鹿茸菇生態(tài)學(xué)特性與液體菌種配方的優(yōu)化研究

張凌姍

鹿茸菇生態(tài)學(xué)特性與液體菌種配方的優(yōu)化研究

張凌姍

（古田縣食用菌研發(fā)中心，福建 古田 352200）

以鹿茸菇菌絲為實(shí)驗(yàn)材料，以菌絲生長(zhǎng)速度和菌絲干重為主要指標(biāo)，用平板培養(yǎng)法和液體搖瓶培養(yǎng)法，觀測(cè)其不同溫度、培養(yǎng)基pH、碳源、氮源條件下的菌絲生長(zhǎng)情況，并優(yōu)化液體菌種配方。試驗(yàn)結(jié)果為：適合鹿茸菇生長(zhǎng)的最佳碳源為淀粉，最佳氮源為酵母粉，菌絲生長(zhǎng)的最適溫度為 24 ℃，最適pH為5.6。液體菌種的最優(yōu)碳源氮源配置培養(yǎng)基為面粉和蛋白胨，25 ℃、120 rpm振蕩培養(yǎng)10天后的菌絲干重0.820 g/mL。

鹿茸菇；液體菌種；培養(yǎng)基配方；菌絲干重

鹿茸菇（）又稱荷葉離褶傘，在我國(guó)云南又稱為冷香菌、一窩羊、北風(fēng)菌等，屬擔(dān)子菌亞門(mén)，菌傘目，白蘑科，離傘菌屬[1]。研究表明，鹿茸菇子實(shí)體中粗蛋白、氨基酸含量較高，脂肪含量較低，還含有對(duì)人體有益的微量元素鋅、銅、硒和大量維生素，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。據(jù)現(xiàn)代科學(xué)研究結(jié)果，鹿茸菇含有β-葡聚糖，長(zhǎng)期食用有抗腫瘤的功效；其還具有降血壓、降膽固醇、抑制糖尿病和抗過(guò)敏等藥用功效[2]。有關(guān)鹿茸菇的研究目前主要集中在栽培技術(shù)上，對(duì)培養(yǎng)條件研究多不系統(tǒng)，且缺少液體菌種培養(yǎng)方面的報(bào)道。本文對(duì)鹿茸菇生態(tài)學(xué)特性和液體菌種配方予以研究報(bào)道。

1 試驗(yàn)材料

1.1 供試菌株

鹿茸菇1號(hào)，編號(hào)LR01，保藏于古田縣食用菌研發(fā)中心。

1.2 培養(yǎng)基配方

PDB培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，水1 000 mL。PSB培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，蔗糖20 g，水1 000 mL。PMB培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g，麥芽糖20 g，水1 000 mL。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基：蛋白胨8 g，葡萄糖20 g，KH2PO41 g，MgSO40.5 g，維生素B110 mg，瓊脂20 g、蒸餾水 1 000 mL?；A(chǔ)液體培養(yǎng)基：蛋白胨8 g，葡萄糖20 g，KH2PO41 g，MgSO40.5 g，維生素B110 mg，蒸餾水1 000 mL。

2 試驗(yàn)方法

2.1 生態(tài)學(xué)特性研究

（1）溫度。將鹿茸菇菌株接種到PDA平板培養(yǎng)基上，于24 ℃下培養(yǎng)14天后，在超凈工作臺(tái)上用經(jīng)過(guò)火焰灼燒滅菌并冷卻的直徑為6 mm的打孔器打取菌落圓片，將菌落圓片接種到直徑9 cm的PDA平板上，置于24 ℃恒溫箱中避光倒置培養(yǎng)。5天后，沿菌落邊緣劃線，然后分別置于4 ℃、20 ℃、22 ℃、24 ℃、26 ℃、28 ℃、30 ℃、32 ℃、34 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，每溫度設(shè)3個(gè)重復(fù)。7天后采用劃“十”字法測(cè)量標(biāo)記線到菌落邊緣的長(zhǎng)度，觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速度[3]，菌絲生長(zhǎng)速度=/7。

（2）pH。用1 moL/L NaOH和1 moL/L HCl調(diào)節(jié)PDA培養(yǎng)基pH為4.6，5.6，6.6，7.6，8.6，9.6，10.6，每pH設(shè)3個(gè)重復(fù)。按2.1（1）方法定量接種后，置于24 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。14天后采用劃“十”字法測(cè)量菌落直徑，觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)，計(jì)算菌絲生長(zhǎng)速度[4]，菌絲生長(zhǎng)速度=（－6）/（2×14）。

（3）碳源。以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為對(duì)照，分別以蔗糖、麥芽糖、淀粉、木糖代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的葡萄糖，共制備5種不同碳源的培養(yǎng)基。按2.1（1）方法定量接種于各碳源平板培養(yǎng)基上，置于24 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每種碳源設(shè)3個(gè)重復(fù)。14天后采用劃“十”字法測(cè)量菌落直徑，觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)，按2.1（2）方法計(jì)算菌絲長(zhǎng)速。

（4）氮源。以基礎(chǔ)培養(yǎng)基為對(duì)照，分別以酵母粉、硫酸銨、硝酸鉀、尿素代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的蛋白胨，共制備5種不同氮源的培養(yǎng)基。按2.1（1）方法定量接種于各氮源培養(yǎng)基上，置于24 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每種氮源設(shè)3個(gè)重復(fù)。14天后采用劃“十”字法測(cè)量菌落直徑，觀察菌絲長(zhǎng)勢(shì)，按2.1（2）計(jì)算菌絲長(zhǎng)速。

表1 不同溫度下的菌絲生長(zhǎng)情況

注：菌絲生長(zhǎng)速度后不同大小寫(xiě)字母分別表示差異極顯著和顯著。表2同。

2.2 液體菌種配方優(yōu)化試驗(yàn)

（1）碳源。以基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基為對(duì)照，分別用蔗糖、麥芽糖、淀粉、甘露醇、玉米粉、面粉代替其中的葡萄糖，配制成7種不同碳源的液體培養(yǎng)基。采用121 ℃高壓滅菌30 min。將鹿茸菇菌種接在PDA平板上培養(yǎng)10天后，用經(jīng)灼燒滅菌并冷卻的直徑為6 mm打孔器打取菌落圓片接種到上述7個(gè)處理液體培養(yǎng)基上，每培養(yǎng)基接種3片，每處理設(shè)4個(gè)重復(fù)。接種后置于120 r/min、25 ℃搖床條件下培養(yǎng)10天。培養(yǎng)后的菌液采取真空抽濾法，將獲得的菌絲置于55 ℃下干燥至恒重，測(cè)量菌絲體質(zhì)量[5-7]。

（2）氮源。以基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基為對(duì)照組，分別以黃豆粉、酵母粉、酒石酸銨、硫酸銨、硝酸銨代替蛋白胨，配制成6種不同氮源的液體培養(yǎng)基。方法步驟同2.2（1）。

（3）以上述方法選出的最佳碳源和氮源，配制成優(yōu)化的液體培養(yǎng)基（簡(jiǎn)稱BP培養(yǎng)基），同時(shí)配置PDB、PSB、PMB培養(yǎng)基為對(duì)照。其他步驟同2.2（1）。

3 結(jié)果與分析

3.1 生態(tài)學(xué)特性表現(xiàn)

（1）溫度與菌絲生長(zhǎng)的關(guān)系。鹿茸菇在20～32 ℃下均可生長(zhǎng)，且菌絲生長(zhǎng)速度隨著溫度升高呈現(xiàn)出先升高后降低的趨勢(shì)，在22～28 ℃條件下菌絲生長(zhǎng)較快速，長(zhǎng)勢(shì)濃密，最適溫度為24 ℃；在4 ℃下菌絲停止生長(zhǎng)，接種塊菌絲潔白，放置12天后轉(zhuǎn)入24 ℃可恢復(fù)生長(zhǎng)；在34 ℃下菌絲也不生長(zhǎng)，接種塊菌絲顏色變黃，轉(zhuǎn)入24 ℃后不能恢復(fù)生長(zhǎng)（表1）。

（2）pH與菌絲生長(zhǎng)的關(guān)系。鹿茸菇菌絲在pH 4.6～10.6下均可生長(zhǎng)，其中在pH 5.6～8.6范圍內(nèi)菌絲長(zhǎng)速差異不顯著，以pH 5.6～6.6的菌絲生長(zhǎng)快速、濃密（表2）。表明該菌適于在偏酸性環(huán)境下生長(zhǎng)。

（3）碳源與菌絲生長(zhǎng)的關(guān)系。鹿茸菇對(duì)供試5種碳源均能利用，且均表現(xiàn)菌絲稠密、潔白，但存在一定的差異（表3）。其中以淀粉為碳源的菌絲生長(zhǎng)速度快，平均長(zhǎng)速為1.81 mm/d；以木糖為碳源的生長(zhǎng)慢，平均長(zhǎng)速為0.73 mm/d；以淀粉和麥芽糖為碳源的，相互間差異未達(dá)極顯著水平。

表2 不同pH下的菌絲生長(zhǎng)情況

表3 不同碳源和氮源下的菌絲生長(zhǎng)情況

注：菌絲長(zhǎng)勢(shì)，所有碳源培養(yǎng)基均為稠密、潔白；氮源培養(yǎng)基中，蛋白胨、酵母粉菌絲稠密潔白，硝酸鉀菌絲稀疏、透明，硫酸銨菌絲白色、幾乎不生長(zhǎng)，尿素菌絲枯黃、不生長(zhǎng)。

表4 不同碳源、氮源下液體菌種的菌絲干重

表5 不同液體培養(yǎng)基下的菌絲生長(zhǎng)情況

（4）氮源與菌絲生長(zhǎng)的關(guān)系。鹿茸菇對(duì)除尿素、硫酸銨外的其他3種供試氮源均能利用，但相互間存在顯著性差異（表3）。其中，以酵母粉為氮源菌絲長(zhǎng)速最快，為1.75 mm/d，且長(zhǎng)勢(shì)好，表現(xiàn)稠密、潔白；以蛋白胨為氮源的對(duì)照，菌絲長(zhǎng)速雖稍慢于以硝酸鉀為氮源的處理，但長(zhǎng)勢(shì)較好，表現(xiàn)稠密、潔白；以尿素和硫酸銨為氮源的處理菌絲幾乎不生長(zhǎng)。

3.2 液體菌種培養(yǎng)基配方優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果

（1）碳源。如表4所示，以面粉為碳源時(shí)，菌絲體的干重大，菌球數(shù)量多、分布密實(shí)、大小均勻；以蔗糖、麥芽糖、葡萄糖為碳源的處理，菌球數(shù)量均較多，菌絲干重相互間差異不顯著。以玉米粉為碳源的，由于玉米粉本身有一定重量，所以菌絲干重較重而存在一定的誤差。因此，宜選擇面粉為鹿茸菇液體菌種配方的較佳碳源。

（2）氮源。以蛋白胨為氮源培養(yǎng)的菌絲干重大，為0.230 g/L，但其與以酵母粉為氮源的處理間差異不顯著。以黃豆粉為氮源的處理菌絲干重高達(dá)0.408 g/L，但其中都是黃豆粉，并無(wú)菌絲（表4）。因此，宜選擇蛋白胨為鹿茸菇液體菌種配方的較佳氮源。

（3）不同類(lèi)型液體培養(yǎng)基的菌絲生長(zhǎng)情況。優(yōu)化的BP培養(yǎng)基中的菌絲量極顯著大于PSB、PDB、PMB培養(yǎng)基（表5），干重為0.820 g/L，菌球密布，大小均勻。適合用于鹿茸菇液體菌種生產(chǎn)。

4 結(jié)論與討論

鹿茸菇是一種新興的食用菌品類(lèi)，了解其生態(tài)學(xué)特性是人工栽培的前提。鹿茸菇固體菌種萌發(fā)慢，容易被污染，液體菌種能夠克服這一缺點(diǎn)，因此，液體菌種優(yōu)化配方對(duì)人工栽培具有重要參考價(jià)值。本試驗(yàn)對(duì)鹿茸菇生態(tài)學(xué)特性的研究結(jié)果顯示，在PDA培養(yǎng)基上，最適培養(yǎng)條件為溫度24 ℃、pH 5.6；在固體培養(yǎng)基上的最適碳源為淀粉，最適氮源為酵母粉。對(duì)其液體菌種配方優(yōu)化的研究結(jié)果，最優(yōu)碳源、氮源分別為面粉、蛋白胨，培養(yǎng)出的液體菌種表現(xiàn)分散性好、菌球多、大小均勻。

本試驗(yàn)在研究鹿茸菇生態(tài)學(xué)特性和優(yōu)化液體菌種配方的過(guò)程中，僅進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室條件下和生產(chǎn)中一些常見(jiàn)原料的單因素試驗(yàn)，

對(duì)于不同碳源、氮源無(wú)機(jī)鹽的多因素多水平研究還需做更多的探索。此外，本試驗(yàn)液體菌種配方優(yōu)化僅在搖床培養(yǎng)條件下進(jìn)行，是否適用于大規(guī)模的發(fā)酵罐培養(yǎng)也有待進(jìn)一步試驗(yàn)論證。

[1]程繼紅. 名貴食藥用菌鹿茸菇商業(yè)化生產(chǎn)現(xiàn)狀與發(fā)展前景[J]. 食藥用菌, 2014(4): 194-197.

[2]郭癸存, 張引芳, 李世文, 等. 鹿茸菇工廠化栽培配方的研究[J]. 科學(xué)與財(cái)富, 2016(34): 168-168,170.

[3]張琪輝, 王威, 李成歡, 等. 斑玉蕈珠網(wǎng)病的病原菌及其生物學(xué)特性[J]. 菌物學(xué)報(bào), 2015, 34(3): 350-356.

[4]張琪輝. 白蘆菇生物學(xué)特性及其栽培過(guò)程理化性質(zhì)研究[J]. 黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué), 2019(1): 120-123.

[5]劉寧芳, 樂(lè)瑰琦. 海鮮菇液體菌種制作技術(shù)探究[J]. 現(xiàn)代食品, 2019(3): 38-41.

[6]李武輝, 陳博文, 孫曉瑞, 等. 海鮮菇液體菌種培養(yǎng)基碳源及氮源的篩選[J]. 農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào), 2017, 7(1): 73-76.

[7]李武輝, 張小林, 劉兵, 等. 海鮮菇液體菌種培養(yǎng)工藝優(yōu)化[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2016, 44(35): 43-44, 46.

張凌姍（1991—），女，本科，助理工程師，主要從事食用菌栽培技術(shù)研究。E-mail：ywl123789@qq.com。

S646

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2095-0934（2020）06-425-04