辛躍珍,劉淑玲
(1.黑龍江完達(dá)山哈爾濱乳品有限公司,哈爾濱 150078;2.黑龍江民族職業(yè)學(xué)院,哈爾濱 150066)
干酪是以乳、稀奶油、脫脂乳或部分脫脂乳、酪乳或這些原料的混合物為原料,經(jīng)凝乳酶或其他凝乳劑凝乳,并排出部分乳清而制成的新鮮或經(jīng)發(fā)酵成熟的產(chǎn)品[1,2]。干酪是被濃縮的乳制品,其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高、易消化、生物學(xué)價(jià)值高[3~5]。蛋白質(zhì)和脂肪含量相當(dāng)于原料乳的10倍,含有豐富的糖類、有機(jī)酸、礦物質(zhì)元素及維生素等多種營(yíng)養(yǎng)成分及生物活性物質(zhì)。但干酪在我國(guó)乳制品消費(fèi)量的占比很低[6,7],制約我國(guó)干酪產(chǎn)業(yè)發(fā)展的原因有兩個(gè):一是干酪價(jià)格較高,二是大部分干酪不適宜國(guó)人口味。本試驗(yàn)以口味適宜的新鮮軟質(zhì)干酪為研究對(duì)象,針對(duì)影響干酪品質(zhì)的三個(gè)主要因素:發(fā)酵劑、凝乳酶、加熱最終溫度,進(jìn)行單因素試驗(yàn)研究。并在此基礎(chǔ)上,利用正交試驗(yàn)進(jìn)一步確定影響干酪品質(zhì)的幾個(gè)主要影響因素參數(shù)。
1.1.1 菌種
R-707型混合冷凍干燥菌種,內(nèi)含:乳脂鏈球菌1%~5%,乳酪鏈球菌70%~80%,丁二酮乳鏈球菌10%~20%,橙明串珠菌5%~15%;瑞士乳桿菌;嗜熱鏈球菌2%。巴氏殺菌乳或鮮牛乳。
1.1.2 試驗(yàn)試劑
凝乳酶;濃鹽酸;硼酸;硫酸銅;濃硫酸;硫酸鉀;30%雙氧水;吐溫;乳糖;碳酸鈣;檸檬酸銨;玉米漿;磷酸氫二鉀;氯化鈣;酵母膏;牛肉膏;葡萄糖;蛋白胨;乙酸鈉;胰蛋白胨;大豆蛋白。
1.1.3 主要儀器設(shè)備
凱氏定氮儀KDY-9830;FLC-3超凈臺(tái):哈爾濱市東聯(lián)公司;旋轉(zhuǎn)黏度計(jì)NDJ-4;XSZ-G型電子顯微鏡;PHS-3C酸度計(jì);電子恒溫水浴鍋;TGL16M型離心機(jī);WH-861型漩渦混合器;自制蒸餾設(shè)備;FD-1真空冷凍干燥機(jī);JA50OZ電子天平(百分之一)。
1.2.1 發(fā)酵劑優(yōu)化篩選
在乳中的生長(zhǎng)與發(fā)酵特性研究:乳酸菌菌株經(jīng)2~3次活化,乳脂鏈球菌以5%(活菌數(shù)約107cfu/mL)接種量,接入經(jīng)112℃、10min滅菌并冷卻后的12%復(fù)原脫脂乳中,35℃發(fā)酵培養(yǎng)。嗜熱鏈球菌以2%(活菌數(shù)約107cfu/mL)接種量,接入經(jīng)112℃、10min滅菌并冷卻后的12%復(fù)原脫脂乳中,42℃發(fā)酵培養(yǎng)。研究其發(fā)酵特性,檢測(cè)指標(biāo)如下:凝乳時(shí)間、凝乳時(shí)活菌數(shù)、滴定酸度及pH、雙乙酞含量、可溶性氮含量,從中選出發(fā)酵性能優(yōu)良的菌種(株)。
1.2.2 軟質(zhì)干酪制作流程[8]
脫脂乳→滅菌→冷卻至35℃→接種發(fā)酵劑→添加氯化鈣、凝乳酶→培養(yǎng)至凝乳→切割→靜置15min→加熱至40℃→二次加熱→排乳清→水洗
(1)用短時(shí)發(fā)酵法,發(fā)酵劑接種量為5%。
(2)添加氯化鈣、凝乳酶。氯化鈣配成10%溶液,添加量為0.01%;粉末狀微生物凝乳酶用無(wú)菌濃度為1%鹽水配成6.5%的溶液,35℃保溫30min,現(xiàn)用現(xiàn)配。
(3)加熱:加熱分為兩個(gè)階段,35~40℃之間每5min升1℃,40℃到加熱終溫度每5min升2℃。
(4)水洗:排乳清后先用21℃水洗一次,然后再用5℃水洗一次除去殘留乳糖以阻止后酸化。
1.2.3 混合菌種配比對(duì)干酪的品質(zhì)影響
將原料乳滅菌后接種發(fā)酵劑,總接種量為5%,乳脂鏈球菌與嗜熱鏈球菌比例分別為:1:0、1:1、4:1、8:1、16:1、32:1,35℃發(fā)酵至凝乳。觀察記錄凝乳時(shí)間,經(jīng)切割、靜置、加熱升溫后,濾出乳清,檢測(cè)乳清pH和OD值,稱量干酪產(chǎn)量,測(cè)定水分含量,計(jì)算產(chǎn)率。
1.2.4 凝乳酶添加量對(duì)干酪的品質(zhì)影響
將原料乳滅菌后接種發(fā)酵劑,總接種量為5%,加入0.01% CaCl2和凝乳酶,凝乳酶配成6.5%的溶液,添加量分別為:0.05mL/100L牛奶、0.1mL/100L 牛奶、0.2mL/100L牛奶,35℃發(fā)酵至凝乳。觀察記錄凝乳時(shí)間,經(jīng)切割、靜置、加熱升溫后,濾出乳清,檢測(cè)乳清pH和OD值,稱量干酪產(chǎn)量,測(cè)定水分含量,計(jì)算產(chǎn)率。
1.2.5 加熱終溫度對(duì)干酪的品質(zhì)影響
將原料乳滅菌后接種發(fā)酵劑,總接種量為5%,加入0.01% CaCl2和凝乳酶(0.1mL/100L牛奶),35℃發(fā)酵至凝乳。觀察記錄凝乳時(shí)間,經(jīng)切割、靜置,加熱升溫,終溫度分別為50℃、55℃、60℃和65℃,排乳清,濾出乳清后,檢測(cè)乳清pH和OD值,稱量干酪產(chǎn)量,測(cè)定水分含量,計(jì)算產(chǎn)率。
經(jīng)1.2.1試驗(yàn)篩選,結(jié)合各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo),以LC1與S.t-SY兩株菌作為混合菌種加工制作干酪,總接種量為5%,考察不同菌種配比對(duì)干酪品質(zhì)的影響。LC1與S.t-SY分別經(jīng)復(fù)原脫脂乳活化后,分別按1:0、1:1、4:1、8:1、16:1、32:1搭配制成混合菌種發(fā)酵劑,分別以5%接種量接于脫脂乳中,35℃發(fā)酵至凝乳。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 不同菌種配比對(duì)干酪品質(zhì)的影響
由表1可以看出,隨著嗜熱鏈球菌S.t-SY比例的增大,凝乳時(shí)間縮短,酸奶味加重;當(dāng)菌種比例為1:0、8:1、16:1、32:1時(shí),凝乳時(shí)間差別不大。采用混合發(fā)酵劑制作的干酪其校正產(chǎn)率與單一發(fā)酵劑相比差異性顯著(P<0.01),說(shuō)明嗜熱鏈球菌的加入能增加干酪的校正產(chǎn)率。發(fā)酵劑菌種配比不同,校正產(chǎn)率差異性顯著(P<0.01),當(dāng)LC1:S.t-SY為8:1和16:1時(shí),校正產(chǎn)率差異性不顯著(P>0.01),達(dá)到最大值;隨著混合菌種中LC1比例的增大,實(shí)測(cè)產(chǎn)率與校正產(chǎn)率也增加,但當(dāng)LC1:S.t-SY為1:1時(shí),實(shí)測(cè)產(chǎn)率與校正產(chǎn)率均較1:0和4:1時(shí)高,水分含量也高,可能是因?yàn)槭葻徭溓蚓酿ざ纫蛩卦斐杉庸み^(guò)程中水分不容易排出。
由乳清pH變化情況可以看出,隨發(fā)酵劑中嗜熱鏈球菌的比例增加,乳清pH先升高再降低,可見(jiàn)添加適量的嗜熱鏈球菌能夠提高干酪的乳清pH,但這幾個(gè)水平之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。乳清pH的變化與干酪中礦物質(zhì)損失情況有關(guān),是確定干酪礦物質(zhì)含量的重要因素,干酪的產(chǎn)酸凝乳過(guò)程可將不溶性的鈣、磷轉(zhuǎn)變成可溶的而游離出來(lái),伴隨乳清的排放而損失。如果排出乳清的pH值較高,流失到乳清中的鈣相對(duì)較少,制成的干酪組織狀態(tài)富有彈性,干酪中存留的礦物質(zhì)含量高,反之,制成的干酪質(zhì)地趨于疏松,存留的礦物質(zhì)含量低。
乳清OD值間接反映了干酪蛋白含量損失狀況。幾組乳清OD值由小到大依次為1:0、8:1、1:1、32:1、4:1、16:1,說(shuō)明干酪制作中蛋白損失量最小的是1:0,最大的是16:1,但LC:S.t-SY=1:0時(shí)干酪產(chǎn)率較低,因此進(jìn)一步試驗(yàn)以8:1的比例接種。
乳脂鏈球菌LC1與嗜熱鏈球菌S.t-SY分別經(jīng)復(fù)原脫脂乳活化后,按8:1配比(總接種量5%)接入脫脂乳中,加入0.01% CaCl2,攪拌10min后,加入凝乳酶,凝乳酶添加量分別為0.05mL/100L牛奶、0.1mL/100L牛奶、0.2mL/100L牛奶,35℃發(fā)酵至凝乳。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 不同凝乳酶添加量對(duì)干酪品質(zhì)的影響
由表2可以看出,制作干酪時(shí)不同凝乳酶添加量不影響凝乳時(shí)間。添加少量凝乳酶的主要作用在于穩(wěn)定切割后的干酪粒,使其保持合適的硬度以及在加熱過(guò)程中避免顆?;ハ囵そY(jié)。其次添加凝乳酶能夠提高干酪的產(chǎn)量。
試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),添加酶的干酪與不添加酶的干酪校正產(chǎn)率差異性顯著(P<0.05),當(dāng)酶添加量為0.1mL/100L牛奶時(shí)的校正產(chǎn)率最高,顯著高于其他兩個(gè)添加組(P<0.05),較未添加組增加了4.67%。加入凝乳酶的干酪具有質(zhì)地松軟、成糊狀的特性,這可能是由于其含有較多的水分,而干酪的高水分含量是因?yàn)槔业鞍孜υ鰪?qiáng)以及乳清蛋白和酪蛋白結(jié)合存在,這對(duì)于增加產(chǎn)量十分有利。酶添加量的不同會(huì)造成酶滯留量不同,而酶的滯留會(huì)影響干酪中蛋白水解和干酪的功能特性。凝乳酶添加量過(guò)小,會(huì)造成凝乳強(qiáng)度差,蛋白和脂肪等成分隨乳清排出,降低干酪產(chǎn)率;而隨著凝乳酶添加量的增多,干酪的硬度也隨之增加,凝乳成顆粒,產(chǎn)率也會(huì)下降。
本試驗(yàn)條件下干酪制作中加入凝乳酶,乳清pH值有升高趨勢(shì),但幾組間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05),說(shuō)明添加凝乳酶對(duì)干酪中礦物質(zhì)損失量無(wú)顯著影響。
添加凝乳酶制得的干酪,乳清OD值增加,即蛋白損失量增加,當(dāng)凝乳酶添加量為0.1mL/100L牛奶時(shí),排出乳清OD值較低,蛋白損失量減少。
乳脂鏈球菌LC1與嗜熱鏈球菌S.t-SY分別經(jīng)復(fù)原脫脂乳活化后,按8:1配比(總接種量5%)接于脫脂乳中,加入0.01% CaCl2,攪拌10min后,加入凝乳酶,凝乳酶的加入量為0.1mL/100L 牛奶,35℃發(fā)酵至凝乳,靜置,加熱升溫,加熱終溫度分別為50℃、55℃、60℃和65℃,排乳清,試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3。
表3 不同加熱終溫度對(duì)千酪品質(zhì)的影響表
表3表明,隨加熱終溫度升高,干酪校正產(chǎn)率先升高再降低,差異性顯著(P<0.05);乳清pH先升高再降低,加熱終溫度為55℃、60℃時(shí)乳清pH無(wú)明顯差異(P>0.05),高于50℃、65℃時(shí)的乳清pH。
加熱終溫度升高,乳清OD值亦增加,硬度增大,這可能是因?yàn)殡S著加熱溫度的增加,干酪硬度增大,排出乳清量增多,隨乳清排出的蛋白增加。
根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,以發(fā)酵劑菌種配比(A,其中A1 1:1、A2 8:1、A3 16:1),凝乳酶添加量(B,其中B1 0.05mL/100L牛奶、B2 0.1mL/100L牛奶、B3 0.2mL/100L牛奶),加熱終溫度(C,其中C1 50℃、C2 55℃、C3 60℃)三因素,采用三因素三水平L9(33)正交試驗(yàn),并以干酪校正產(chǎn)率、乳清pH和乳清OD值為試驗(yàn)指標(biāo),篩選并確定干酪制作的最佳工藝,正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。
表4 干酪制作最佳工藝條件正交試驗(yàn)結(jié)果
表4正交試驗(yàn)極差分析結(jié)果表明:以干酪校正產(chǎn)率為試驗(yàn)指標(biāo),影響因素順序?yàn)?發(fā)酵劑菌種配比(A)>凝乳酶添加量(B)>加熱終溫度(C),最佳處理為A2B2C2,即在干酪制作過(guò)程中添加發(fā)酵劑配比為L(zhǎng)C1:S.t-SY=8:l,凝乳酶添加量為0.1mL/100L牛奶,加熱終溫度為55℃。
按照本研究確定的試驗(yàn)條件制備干酪,測(cè)定樣品各種感官及微生物指標(biāo)。發(fā)現(xiàn)自制干酪產(chǎn)品的感官指標(biāo)、衛(wèi)生指標(biāo)均符合NY478-2002《軟質(zhì)干酪》的要求,該產(chǎn)品呈均勻一致的白色,具有乳特有的氣味和滋味,無(wú)苦味,質(zhì)地均勻細(xì)膩、柔軟有顆粒感;大腸菌群(MPN/g)小于3.0,無(wú)致病菌檢出。