咽立爽口含滴丸對慢性咽炎家兔免疫細(xì)胞亞群及NF-κB信號通路的影響

唐 燚,喻國凍,何星辰,王 佳,張 田

[1.長沙市中醫(yī)醫(yī)院(長沙市第八醫(yī)院)耳鼻咽喉頭頸外科,長沙410100;2.貴州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻咽喉頭頸外科,貴陽550004;3.貴州醫(yī)科大學(xué),貴陽550025]

慢性咽炎（chronic pharyngitis，CP）是多見于成年人的耳鼻喉科常見疾病，可由細(xì)菌、病毒、酗酒、過度使用聲音、吸煙等引起，主要特征表現(xiàn)為咽部輕微疼痛、灼熱、干癢、吞咽困難、咳嗽、有異物感等癥狀，易反復(fù)發(fā)作［1］。根據(jù)2015年流行病學(xué)數(shù)據(jù)，全世界至少有20%的成年人患有慢性咽炎，嚴(yán)重影響著患者的生活及工作［2］。慢性咽炎是黏膜下、咽黏膜及淋巴組織的慢性炎癥。炎性反應(yīng)能夠激活核轉(zhuǎn)錄因子κappa B（nuclear factorκappa B，NF-κB）。NFκB的持續(xù)激活能夠增強一些細(xì)胞因子及黏附因子的表達，使炎性反應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)生活性氧，損傷咽黏膜周圍上皮細(xì)胞，引起咽黏膜組織的炎性損害［3］。

在慢性咽炎的各種治療策略中，抗炎藥物通常被用來減輕喉部腫脹，調(diào)節(jié)病理生理過程，改善患者的舒適度［4］。研究表明，咽立爽口含滴丸（pharyngeal refreshing pills）對慢性咽炎有顯著的治療效果［6］。咽立爽口含滴丸的主要成分為艾納香草、薄荷素油、天然冰片和薄荷腦，其中艾納香草經(jīng)蒸餾升華提制的艾納香油具有較強的抗菌、抗炎、消腫、解毒、疏散風(fēng)熱和止痛的作用［4］。然而，咽立爽口含滴丸對慢性咽炎的作用機制尚不清楚。本研究擬探究咽立爽口含滴丸對家兔慢性咽炎的影響及其抗炎機制，以期為慢性咽炎的治療提供思路。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

健康普通級新西蘭白兔42只（雌雄各半），體質(zhì)量為2.0～2.5 kg，購于成都達碩實驗動物有限公司［SCXK（川）2020-030］。家兔飼養(yǎng)于貴州醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心［SYXK（黔）2021-0007]，環(huán)境溫度為20～25℃，濕度為（50±5）%，自由飲水。研究方案經(jīng)貴州醫(yī)科大學(xué)實驗動物倫理委員會批準(zhǔn)（IACUC 2001325），并按照實驗動物使用3R原則給予人道關(guān)懷。

1.2 主要試劑與儀器

陽性對照藥物慢嚴(yán)舒檸清喉利咽顆粒（批號：Z20053117）購自山西桂龍醫(yī)藥有限公司；咽立爽口含滴丸（批號：Z20025286）購自貴州黃果樹立爽藥業(yè)有限公司；FACSCalibur流式細(xì)胞儀購自美國BD公司；檢測白細(xì)胞介素-6（interleukin-6，IL-6）（ZC-52826）、白細(xì)胞介素-1（interleukin-1，IL-1）（ZC-52815）、腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）（ZC-52984）、C反應(yīng)蛋白（C-reactive protein，CRP）（ZC-36085）、總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T-AOC）（ZC-37662）用ELISA試劑盒購自上海茁彩生物科技有限公司；IL-6（sc-57315）、IL-1（sc-52012）、TNF-α（sc-52746）、NF-κB p65（sc-8008）、核轉(zhuǎn)錄因子-κB抑制因子（nuclear factor-kappa B inhibitor，IκB-α）（sc-1643）相關(guān)抗體購自美國Santa Cruz公司；TRIzol試劑和RNA提取試劑盒（14105）購自美國Invitrogen公司；PCR擴增試劑盒（AK9906）購自日本TaKaRa公司；PCR引物用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計，由北京擎科科技有限公司合成；實時定量PCR儀購自美國Bio Rad公司。

1.3 慢性咽炎家兔模型構(gòu)建

家兔適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，隨機分為7組（每組6只）：空白組（Con），模型組（CP），慢嚴(yán)舒檸清喉利咽顆粒組（CP+MYS），咽立爽口含滴丸低劑量組（CP+Pha L）、中劑量組（CP+Pha M）、高劑量組（CP+Pha H）、霧化組（CP+Pha A）。除Con組外，其余各組采用氨水松節(jié)油復(fù)合因素造模方法刺激咽部，誘導(dǎo)造慢性咽炎家兔模型［7］。操作方法：Con組第1～15天用蒸餾水噴咽部；其余各組每天2次（總共600μL）將2.5%氨水噴入家兔的咽部黏膜，持續(xù)15 d，在第8天開始將0.5 mL松節(jié)油注入家兔的咽黏膜中，操作完成后30 min禁止飲水。觀察家兔口部抓痕、噴喉后半小時飲水、口咽部分泌物量及每天的食量變化情況，并于第15天在硬性鼻內(nèi)鏡下觀察造模組家兔的咽部黏膜情況。家兔搔抓口部頻繁、飲水量及頻次明顯下降、口腔分泌物黏稠，咽部黏膜呈暗紅色，光澤度欠佳，說明造模成功。

1.4 給藥方法

造模成功后，連續(xù)給藥7 d。CP+MYS組：每日按2.5 g/kg將慢嚴(yán)舒檸清喉利咽顆粒置于家兔口腔。CP+Pha L組、CP+Pha M組和CP+Pha H組：將咽立爽口含滴丸研磨成粉末狀，每日分別以相當(dāng)于成人劑量2.5、5、10倍的咽立爽口含滴丸粉末（0.025 g/kg、0.05 g/kg、0.1 g/kg）置于家兔口腔。CP+Pha A組：每日捻磨咽立爽口含滴丸（0.025 g/kg）成粉末狀，與滅菌生理鹽水5 mL配制為懸濁液，置于霧化機內(nèi)用于霧化治療。Con組和CP組：每日以與低劑量用藥組等量的蔗糖（0.025 g/kg）（具有高滲透性，作為對照）置于家兔口腔。以上給藥量均以人∶兔為1∶5～1∶10計算，參照苗明三［8］主編的《實驗動物與動物實驗技術(shù)》。

1.5 樣本采集

治療結(jié)束后，各組家兔均采集耳中央動脈血4 mL。其中3 mL血靜置后經(jīng)3 000 r/min低溫離心15 min，取血清，－80℃冰箱保存；另1 mL血加入抗凝管后，立即進行后續(xù)流式細(xì)胞檢測。采血結(jié)束后，于家兔腹腔注射1%戊巴比妥鈉，采用CO2吸入法處死家兔，迅速解剖家兔口咽部，取出咽喉壁黏膜組織，用預(yù)冷的生理鹽水迅速沖凈，分成兩份，一份經(jīng)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛溶液固定，另一份于－80℃低溫保存。

1.6 家兔一般情況觀察

從造模第3天開始，每天觀察家兔行為、肛溫、狀態(tài)、攝食、飲水量和大小便等情況，觀察咽喉壁局部情況有無腫脹、色澤、分泌物及搔抓頸部等。

1.7 組織病理觀察

將固定的咽喉壁黏膜按常規(guī)方法制備石蠟切片，然后進行蘇木精染色，鹽酸乙醇分化，50℃溫水或弱堿性水溶液返藍(lán)，85%乙醇溶液脫水，伊紅染色，梯度乙醇溶液脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固，鏡檢觀察具體病變。按以下標(biāo)準(zhǔn)進行病變程度分級：正常結(jié)構(gòu)為“-”；咽部充血，炎癥較輕為“+”；咽部炎癥局限，有釘突形成為“++”；咽部炎癥較彌漫，上皮下釘突明顯為“+++～++++”。

1.8 血液相關(guān)因子檢測

取抗凝血100μL加入流式測定管中，分別加入5μLAPC標(biāo)記的CD3 McAb、5μL FITC標(biāo)記的CD4 McAb、5μL PE標(biāo)記的CD8 McAb后混勻，避光孵育約20 min；加2 mL溶血素，避光孵育約10 min，1 200 r/min離心5 min，棄上清液；加PBS洗2遍，棄上清液，用PBS緩沖液，調(diào) 整 細(xì) 胞 密 度 至1×106個 細(xì) 胞/mL，用FACSCalibur流式細(xì)胞儀檢測CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞所占百分比，計算CD4+/CD8+比值。

ELISA試劑盒測定血清IL-6、IL-1、TNF-α、CRP、T-AOC水平，具體操作按照試劑盒說明進行。

1.9 蛋白質(zhì)印跡法檢測

提取咽喉壁黏膜組織樣本蛋白，進行10%SDS-PAGE凝膠電泳。將目的蛋白條帶轉(zhuǎn)印至PVDF膜，用5%脫脂奶粉封閉后，分別加入一抗IL-6、IL-1、TNF-α、NF-κB p65、IκB-α（均按1︰500稀釋）和β-actin，4℃振蕩孵育過夜，TBST洗滌3次。然后加入二抗，室溫孵育1 h，TBST洗滌3次，膜上加入ECL化學(xué)發(fā)光試劑。取出PVDF，化學(xué)發(fā)光法獲得膠片后進行圖像采集，目標(biāo)條帶的A值采用Quantity One凝膠圖像軟件分析，以目標(biāo)條帶與β-actin條帶的A值的比值反映活性IL-6、IL-1、TNF-α、NF-κB p65、IκB-α的相對表達水平。

1.10 實時熒光定量PCR法檢測

依據(jù)組織RNA提取試劑盒說明提取咽喉壁黏膜組織總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA。采用SYBR Green 1 real-time PCR方法檢測mRNA的相對表達量，β-actin作為內(nèi)參。NF-κB p65上游引物序列為5'-GGCAGCACTCCTTATCAAC-3'，下游引物序列為5'-GGTGTCGTCCC-ATCGTAG-3'；IκB-α上游引物序列為5'-CATGAAGAGAAGACACTGACCATGGAA-3’，下游引物序列為5'-TGGATAGAGGCTAAGTGTAGACACG-3'；β-actin上游引物序列為5'-ATGGATGAC GATATCGCTGC-3'，下游引物序列為5'-CTTCTGACCCATACCCACCA-3'。用實時定量PCR儀進行實時熒光定量PCR檢測，PCR反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性3 min）；94℃變性10 s，55℃退火10 s，72℃延伸15 s，40個循環(huán)。記錄Ct值，并采用2-ΔΔCt法分析咽喉壁黏膜組織中NFκB p65、IκB-αmRNA相對表達水平。

1.11 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 各組家兔一般情況

造模第3天起，大部分家兔逐漸出現(xiàn)精神疲乏、飲水納食減少、口腔分泌物增多、搔抓頸部、咽部呈現(xiàn)充血及微腫脹等情況；局部注射松節(jié)油后，上述癥狀加重且分泌物較黏稠；造模15 d后，上述癥狀越加明顯。Con組實驗動物未見異常。

2.2 各組家兔咽喉壁黏膜的病理組織學(xué)觀察

HE染色結(jié)果（表1、圖1）顯示，Con組咽喉壁黏膜組織未見明顯病變；CP組黏膜上皮細(xì)胞增生明顯，且增生形成指狀突起，細(xì)胞排列較為紊亂，黏膜固有層見較多腺體分布，固有層結(jié)締組織內(nèi)輕度出血，有炎細(xì)胞浸潤，釘突形成，紅細(xì)胞溢出血管分布于固有層內(nèi)；CP+MYS組黏膜上皮層結(jié)構(gòu)較完整，排列較規(guī)則，黏膜固有層偶見中性粒細(xì)胞浸潤、局部輕微出血，可見紅細(xì)胞溢出血管；CP+Pha L組和CP+Pha M的病變基本相同，黏膜上皮層結(jié)構(gòu)較完整，黏膜上皮細(xì)胞點狀壞死，可見胞核固縮、碎裂、輕度炎細(xì)胞浸潤、局部輕微出血，比模型組炎性反應(yīng)明顯減輕。

表1咽立爽口含滴丸治療后家兔咽喉黏膜病變程度分級Table1 Grading degree of laryngopharyngeal mucosa lesionsof rabbitsafter treatment with pharyngeal refreshing pills（n）

圖1光學(xué)顯微鏡下家兔咽喉壁黏膜組織病理學(xué)改變Figure1 Pathological examination of theposterior pharyngeal wall mucosa of rabbitsunder a light microscope

CP+Pha H和CP+Pha A組的病變基本相同，咽部黏膜表面上皮組織未見明顯變性及炎性病變，固有膜內(nèi)見輕度慢性炎細(xì)胞浸潤，黏膜下層及肌層均未見明顯病理變化。另外，CP+Pha H和CP+Pha A組咽喉部病變程度明顯好于模型組。

2.3 各組家兔血液CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平

流式細(xì)胞法檢測結(jié)果（表2）顯示：與Con組比較，CP組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+細(xì)胞所占百分比明顯降低，CD8+細(xì)胞所占百分比明顯升高（P＜0.01）；與模型組比較，CP+Pha M、CP+Pha H和CP+Pha A組的CD3+、CD4+細(xì)胞所占百分比和CD4+/CD8+比值均明顯升高，CD8+細(xì)胞所占百分比明顯降低（P＜0.05）。

2.4 各組家兔血清IL-6、IL-1、TNF-α、CRP、TAOC水平

ELISA法檢測結(jié)果（表3）顯示：與Con組比較，CP組IL-6、IL-1、TNF-α、CRP水平明顯升高，T-AOC水平明顯降低（P＜0.01）；與CP組比較，CP+Pha H組及CP+Pha A組IL-6、IL-1、TNF-α、CRP水平明顯降低，T-AOC水平明顯升高（P＜0.05）。

2.5 各組家兔咽喉壁黏膜IL-6、IL-1、TNF-α、NF-κB p65、IκB-α水平

蛋白質(zhì)印跡法檢測結(jié)果（圖2）顯示：CP組的IL-6、IL-1、TNF-α、NF-κB p65、IκB-α水平較Con組明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與CP組比較，CP+Pha H組和CP+Pha A組的IL-6、IL-1、TNF-α、NF-κB p65、IκB-α水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

表2各組家兔血液CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比較Table 2 Levels of CD3+,CD4+,CD8+,and CD4+/CD8+in the blood of rabbits in each group（%,±s,n=6）

表2各組家兔血液CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平比較Table 2 Levels of CD3+,CD4+,CD8+,and CD4+/CD8+in the blood of rabbits in each group（%,±s,n=6）

注：Con為空白組；CP為模型組；CP+MYS為慢嚴(yán)舒檸清喉利咽顆粒組；CP+Pha L為咽立爽口含滴丸低劑量組；CP+Pha M為咽立爽口含滴丸中劑量組；CP+Pha H為咽立爽口含滴丸高劑量組；CP+Pha A為咽立爽口含滴丸霧化組。其余組與空白組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；治療組與模型組比較，##P＜0.01，#P＜0.05。

分組Con CP CP+MYS CP+Pha L CP+Pha M CP+Pha H CP+Pha A F value P value CD3+73.87±4.15 44.81±3.69**52.63±2.20**#53.73±2.68**##65.90±3.31*##71.12±3.89##72.83±4.04##43.319＜0.001 CD4+56.89±1.98 39.05±2.26**51.10±6.25##44.36±3.41**48.87±6.38*#55.96±0.94##56.38±4.42##8.018 0.001 CD8+9.71±1.47 33.97±3.20**32.18±5.82**24.34±3.75**##19.09±3.98**##13.04±2.10##11.18±1.20##25.350＜0.001 CD4+/CD8+5.95±0.91 1.15±0.05**1.61±0.20**1.87±0.43**2.65±0.74**##4.37±0.75**##5.06±0.34##32.570＜0.001

表3各組家兔血清IL-6、IL-1、TNF-α、CRP、T-AOC水平比較Table3 Levelsof IL-6,IL-1,TNF-α,CRP,and T-AOC in theserum of rabbitsin each group（±s,n=6）

表3各組家兔血清IL-6、IL-1、TNF-α、CRP、T-AOC水平比較Table3 Levelsof IL-6,IL-1,TNF-α,CRP,and T-AOC in theserum of rabbitsin each group（±s,n=6）

注：Con為空白組；CP為模型組；CP+MYS為慢嚴(yán)舒檸清喉利咽顆粒組；CP+Pha L為咽立爽口含滴丸低劑量組；CP+Pha M為咽立爽口含滴丸中劑量組；CP+Pha H為咽立爽口含滴丸高劑量組；CP+Pha A為咽立爽口含滴丸霧化組。其余組與空白組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；治療組與模型組比較，##P＜0.01，#P＜0.05。

分組Con CP CP+MYS CP+Pha L CP+Pha M CP+Pha H CP+Pha A F value P value IL-6 ρ/(pg·mL－1）52.02±0.78 59.43±0.83**55.50±1.24 55.36±3.54#54.99±3.70#53.14±2.36##52.46±1.62##3.591 0.023 IL-1 ρ/(pg·mL－1）27.02±2.64 34.93±2.17**30.91±3.71 30.57±1.85 29.99±3.41#28.37±3.49#26.55±0.94##3.167 0.035 TNF-α ρ/(pg·mL－1）66.84±0.44 73.04±2.65**72.34±1.78**72.96±1.23**69.98±2.43 68.79±3.34#67.76±1.96##4.224 0.012 CRP ρ/(ng·mL－1）87.75±0.97 95.74±0.71**90.60±4.21#90.95±3.15#90.71±1.04#89.85±1.06##89.46±1.07##3.932 0.016 T-AOC/(U·mL－1）16.74±0.42 13.47±1.37**14.92±0.80*14.54±0.44*15.31±1.03#15.76±1.32##15.89±0.58##3.868 0.017

2.6 各組家兔咽喉壁黏膜NF-κB p65、IκB-α mRNA水平

實時熒光定量PCR檢測結(jié)果（表4）顯示：與Con組比較，CP組NF-κB p65、IκB-αmRNA水平明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；與CP組比較，CP+Pha H組和CP+Pha A組NFκB p65、IκB-αmRNA水平明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。

圖2各組家兔咽喉壁黏膜IL-6、IL-1、TNF-α、NF-κBp65、IκB-α蛋白表達Figure 2 Expression of IL-6，IL-1，TNF-α，NF-κB p65，and IκB-αat the protein level in the pharyngeal mucosa of rabbitsin each group

表4各組家兔咽喉壁黏膜NF-κB p65、IκB mRNA水平比較Table 4 Expression of NF-κB p65 and IκB at the mRNA level in theposterior pharyngeal wall mucosa of rabbits in each group（±s,n=6）

表4各組家兔咽喉壁黏膜NF-κB p65、IκB mRNA水平比較Table 4 Expression of NF-κB p65 and IκB at the mRNA level in theposterior pharyngeal wall mucosa of rabbits in each group（±s,n=6）

注：Con為空白組；CP為模型組；CP+MYS為慢嚴(yán)舒檸清喉利咽顆粒組；CP+Pha L為咽立爽口含滴丸低劑量組；CP+Pha M為咽立爽口含滴丸中劑量組；CP+Pha H為咽立爽口含滴丸高劑量組；CP+Pha A為咽立爽口含滴丸霧化組。其余組與空白組比較，**P＜0.01，*P＜0.05；治療組與模型組比較，##P＜0.01，#P＜0.05。

分組Con CP CP+MYS CP+Pha L CP+Pha M CP+Pha H CP+Pha A F value P value NF-κB p65 1.00±0.09 1.78±0.24**1.69±0.07**1.73±0.05**1.48±0.09**#1.40±0.25**##1.21±0.10##11.356＜0.001 IκB-α 1.00±0.05 1.93±0.03**1.65±0.12**#1.66±0.31**#1.59±0.05**##1.48±0.12**##1.07±0.03##18.071＜0.001

3 討論

不良的生活環(huán)境及工作壓力增大會導(dǎo)致CP發(fā)病率增加。目前，醫(yī)藥干預(yù)是治療CP的主要方法［9］。研究表明，氨水+松節(jié)油建立的CP模型與臨床CP相似，符合CP動物模型的生物學(xué)特征［10］。咽立爽口含滴丸的主要成分為艾納香草蒸餾升華提制的艾納香油，以及天然冰片、薄荷素油和薄荷腦，具有消腫止痛的作用［11］。郭裕［6］用咽立爽口含滴丸超聲霧化治療急性單純性咽炎，發(fā)現(xiàn)超聲霧化吸入治療有效可行。慢嚴(yán)舒檸清喉利咽顆粒可用于急慢性咽炎、扁桃體炎、咽喉發(fā)干、聲音嘶啞等咽部癥狀的治療，臨床療效明顯，可作為陽性對照藥物［12］。由此，本實驗建立CP家兔模型，并使用咽立爽口含滴丸干預(yù)模型，以期尋找CP的潛在治療藥物。結(jié)果顯示：與CP模型組比較，咽立爽口含滴丸各干預(yù)組家兔咽黏膜上皮結(jié)構(gòu)較完整，排列較規(guī)則，偶見中性粒細(xì)胞浸潤和局部輕微出血。另外，咽立爽口含滴丸高劑量與霧化組家兔咽黏膜上皮組織未見明顯變性及炎性病變，黏膜下層及肌層均未見明顯病理變化。上述結(jié)果表明，咽立爽口含滴丸能減輕慢性咽炎家兔咽部黏膜組織病理損傷，緩解病情進展，可能對CP發(fā)揮防治作用。

慢性咽炎患者咽部黏膜炎性反應(yīng)強烈，多數(shù)炎性因子處于高表達狀態(tài)，如血清TNF-α、IL-6等。TNF-α是由T淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，生物活性較為廣泛，可參與其他生物因子協(xié)同作用，在炎性反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。IL-6是由成纖維細(xì)胞、活化T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，屬于趨化因子，可在感染引發(fā)的炎性反應(yīng)中誘導(dǎo)炎性反應(yīng)相關(guān)反應(yīng)蛋白的合成與分泌，進而促進炎性反應(yīng)［13］。此外，T淋巴細(xì)胞亞群主要包括輔助性T細(xì)胞和抑制性T細(xì)胞，CD4+增多表示機體清除病毒、細(xì)菌的能力及機體免疫功能增強，而CD8+增多往往表示機體清除病毒、細(xì)菌的能力及免疫功能受到抑制［14-15］。慢性咽炎患者病情進展過程中，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的降低可刺激B細(xì)胞的分泌，從而增強體液免疫，誘發(fā)產(chǎn)生免疫復(fù)合物的黏附與沉積，使病情加重［16-17］。本研究結(jié)果顯示：與空白組比較，模型組CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平，明顯降低；咽立爽口含滴丸高劑量及霧化組CD8+水平明顯降低，CD3+、CD4+、CD4+/CD8+水平明顯升高。這些結(jié)果提示咽立爽口含滴丸影響免疫細(xì)胞亞群，進而影響咽炎病情進展。

NF-κB信號通路能調(diào)控大量炎性細(xì)胞因子的生物學(xué)活動，廣泛參與炎性反應(yīng)、細(xì)胞增殖及免疫調(diào)節(jié)等病理生理過程。已有研究證實，未激活的NF-κB通常與IκB家族成員結(jié)合成無活性細(xì)胞質(zhì)復(fù)合物而存在，當(dāng)強烈的外界信號（如TNFα、IL-6、IL-1）誘導(dǎo)刺激細(xì)胞時，NF-κB p65與IκB相分離致使NF-κB信號通路激活，誘導(dǎo)大量炎性因子轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用［18］。研究顯示，用卵清蛋白刺激可選擇性抑制NF-κB活化的IκB-α基因突變小鼠，制造變應(yīng)性氣道疾病模型，發(fā)現(xiàn)突變小鼠變應(yīng)性炎性反應(yīng)較對照組明顯減輕，氣道嗜酸性粒細(xì)胞及黏液分泌減少，血清IgE水平及促炎性反應(yīng)的細(xì)胞因子表達也有所下降，表明NF-κB在氣道變應(yīng)性炎性反應(yīng)中起到重要調(diào)節(jié)作用［19］。高斐宏等［20］也通過動物實驗發(fā)現(xiàn)，鼻炎大鼠鼻黏膜中NF-κB高表達可使促炎性因子TNF-α、IL-6表達上升。其中TNF-α作為多功能炎性細(xì)胞因子，能介導(dǎo)黏附分子表達及細(xì)胞因子釋放，促進炎性細(xì)胞的浸潤和活化。以上研究結(jié)果提示，NF-κB可激發(fā)多種炎性因子表達，同時也受相關(guān)炎性因子的反激活，是促使炎性效應(yīng)進一步放大的關(guān)鍵。

CP是咽黏膜、黏膜下及淋巴組織的慢性炎性反應(yīng)，炎性反應(yīng)過程能夠激活NF-κB p65，持續(xù)激活的NF-κB p65能夠增強一些細(xì)胞因子（如IL-1β、TNF-α）和一些黏附因子（如VCAM-1、ICAM-1）的表達，使炎性反應(yīng)細(xì)胞產(chǎn)生活性氧，損傷咽黏膜周圍上皮細(xì)胞，引起咽黏膜組織的炎性損害［21］。因此，抗炎作用的一個解釋可能是抑制NF-κB的激活，從而降低炎性標(biāo)志物的水平。本研究顯示，與空白組比較，模型組IL-1、IL-6、TNF-α、CRP表達及NF-κB p65、IκB-α蛋白和mRNA表達明顯升高，T-AOC表達明顯降低；而咽立爽口含滴丸霧化組和高劑量組IL-1、IL-6、TNF-α、CRP表達及NF-κB p65、IκB-α蛋白和mRNA表達明顯降低。這些研究結(jié)果提示，咽立爽口含滴丸可有效抑制NF-κB炎性通路活性及促炎因子表達，增強機體的抗氧化能力，從而抑制慢性咽炎的炎性反應(yīng)。

綜上所述，咽立爽口含滴丸具有較好的抗炎及增強免疫作用，可影響NF-κB信號通路，有效緩解慢性咽炎癥狀。