件。值得注意的是，考慮到倒千里光堿的促癌效應以及輻射作為化療方式，輻照結(jié)合肝切誘導宿主肝細胞衰老則是更加安全的方式。當相同數(shù)量的年輕和衰老肝細胞同時移植入受體肝臟后，年輕供體肝細胞具有明顯的增殖優(yōu)勢[23]。相反，年輕供體細胞移植入年輕和老年受體肝臟后，老年受體中肝細胞再殖的效率要明顯高于年輕受體[24]。這些都表明了肝細胞的衰老能夠為細胞的再殖提供競爭性的生長優(yōu)勢，誘導細胞發(fā)生衰老是一種全新的基于選擇性優(yōu)勢的移植策略。Mdm2是一種E3泛素蛋白連接酶，主要參與p53蛋白的降解。Mdm2基因的缺失，導致p53蛋白表達水平增高，抑制了細胞增殖而誘發(fā)肝細胞發(fā)生衰老。在Mdm2特異性敲除模型中，肝前體細胞不僅被活化增殖，而且還分化成有功能的肝實質(zhì)細胞，替換了衰老的肝細胞而重構(gòu)肝臟結(jié)構(gòu)完成肝功能的修復[25]。研究還發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ah基因的缺失也會誘導受體肝細胞發(fā)生衰老，而且衰老肝細胞還會進一步促進肝實質(zhì)結(jié)構(gòu)松散，在增殖能力和空間上都為供體細胞的再殖提供了有利條件[26]。

1.2 移植細胞獲得性增殖優(yōu)勢促進了肝臟再殖

宿主肝細胞的代謝和增殖缺陷確實是移植細胞再殖受體肝臟的重要機制之一，但是臨床上許多肝臟疾病中肝細胞的增殖能力和代謝水平并沒有顯著降低，如葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶缺乏癥、家族性高膽固醇血癥、凝血因子VII缺乏癥等。因此，通過對供體肝細胞基因的編輯，使細胞擁有比宿主細胞更強的生長或生存優(yōu)勢，從而實現(xiàn)肝臟的再殖。P27是一種細胞周期依賴性蛋白激酶抑制性因子，通過與cyclin A和cyclin E/Cdk復合體作用來抑制細胞進入增殖周期。p27Kip1敲除的肝細胞具有明顯的增殖優(yōu)勢，因此該供體細胞移植入四氯化碳損傷的受體肝臟后，其再殖肝臟的效率可以達到12%～15%[27]。Foxm1B是調(diào)控細胞周期G1/S和G2/M轉(zhuǎn)換的關(guān)鍵性因子，F(xiàn)oxm1B修飾的肝細胞變成了一種“超級肝細胞”，具備很強的增殖能力，進行移植后可以明顯提高肝臟的再殖效率[28]。該研究還發(fā)現(xiàn)Foxm1B修飾的肝細胞具有一定的安全性，將移植的肝細胞分離培養(yǎng)連續(xù)增殖8個月或在小鼠皮下成瘤實驗12周后均未發(fā)現(xiàn)癌變現(xiàn)象。Yes相關(guān)蛋白(yes-associated protein，YAP)是Hippo信號通路中最主要的效應因子，該通路主要調(diào)控細胞的增殖和器官的大小。當YAP蛋白入核與TEAD轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，就能夠誘導下游促增殖、抗凋亡的基因表達。將攜帶Yap基因的慢病毒感染供體細胞并進行細胞移植，即使在沒有任何受體肝臟損傷或增殖刺激的情況下，移植細胞再殖受體肝臟的效率也可以達到(8.9±2.6)%[29]。此外，通過調(diào)控供體細胞的倍體數(shù)也能夠促進肝臟的再殖效率。轉(zhuǎn)錄因子E2F家族是調(diào)控細胞周期進程的重要蛋白，E2F7和E2F8的表達升高會促進肝細胞的多倍化，而抑制其表達則會促進肝細胞成功分裂成二倍體細胞。將外源性的多倍體肝細胞和二倍體肝細胞混合移植進受損的受體肝臟后，二倍體肝細胞不僅表現(xiàn)出了更強的再殖能力還抑制了多倍體肝細胞的增殖[30]。盡管賦予供體肝細胞生長以及生存優(yōu)勢是一種極具發(fā)展?jié)摿Φ脑僦巢呗?，但是對于任何涉及基因組整合和增強細胞增殖能力的療法，癌癥形成風險的增加是制約其臨床應用的一個重要因素。

2 非選擇性優(yōu)勢下肝臟實現(xiàn)再殖的機制

在家族性高膽固醇血癥、凝血因子VII缺乏癥這類臨床疾病中，肝細胞本身沒有受到損傷并可以發(fā)揮一定的生理功能，因此在這種條件下移植細胞就很難完成有效的肝臟再殖。非選擇性優(yōu)勢正是這類情況，它表現(xiàn)為宿主肝細胞最基本的肝功能是正常的，在此基礎(chǔ)上宿主肝細胞和供體肝細胞對于外源性的增殖刺激會做出相同的反應。所以在非選擇性優(yōu)勢情況下，即便是給予部分肝切或CCl4的增殖刺激，正常肝細胞的再殖效率也不會超過1%～2%。在正常分化成熟細胞無法表現(xiàn)出增殖，生存以及功能上的選擇性優(yōu)勢的情況下，具備增殖能力強、多分化潛能和重構(gòu)組織的能力的干/祖細胞是目前主要的研究方向。而到目前為止，只有大鼠的胎肝干/祖細胞植入接近正常肝臟才能夠?qū)崿F(xiàn)有效再殖[2，31-32]。研究顯示僅僅只是在2/3肝切的增殖刺激下，ED14胎肝細胞在非選擇性優(yōu)勢下的再殖效率就可以到達23%。但并非所有的胎肝細胞在非選擇性優(yōu)勢的情況下都能完成有效的再殖，研究表明ED14胎肝前體細胞的再殖效率很高，但ED16胎肝前體細胞的再殖效率則很低[2]。因此，ED14胎肝細胞通常作為非選擇性優(yōu)勢下肝細胞移植研究的主要細胞來源。而最近的研究發(fā)現(xiàn)，作為妊娠晚期分化程度更高的ED19胎肝細胞，它在部分肝切的增殖刺激下再殖效率卻可以達到35%[31]。相比大鼠，小鼠的胎肝細胞在非選擇性優(yōu)勢下的再殖率則小于1%[32]。目前，對于胚胎發(fā)育不同時期和不同種屬之間胎肝細胞再殖效率差異的內(nèi)在機制目前還尚不明確，而該機制的闡明對于促進非選擇優(yōu)勢下的肝臟再殖有著重要意義。

3 肝臟微環(huán)境可促進移植細胞的再殖

我們發(fā)現(xiàn)，盡管在基于選擇性優(yōu)勢和非選擇性優(yōu)勢的情況下，移植細胞在受體肝臟中都可以取得較高的再殖效率，但這二者主要聚焦在宿主肝細胞和移植細胞本身的特性上。而最近的研究發(fā)現(xiàn)，肝臟微環(huán)境也是移植細胞完成肝臟再殖的重要潛在機制，通過調(diào)控宿主肝臟的微環(huán)境將可能成為今后臨床上終末期肝病細胞治療的新策略。誘導肝臟損傷為外源性細胞提供增殖刺激作為肝細胞移植中最普遍使用的手段，它引起的肝臟微環(huán)境改變對于細胞再殖起到了關(guān)鍵作用。例如，比較70%肝切除術(shù)后第1、2天和第3天可以發(fā)現(xiàn)，術(shù)后前2天，肝臟微環(huán)境主要以炎癥細胞浸潤和微循環(huán)紊亂為特征；而術(shù)后第3天，肝臟微環(huán)境中的生長因子表達上調(diào)和血管擴張有利于移植肝細胞的再殖[33]。這與肝切后HGF和FGF的高表達以及肝星狀細胞分泌的血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)密切相關(guān)[5，33]。有研究表明，單純的70%肝切后，肝臟中趨化因子CXC水平僅僅增加了3到5倍，不足以促進外源性細胞的有效再殖。而通過注射外源性的趨化因子CXC后，肝細胞的再殖效率得到了明顯提升[34]。此外，F(xiàn)ah基因缺失引起的肝細胞損傷上調(diào)了IGF2的表達，并通過激活PI3K/AKT和MAPK信號通路促進了供體肝細胞的再殖[4]。

除此之外，細胞衰老引起的肝臟微環(huán)境改變對細胞再殖也起到了重要作用。對經(jīng)過倒千里光堿和肝切除處理后的年輕和老年受體進行肝細胞移植，結(jié)果發(fā)現(xiàn)供體肝細胞在年輕受體肝臟中的再殖效率明顯高于老年受體。這個現(xiàn)象暗示了年輕肝臟微環(huán)境中存在某些促進再殖或是衰老肝臟微環(huán)境中存在抑制再殖的因素。通過對肝臟微環(huán)境中細胞因子表達水平進行分析發(fā)現(xiàn)，老年受體微環(huán)境中生長激素表達水平很低，而提高老年受體中生長激素水平后，再殖效率可以明顯提高[35]。另一方面，將胎肝細胞同時移植到年輕和老年受體中可以發(fā)現(xiàn)，胎肝細胞在老年受體的再殖效率是年輕受體的4到5倍，這是由于在相比年輕受體，老年受體中Activin A的分泌增多，抑制了內(nèi)源性肝細胞的增殖，而胎肝細胞能夠抵抗Actvin A所誘導的效應，產(chǎn)生了明顯的選擇性優(yōu)勢[24]。細胞發(fā)生衰老后，不僅自身增殖能力受抑制，同時還會誘導基因表達異常，促進衰老相關(guān)分泌表型(senescence-associate secreted protein，SASP)。SASP會通過旁分泌的形式調(diào)控其微環(huán)境的其他細胞甚至是新植入受體肝臟的外源移植細胞，從而改變細胞的生物學特性。例如Serra等[3]發(fā)現(xiàn)宿主衰老肝細胞不僅為移植細胞的再殖提供了選擇性優(yōu)勢，而且衰老細胞分泌的IL-6很可能促進了移植細胞的增殖。研究還發(fā)現(xiàn)，在衰老的肝臟微環(huán)境中，跨膜蛋白酶、絲氨酸蛋白酶以及MMP的高表達會導致纖維粘連蛋白在內(nèi)的細胞外基質(zhì)的降解，有利于移植細胞的植入，而當移植細胞在受體肝臟中再殖時，蛋白酶的表達降低而細胞外基質(zhì)被重塑，對移植細胞與受體肝細胞的整合起到了關(guān)鍵作用[26]。考慮到輻射治療在臨床上的廣泛應用以及誘導衰老對于肝細胞和肝臟微環(huán)境的雙重作用，輻射結(jié)合肝切誘導衰老是目前最新最具臨床應用潛力的再殖策略。

細胞有效植入受體肝實質(zhì)是實現(xiàn)肝臟再殖的關(guān)鍵一步，而通常供體細胞移植1～2 d內(nèi)就會由于炎癥反應而導致80%～90%的細胞從肝血竇中被快速清除。細胞的植入改變了肝臟基因的表達和血管張力，產(chǎn)生炎癥反應，促進細胞黏附、血栓形成以及組織的損傷與重塑。而造成微環(huán)境巨大改變的根本原因是細胞移植后肝臟的缺血、內(nèi)皮的損傷以及肝星狀細胞，kupffer細胞，中性粒細胞的活化，因此，通過對這些現(xiàn)象進行人為干預或調(diào)控而提高移植細胞在受體肝臟的植入效率同樣是移植細胞成功再殖受體肝臟的關(guān)鍵。研究顯示使用內(nèi)皮素受體拮抗劑體外孵育供體細胞后再進行移植，供體肝細胞能夠抵抗肝臟中細胞因子產(chǎn)生的毒性，從而促進再殖[36]。細胞移植后也會導致宿主肝臟發(fā)生缺血，血管收縮因子如內(nèi)皮素-1的招募，從而清除移植細胞。研究顯示在肝細胞培養(yǎng)基中加入特異性的內(nèi)皮素-1A受體拮抗劑可使得細胞移植后肝竇血管擴張，并且使得內(nèi)皮細胞中炎癥反應、細胞損傷、血管張力等相關(guān)基因的表達降低，從而促進移植細胞植入受體肝臟并提高了肝臟的再殖。同樣在受體小鼠中注射內(nèi)皮素-1A受體拮抗劑也可以提高肝臟的再殖效率[37]。相類似的，當受體小鼠注射腫瘤壞死因α(tumor necrosis factorα，TNFα)拮抗劑后，可以減少因外源細胞移植引起的細胞因子的分泌并可抑制中性粒細胞的活性，從而減少移植細胞的清除而促進肝臟再殖[38]。此外，研究還發(fā)現(xiàn)沙利度胺具有抗炎癥和促內(nèi)皮損傷的效應，能夠阻斷移植引起的炎癥反應，如拮抗TNFα以及白介素1，2，6受體，抑制中性粒細胞和kupffer細胞活性等，并加劇細胞移植引起的內(nèi)皮損傷效應從而提高肝細胞的再殖效率[39]。最近的研究還發(fā)現(xiàn)，通過尾靜脈注射α-1抗胰蛋白酶，能夠抑制肝細胞植入時血液介導的炎癥反應，從而阻斷補體和凝血途徑的激活，減少血栓形成并降低促炎因子的表達，顯著改善移植后48 h內(nèi)的細胞植入效率，從而促進了肝臟的再殖[40]。通過調(diào)控肝臟微環(huán)境來改善植入效率從而促進肝臟再殖，這種方式不直接作用于肝細胞，肝毒性相對較小，具有良好的臨床應用前景。

4 展望

根據(jù)傳統(tǒng)的細胞移植動物模型構(gòu)建的策略，選擇性優(yōu)勢是移植細胞有效再殖肝臟的關(guān)鍵。通過抑制宿主細胞的增殖或者人為修飾的方式使供體細胞獲得增殖優(yōu)勢都可以促進移植細胞在損傷肝臟中的再殖。但是這些方式都必須借助特殊的損傷條件，并不能完全與臨床上所面臨的肝臟疾病相匹配。細胞衰老是老年肝臟普遍存在的現(xiàn)象，而老年肝臟疾病的發(fā)病率又遠遠高于年輕個體，因此如果能夠準確理解細胞衰老促進移植細胞再殖肝臟的主要調(diào)控機制，那將對老年肝臟疾病的細胞治療帶來新的希望。近年來越來越多的研究表明微環(huán)境對細胞命運的抉擇起著至關(guān)重要的地位。移植細胞能夠成功進入到宿主肝臟并進行增殖從而實現(xiàn)損傷肝臟的再殖都取決于細胞所處的微環(huán)境并受其周圍細胞所釋放的信號的調(diào)控。盡管目前大量的研究報道顯示通過調(diào)控微環(huán)境的信號通路可以促進移植細胞植入受體肝臟和促進移植細胞在受體肝臟中的增殖，但是面對種種終末期肝臟疾病，細胞移植治療的方案仍然還需要進一步探索。