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    兩種精子分析儀的檢測性能評估*

    2020-12-22 07:32:10唐山山徐院花陸金春梁元姣
    中國男科學(xué)雜志 2020年6期
    關(guān)鍵詞:精液分析儀精子

    唐山山 徐院花 陸金春 梁元姣

    東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心(江蘇南京 210037)

    精液分析為評估男性生育力的最基本的測試。 早期精液分析以手工法為主,但因其操作繁瑣,且在評估精子活力時主觀性太強(qiáng)[1-2], 自計算機(jī)輔助精子分析(CASA)技術(shù)面世以來,手工法逐漸被CASA 分析取代。 目前,一些較大的男科實驗室或生殖中心,往往有多于一臺的CASA 系統(tǒng),即精子分析儀。 這些精子分析儀可能是同一廠家的,或者是不同廠家的,盡管有一些研究對不同精子分析儀的精液檢測結(jié)果進(jìn)行了比較[3-5],但這些研究均未使用質(zhì)控品,得出的結(jié)果不論有無差異都無法確定儀器的準(zhǔn)確性,故臨床指導(dǎo)意義并不大。 也有極少數(shù)研究使用了質(zhì)控品[6],但并沒有對不同的質(zhì)控品質(zhì)量進(jìn)行比較分析。 基于此,本研究前瞻性地使用了兩家不同精子分析儀廠家的質(zhì)控品進(jìn)行了交互檢測,以評價質(zhì)控品對精子分析儀的質(zhì)控作用;同時用兩種精子分析儀分別檢測了50 例精液樣本,并對其精液常規(guī)參數(shù)和精子運(yùn)動參數(shù)的結(jié)果差異性和相關(guān)性進(jìn)行了分析,以綜合評估兩種精子分析儀的檢測性能,從而為實施精液分析的質(zhì)量控制、精子分析儀參數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化以及精液分析結(jié)果的互認(rèn)提供依據(jù)[7]。 現(xiàn)報道如下。

    材料與方法

    一、儀器與試劑

    兩種精子分析儀分別為北昂精子分析儀(BEION S3)和瑞祺精子分析儀(CFT-9201)。 北昂公司提供的精子濃度質(zhì)控品為國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW(E)090026,批號:1801,即血小板標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),編號P210,標(biāo)稱值為(52±2.07)×106/ml; 瑞祺公司提供的精子濃度質(zhì)控品為乳膠珠,批號為Q08-300,標(biāo)稱值為(22±3)×106/ml。

    二、兩種精子分析儀的自身質(zhì)控品分析

    使用北昂公司自身提供的質(zhì)控品血小板標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),用北昂精子分析儀重復(fù)分析10 次;使用瑞祺公司自身提供的乳膠珠質(zhì)控品, 用瑞祺精子分析儀重復(fù)分析10 次。 操作人員對兩種質(zhì)控品的標(biāo)稱值均未知,分析完畢后,檢測結(jié)果由第三者進(jìn)行分析比較。

    三、兩種精子分析儀對另一方質(zhì)控品的分析

    使用北昂公司提供的質(zhì)控品血小板標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),用瑞祺精子分析儀重復(fù)分析10 次;使用瑞祺公司提供的乳膠珠質(zhì)控品,用北昂精子分析儀重復(fù)分析10 次。 操作人員對兩種質(zhì)控品的標(biāo)稱值均未知,分析完畢后,檢測結(jié)果由第三者進(jìn)行分析比較。

    四、兩種精子分析儀的精液常規(guī)參數(shù)及精子運(yùn)動參數(shù)比較

    隨機(jī)收集本中心50 例門診患者的新鮮精液樣本,液化后分別由兩名技術(shù)人員用北昂精子分析儀和瑞祺精子分析儀檢測精子濃度、 活動率及前向運(yùn)動精子百分率(PR) 以及各項精子運(yùn)動參數(shù), 包括曲線速率(VCL)、直線速率(VSL)、平均路徑速率(VAP)、精子頭側(cè)擺幅度(ALH)、直線性(LIN)、擺動性(WOB)、前向性(STR)、鞭打頻率(BCF)、平均角位移(MAD),雙盲的檢測結(jié)果匯總后由第三者進(jìn)行分析比較。

    五、統(tǒng)計學(xué)分析

    本研究數(shù)據(jù)采用SPSS Version 20(IBM 公司)統(tǒng)計軟件分析。不同組間結(jié)果比較進(jìn)行配對t檢驗。如果兩組結(jié)果呈正態(tài)分布,進(jìn)行Pearson 相關(guān)性分析;如果兩組結(jié)果呈非正態(tài)分布, 進(jìn)行Spearman 相關(guān)性分析。P≤0.05 為統(tǒng)計學(xué)分析具有顯著差異。

    結(jié) 果

    一、兩種精子分析儀的自身質(zhì)控品結(jié)果分析

    兩種精子分析儀用自身質(zhì)控品重復(fù)分析10 次的結(jié)果見表1。 結(jié)果顯示,瑞祺精子分析儀檢測自身質(zhì)控品的結(jié)果在其標(biāo)稱值范圍內(nèi), 而北昂精子分析儀檢測自身質(zhì)控品的結(jié)果遠(yuǎn)超其標(biāo)稱值范圍。

    表1 兩種精子分析儀分析兩種不同質(zhì)控品的結(jié)果比較(±s)

    表1 兩種精子分析儀分析兩種不同質(zhì)控品的結(jié)果比較(±s)

    注:* 與北昂精子分析儀比較,P<0.05

    精子分析儀 次數(shù)(n) 北昂質(zhì)控品[標(biāo)稱值:(52±2.07)×106/ml)]瑞祺質(zhì)控品[標(biāo)稱值:(22±3)×106/ml]北昂 10 45.34±2.66 24.41±3.05瑞祺 10 46.07±0.73 21.79±1.38*

    二、兩種精子分析儀對另一方質(zhì)控品的分析

    兩種精子分析儀分別對另一方質(zhì)控品重復(fù)分析10次的結(jié)果見表1。 結(jié)果顯示,瑞祺精子分析儀檢測北昂質(zhì)控品的檢測結(jié)果與北昂精子分析儀的結(jié)果沒有差異, 而北昂精子分析儀檢測瑞祺質(zhì)控品的檢測結(jié)果顯著高于瑞祺精子分析儀的結(jié)果, 且結(jié)果變異顯著高于瑞祺精子分析儀結(jié)果(CV分別為12.49%和6.33%),而且部分結(jié)果已明顯失控。

    三、兩種精子分析儀的精液常規(guī)參數(shù)比較

    50 例精液樣本分別用北昂精子分析儀和瑞祺精子分析儀檢測,精子濃度、PR 和活動率結(jié)果見表2。結(jié)果顯示,兩者的PR 結(jié)果有顯著差異。 盡管兩者的精子濃度和活動率結(jié)果沒有顯著差異, 但與瑞祺精子分析儀相比,北昂精子分析儀的精子濃度結(jié)果有增高趨勢,而精子活動率結(jié)果有降低趨勢。

    表2 兩種精子分析儀精液常規(guī)參數(shù)比較(x±s)

    四、兩種精子分析儀的精子運(yùn)動參數(shù)比較

    50 例精液樣本分別用北昂精子分析儀和瑞祺精子分析儀檢測,精子運(yùn)動參數(shù)結(jié)果見表3。結(jié)果顯示,除了VSL 沒有差異外,精子運(yùn)動其他參數(shù)均有顯著性差異,而且, 北昂精子分析儀的精子運(yùn)動所有參數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)均高于瑞祺精子分析儀。

    表3 兩種精子分析儀的精子運(yùn)動參數(shù)比較(x±s)

    五、 兩種精子分析儀的精液常規(guī)參數(shù)和精子運(yùn)動參數(shù)的相關(guān)性分析

    50 例精液樣本分別用北昂精子分析儀和瑞祺精子分析儀檢測, 兩種精子分析儀的精液常規(guī)參數(shù)與精子運(yùn)動參數(shù)的相關(guān)性分析結(jié)果見表4。 除LIN 和BCF 沒有顯著相關(guān)性外, 精液常規(guī)參數(shù)和其余精子運(yùn)動參數(shù)均呈顯著正相關(guān)。

    表4 兩種精子分析儀的精液常規(guī)參數(shù)與精子運(yùn)動參數(shù)的相關(guān)性分析結(jié)果(n=50)

    討 論

    CASA 系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于男科和生殖中心實驗室的精液常規(guī)分析。 盡管CASA 分析相比于手工法更加客觀、準(zhǔn)確、快速,重復(fù)性更好,尤其是在分析精子活力時更顯優(yōu)勢[8-11],但不同的CASA 分析系統(tǒng),由于其檢測原理、幀率、參數(shù)設(shè)置、配置等的不同[12],檢測結(jié)果可能相差很大。 而實驗室技術(shù)人員又過度依賴精子分析儀的自動化,如果再缺乏質(zhì)控意識,精子分析儀的檢測結(jié)果可能會整體偏高或偏低, 導(dǎo)致不同實驗室的結(jié)果缺乏可比性。 如果一個實驗室有2 臺以上的精子分析儀,同一患者檢測兩次的結(jié)果可能來自不同精子分析儀,如果這些精子分析儀不進(jìn)行性能比較和驗證, 可能導(dǎo)致同一患者的檢測結(jié)果差異較大[13]。 因此,為了保證同一實驗室的結(jié)果具有可比性, 以及不同實驗室的結(jié)果可以互認(rèn), 使用質(zhì)控品對不同精子分析儀進(jìn)行性能驗證及結(jié)果比對十分重要。

    本中心在不同時期購買了兩種不同的精子分析儀,分別置于相隔不遠(yuǎn)的兩個院區(qū)(步行約十分鐘)。 臨床醫(yī)生面對同一患者的兩份差異較大的精液常規(guī)分析報告時,往往會質(zhì)疑實驗室檢測結(jié)果不準(zhǔn)確。 這樣的差異是由于患者自身原因所致還是實驗室的檢測誤差?如果是實驗室的檢測誤差, 不同的兩種精子分析儀可能是導(dǎo)致結(jié)果差異的主要原因。 基于此,本研究分別使用質(zhì)控品和精液樣本對兩種精子分析儀的性能進(jìn)行了評估。

    我們首先使用了兩種精子分析儀對各自廠家提供的質(zhì)控品進(jìn)行了交互檢測。 結(jié)果顯示,瑞祺精子分析儀檢測自身質(zhì)控品的結(jié)果在其標(biāo)稱值范圍內(nèi), 而北昂精子分析儀檢測自身質(zhì)控品的結(jié)果遠(yuǎn)超其標(biāo)稱值范圍;瑞祺精子分析儀檢測北昂質(zhì)控品的檢測結(jié)果與北昂精子分析儀的結(jié)果沒有差異, 而北昂精子分析儀檢測瑞祺質(zhì)控品的檢測結(jié)果顯著高于瑞祺精子分析儀的結(jié)果,且部分結(jié)果已明顯失控。 提示,不同廠家提供的精子濃度質(zhì)控品質(zhì)量有很大差異, 且不同精子分析儀的檢測性能亦有不同。 瑞祺提供的質(zhì)控品為乳膠珠,而北昂提供的質(zhì)控品為血小板標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì), 前者的直徑更接近精子頭大小,且分散更加均勻、清晰,而后者直徑偏小,提示,血小板標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可能不適宜作為精子濃度的質(zhì)控品。 究竟何種質(zhì)控品適合精液常規(guī)分析,應(yīng)有標(biāo)準(zhǔn)化的專業(yè)機(jī)構(gòu)認(rèn)證, 而此標(biāo)準(zhǔn)化的專業(yè)機(jī)構(gòu)應(yīng)有從事精液分析的專業(yè)人員參與。

    接著,我們使用兩種精子分析儀對臨床上50 例精液樣本的精子濃度、 活動率、PR 及精子運(yùn)動參數(shù)進(jìn)行了檢測,結(jié)果顯示,兩種精子分析儀檢測的PR 有顯著差異,而精子濃度和活動率雖然沒有顯著性差異,但與瑞祺精子分析儀相比, 北昂精子分析儀的精子濃度結(jié)果有增高趨勢,而精子活動率結(jié)果有降低趨勢;精子運(yùn)動參數(shù)除了VSL 沒有顯著差異外, 其余均有顯著性差異。 再次提示,兩種精子分析儀的檢測性能存在差異。進(jìn)一步對兩者檢測的各項精子參數(shù)進(jìn)行相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)除LIN 和BCF 沒有顯著相關(guān)性外,精液常規(guī)參數(shù)和其余精子運(yùn)動參數(shù)均呈顯著正相關(guān)。 提示,兩種精子分析儀之間存在系統(tǒng)誤差。

    不同精子分析儀的檢測性能不同, 可能與其硬件配置、參數(shù)設(shè)置有關(guān),如瑞祺精子分析儀使用的是相差顯微鏡,而北昂精子分析儀使用的是普通光學(xué)顯微鏡,前者可明顯濾去精液中的大部分雜質(zhì), 故檢測精確性明顯優(yōu)于后者, 這可從瑞祺精子分析儀檢測的幾乎所有精液常規(guī)參數(shù)和精子運(yùn)動參數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)均低于北昂精子分析儀得到證實。 這也提示,用于精子濃度和活力分析時, 帶有相差顯微鏡的精子分析儀性能要明顯優(yōu)于帶有普通光學(xué)顯微鏡的精子分析儀[14],同理,用于手工精液常規(guī)分析時,首選相差顯微鏡為宜。另外,精子分析儀的參數(shù)設(shè)置亦可顯著影響檢測結(jié)果,如捕獲精子頭的下限和上限的設(shè)置,下限值太高,在濾去大部分碎片時,小頭精子亦可被漏檢;上限值太低,在排除精液中大部分細(xì)胞或大的雜質(zhì)的同時, 一些大頭精子亦可能被漏檢。 本研究提示的兩種精子分析儀之間存在明顯的系統(tǒng)誤差, 即可能與參數(shù)設(shè)置和運(yùn)算方法密切相關(guān)[13],因此,不同精子分析儀的參數(shù)設(shè)置和運(yùn)算方法應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化, 精子分析儀廠家應(yīng)讓實驗室技術(shù)人員了解參數(shù)設(shè)置和運(yùn)算方法的依據(jù)及可能帶來的對檢測結(jié)果的影響[15]。

    總之, 通過質(zhì)控品和精液樣本對兩種不同精子分析儀的檢測性能進(jìn)行評估后發(fā)現(xiàn), 不同精子分析儀的檢測性能存在明顯差異,系統(tǒng)誤差顯著。 為了確保同一實驗室或不同實驗室的精子分析儀結(jié)果具有可比性,首先得有合適的和經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化機(jī)構(gòu)認(rèn)證的質(zhì)控品, 且在儀器使用前、 每次常規(guī)分析前均應(yīng)用質(zhì)控品評估其檢測準(zhǔn)確性和重復(fù)性;其次,不同精子分析儀要有合適的配置,相差顯微鏡、高幀率的CCD(電荷耦合器件)、準(zhǔn)確測量過計數(shù)池深度的精子計數(shù)板等[13,16],都是確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確的必要條件;另外,儀器參數(shù)的設(shè)置需要公開化和標(biāo)準(zhǔn)化, 尤其是有關(guān)精子頭大小和精子位移的參數(shù)閾值對檢測結(jié)果影響較大。

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