紅豆杉葉干粉對(duì)仙居雞肌肉品質(zhì)和紫杉醇含量的影響

劉銀蘭 李國(guó)勤 葉 軒 李浙烽 趙 威 馮佩詩(shī) 顧天天 盧立志*

（1.福建農(nóng)林大學(xué)，福建福州350000；2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，浙江杭州310021；3.浙江省仙居種雞場(chǎng)，浙江臺(tái)州311719；4.杭州康德權(quán)飼料有限公司，浙江杭州311107）

隨著社會(huì)的發(fā)展和生活水平的不斷提高，畜產(chǎn)品安全和品質(zhì)成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)[1]，中草藥因毒副作用小、無(wú)殘留、無(wú)污染被廣泛應(yīng)用到畜禽生產(chǎn)中[2]。邱玉朗等[3]研究發(fā)現(xiàn)，用黃芪、穿心蓮提取物和陳皮組成的復(fù)方中草藥代替抗生素作為飼料添加劑應(yīng)用到動(dòng)物生產(chǎn)中，可改善肉色、提高雞肉嫩度和適口性，提升肌肉的保水能力。陳國(guó)順等[4]發(fā)現(xiàn)將復(fù)方中草藥替代抗生素作為飼料添加劑添加到肉仔雞飼糧中，可提高肉仔雞的肉質(zhì)性狀。鐘敏等[5]報(bào)道將由板藍(lán)根、益母草、大青葉等組成的復(fù)方中草藥添加到三黃雞基礎(chǔ)日糧中，可促進(jìn)三黃雞肌肉的含水率、減少脂肪過(guò)多沉積、提高肌肉中氨基酸的含量等。紅豆杉，為紅豆杉科屬種植物，是四季常青類喬木或灌木，有較好的藥用價(jià)值和療效，其物種稀缺、資源寶貴[6]。從紅豆杉中大概能分離出500 余種紫杉烷類化合物[7]，大量研究者發(fā)現(xiàn)紫杉醇中紫杉烷類化合物具有較好的抗癌作用[8]。紫杉醇在1992 年12 月被允許上市，在肺癌、乳腺癌、卵巢癌等多種癌癥的治療中有著重要作用[9]。紅豆杉作為中草藥的一種，應(yīng)用于畜禽生產(chǎn)方面的研究甚少，本試驗(yàn)擬通過(guò)研究仙居雞飼料中添加不同水平紅豆杉葉干粉對(duì)肌肉肌苷酸、肌內(nèi)脂肪、膽固醇含量的影響及紫杉醇在雞肉中的富集量，為紅豆杉葉干粉在家禽飼料中科學(xué)合理利用提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

紅豆杉葉干粉：試驗(yàn)選用紅豆杉葉干粉為2018年自紅豆杉樹(shù)修剪下的枝葉，自然光照曬干后粉碎而成，紫杉醇含量為19.6 μg/g，由浙江武義曼地亞紅豆杉開(kāi)發(fā)研究有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)選取140 日齡、健康狀況良好的仙居雞400只，隨機(jī)分成4組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20只。A組為對(duì)照組，飼喂基礎(chǔ)日糧，B、C、D組為試驗(yàn)組，在基礎(chǔ)飼糧中分別添加2%、3%和4%紅豆杉葉干粉。基礎(chǔ)日糧由浙江省仙居種雞場(chǎng)提供，日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。試驗(yàn)雞采用雙層式階梯籠養(yǎng)，雞舍為半封閉式，自然光照和通風(fēng)，試驗(yàn)期90 d。整個(gè)試驗(yàn)期間，雞只自由采食粉狀飼料、自由飲水，試驗(yàn)過(guò)程詳細(xì)記錄各組雞的健康情況，按雞場(chǎng)正常免疫程序進(jìn)行免疫和消毒，飼養(yǎng)管理?xiàng)l件保持一致。

1.3 組織樣品的采集

在試驗(yàn)第60、90 d 時(shí)，A、B、C 組和D 組仙居雞以各組重復(fù)為單位，每個(gè)重復(fù)選取1只雞，共20只，屠宰剝離胸肌、腿肌、肝臟，裝于密封袋，-80 ℃冰箱凍存?zhèn)錅y(cè)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.4.1 胸肌、腿肌、肝臟中紫杉醇含量的檢測(cè)

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

檢測(cè)參照趙文艷等[10]采取高效液相色譜(HPLC)法進(jìn)行紫杉醇含量測(cè)定。將胸肌、腿肌、肝臟用勻漿儀攪拌制成勻漿液，取250 μl，內(nèi)標(biāo)以地西泮作為參照，加入0.5 mol/l碳酸氫鈉堿化后，用乙醚進(jìn)行提取，取其上清液，放置于水浴鍋進(jìn)行揮發(fā)水分，用75 μl流動(dòng)相進(jìn)行溶解,結(jié)束時(shí)取10 μl 進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定紫杉醇含量。

1.4.2 肌苷酸含量的檢測(cè)

參照徐琪等[11]方法進(jìn)行肉質(zhì)樣品的制備：用電子天平稱取1.25 g 冰凍肉質(zhì)樣品，用剪刀在培養(yǎng)皿中將其剪碎，加4 ml 6% HClO4后放置于勻漿管中進(jìn)行勻漿，且將勻漿液轉(zhuǎn)移至10 ml 離心管中，加入1 ml 6% HClO4到勻漿管中進(jìn)行洗滌，洗滌后倒入離心管中，4 000 r/min 離心4 min，離心后將上清液倒入50 ml 燒杯中，靜置5 min，用2 ml 6% HClO4振蕩5 min 后進(jìn)行離心，此次上清液與前次進(jìn)行合并，分別用5、0.5 mol/l NaOH 將pH 值調(diào)至6.5，然后轉(zhuǎn)移到25 ml 容量瓶，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，用0.45 μm 濾膜進(jìn)行過(guò)濾，留取濾液進(jìn)行高效液相色譜分析。

1.4.3 肌內(nèi)脂肪含量的檢測(cè)

參照李忠榮[12]方法進(jìn)行檢測(cè)，在室溫下將冷凍樣品進(jìn)行解凍，解凍后剝離其表面肉眼可見(jiàn)的白色脂肪，放置于絞肉機(jī)中絞碎制成樣品。用電子天平稱取3.5 g 樣品，放置于2 張濾紙上，加入10 g 黃砂后進(jìn)行烘干稱重。將含有樣品的濾紙包烘干，稱重后放入索氏提取器中，進(jìn)行操作處理。

1.4.4 膽固醇含量的檢測(cè)

參照侯永剛等[13]的方法宰殺采血后的雞只，將胸肌、腿肌、肝臟進(jìn)行剝離后，稱取0.5 g樣品，加入生理鹽水置于勻漿管中進(jìn)行勻漿，將勻漿后的勻漿液稱取3 000 g進(jìn)行離心10 min，取2 ml的上清液放置于水浴鍋中用N2吹干，加入10 ml KOH-醇溶液(12% KOH用90%乙醇新鮮配制)在殘?jiān)校?0 ℃水浴中皂化15 min。皂化結(jié)束后取出試管，加入5 ml蒸餾水，在室溫下冷卻。非皂化部分則用10 ml己烷進(jìn)行提取，待靜置分層后量取5 ml己烷提取液，在65 ℃水浴中用N2吹干。

1.5 數(shù)據(jù)分析

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)使用Excel 2007 進(jìn)行整理，采用SPSS 17.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，并采用LSD 檢驗(yàn)法進(jìn)行各組間差異顯著性檢驗(yàn)，P<0.05 為差異顯著。試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 紅豆杉葉干粉對(duì)仙居雞胸肌、腿肌和肝臟中紫杉醇沉積量的影響

表2 不同紅豆杉葉干粉添加水平對(duì)仙居雞胸肌、腿肌、肝臟中的紫杉醇含量的影響(mg/kg)

由表2 可知，在試驗(yàn)期第60 d，A 組雞胸肌、腿肌和肝臟中均未檢測(cè)到紫杉醇的含量，B、C組和D組雞胸肌、腿肌和肝臟中雖可以檢測(cè)到紫杉醇的含量，但是各組之間紫杉醇含量差異不顯著（P>0.05）；在試驗(yàn)期第90 d，A組雞胸肌中未檢測(cè)到紫杉醇含量，C、D組雞胸肌中紫杉醇含量顯著高于B 組（P<0.05），C、D 組間紫杉醇含量差異不顯著（P>0.05）。B、C、D組間的腿肌中紫杉醇含量差異不顯著（P>0.05），D 組肝臟中紫杉醇含量顯著高于B組（P<0.05），C、D組間差異不顯著（P>0.05）。

2.2 紅豆杉添加水平對(duì)胸肌肌苷酸、肌內(nèi)脂肪、膽固醇含量的影響

由表3 可見(jiàn)，D 組雞胸肌肌苷酸含量顯著高于A組和C 組（P<0.05），其他各組之間均差異不顯著（P>0.05）；C、D 組胸肌肌內(nèi)脂肪含量顯著高于A 組（P<0.05），C 組顯著高于B 組（P<0.05），其他各組之間均差異不顯著（P>0.05）；D 組胸肌膽固醇含量顯著低于A組（P<0.05），其他各組之間均差異不顯著（P>0.05）。

表3 不同紅豆杉葉干粉添加水平對(duì)仙居雞胸肌肌苷酸、肌內(nèi)脂肪、膽固醇含量的影響(mg/kg)

2.3 紅豆杉添加水平對(duì)腿肌肌苷酸、肌內(nèi)脂肪、膽固醇含量的影響

由表4可見(jiàn)，各組間腿肌肌苷酸含量間差異不顯著（P>0.05）；B組腿肌肌內(nèi)脂肪含量顯著低于A組（P<0.05），其他各組間差異不顯著（P>0.05）；各組間腿肌膽固醇含量差異不顯著（P>0.05）。

表4 不同紅豆杉葉干粉添加水平對(duì)仙居雞腿肌肌苷酸、肌內(nèi)脂肪、膽固醇含量的影響(mg/kg)

2.4 紅豆杉添加水平對(duì)肝臟脂肪、膽固醇含量的影響

由表5可見(jiàn)，各組間肝臟內(nèi)脂肪和膽固醇含量差異不顯著（P>0.05）。

表5 不同紅豆杉葉干粉添加水平對(duì)仙居雞肝臟脂肪、膽固醇含量的影響(mg/kg)

3 討論

3.1 紅豆杉葉干粉對(duì)仙居雞胸肌、腿肌和肝臟中紫杉醇沉積量的影響

紫烷二萜類化合物中的紫杉醇是Wani 等[14]最早在分離短葉紅豆杉樹(shù)皮中的成分時(shí)發(fā)現(xiàn)的，并且確定了其化學(xué)結(jié)構(gòu)。Manthey等[15]發(fā)現(xiàn)紫杉醇具有抗有絲分裂和抗腫瘤的作用。紫杉醇的抗癌機(jī)制是抑制微管解聚，阻止腫瘤細(xì)胞有絲分裂的進(jìn)行，加快腫瘤細(xì)胞的凋亡[16]。趙燕等[17]在肉雞飼料中添加3%的紅豆杉后，發(fā)現(xiàn)紫杉醇可以沉積在雞肉和肝臟中，且肝臟中紫杉醇的沉積量最多。Wang 等[18]發(fā)現(xiàn)大鼠靜脈注射紫杉醇后,體內(nèi)各個(gè)組織中都有少量紫杉醇的存在，并以肝臟和脾臟中含量最高。孟素蕊等[19]報(bào)道小鼠尾靜脈注射紫杉醇注射液后，肝臟中紫杉醇的含量最高，腎臟次之。這些都說(shuō)明了紫杉醇不論是以注射液的形式，還是在飼料中添加紅豆杉的形式進(jìn)入動(dòng)物機(jī)體后，紅豆杉中的紫杉醇都會(huì)沉積到體內(nèi)的各個(gè)組織，且在肝臟中紫杉醇的沉積量最多。本試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，仙居雞采食紅豆杉葉干粉后，紅豆杉葉干粉中的紫杉醇可以從飼糧中轉(zhuǎn)移到肌肉和肝臟中，說(shuō)明可以將仙居雞肌肉和肝臟作為紫杉醇的載體，但紫杉醇在肌肉中的含量較低，可能是肝臟對(duì)紅豆杉葉干粉中紫杉醇進(jìn)行代謝時(shí)在肝臟中沉積比較多，而腸道吸收的紫杉醇量有限，所以通過(guò)血液運(yùn)輸?shù)郊∪庵械牧勘容^少，在雞肉中紫杉醇的沉積就比較少。韓銳等[20]研究發(fā)現(xiàn)對(duì)大鼠注射紫杉醇后，紫杉醇主要在肝臟中代謝，通過(guò)膽汁進(jìn)行清除，這也和本試驗(yàn)結(jié)果吻合。

3.2 紅豆杉葉干粉對(duì)仙居雞肌肉肌苷酸含量的影響

隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展和生活品質(zhì)的提高，具有獨(dú)特品質(zhì)、口味鮮美的肉類受到消費(fèi)者們的關(guān)注[21]，由于各種添加劑的使用逐漸趨于普遍，動(dòng)物生長(zhǎng)的速度不斷提高，肉制品品質(zhì)和口感越來(lái)越差[22-23]。而保持動(dòng)物性產(chǎn)品肉質(zhì)口感和風(fēng)味的物質(zhì)主要是肌苷酸的含量[24-25]，肌苷酸含量的高低間接反映其鮮味和口感，已被普遍應(yīng)用到各種動(dòng)物性肉質(zhì)產(chǎn)品的評(píng)定中，是肉品質(zhì)評(píng)定的重要指標(biāo)[26-27]。葉偉慶等[28]和Jay?asena 等[29]研究發(fā)現(xiàn)，不同性別的雞肌苷酸在不同部位代謝均有差異，而肌苷酸在不同部位所累積的含量也出現(xiàn)了很大的差異[30-31]。陳國(guó)宏等[32]對(duì)不同雞種的肌肉肌苷酸含量進(jìn)行了分析研究，發(fā)現(xiàn)不同品種、日齡、性別和部位肌苷酸含量存在很大的差異。本試驗(yàn)在仙居雞飼糧中添加不同水平的紅豆杉葉干粉時(shí)發(fā)現(xiàn)，D 組雞胸肌的肌苷酸含量顯著高于A 組，說(shuō)明在飼糧中添加紅豆杉可以改善雞肉中肌苷酸的含量。

3.3 紅豆杉添加水平對(duì)肌內(nèi)脂肪含量的影響

人類主要的蛋白質(zhì)來(lái)源是由動(dòng)物源性蛋白提供的[33]。相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)肌肉的嫩度、風(fēng)味、大理石紋等肉質(zhì)特征與肌內(nèi)脂肪的含量緊密相關(guān)[34]。肌內(nèi)脂肪含量的多少直接影響著肌肉的嫩度和風(fēng)味，是評(píng)定肉類品質(zhì)的重要條件之一[35-36]。當(dāng)肌內(nèi)脂肪含量在1%～3%之間逐漸增加時(shí)，肌纖維之間相連接的結(jié)締組織也就越少，肌肉整體的剪切力降低，此時(shí)肌纖維會(huì)越細(xì)，而肉的口感、嫩度會(huì)越好。當(dāng)肌內(nèi)脂肪的含量超過(guò)3%時(shí)，肉品入口會(huì)發(fā)膩，低于2%時(shí)肌肉水分含量較少，肉類品質(zhì)就會(huì)出現(xiàn)干癟，所以肌內(nèi)脂肪的最適含量在2%～3%[37-38]。本試驗(yàn)仙居雞飼料中添加不同水平的紅豆杉葉干粉后，胸肌中肌內(nèi)脂肪的含量在2.5%～3.0%之間，腿肌中肌內(nèi)脂肪含量在2.0%～2.5%之間。肌內(nèi)脂肪、皮下脂肪、內(nèi)臟脂肪的代謝存在著差異，雖然都屬于白色脂肪,但相比較而言肌內(nèi)脂肪的沉積速率較慢[39-41]。付睿琦等[42]的研究結(jié)果顯示，胸肌肌內(nèi)脂肪先于皮下脂肪和腹脂進(jìn)行沉積，但肌內(nèi)脂肪沒(méi)有腹脂的沉積速度快。陳國(guó)宏等[43]指出在不同部位肌內(nèi)脂肪含量存在著差異，胸肌、腿肌中的脂肪含量顯著低于肝臟中的含量，而腿肌中的脂肪含量又低于胸肌中的含量。紅豆杉葉干粉對(duì)仙居雞肌內(nèi)脂肪、皮下脂肪、內(nèi)臟脂肪代謝的影響有待進(jìn)一步研究。

3.4 紅豆杉添加水平對(duì)膽固醇含量的影響

膽固醇在人體正常生理活動(dòng)中有著重要作用。但是，如果人們長(zhǎng)期攝入膽固醇含量過(guò)高的肉制品，就會(huì)出現(xiàn)動(dòng)脈硬化、高血壓等疾病[44]。雞肉作為備受青睞的肉制品之一，降低各組織中膽固醇的含量尤為重要。趙燕等[45]發(fā)現(xiàn)在廣西三黃雞基礎(chǔ)日糧中添加紅豆杉干粉可促進(jìn)肉雞生長(zhǎng)，改善肉質(zhì)性狀，降低血清、肝臟及胸肌中的膽固醇含量。而中草藥中含有的某些類黃酮物質(zhì)具有抗氧化的特性和降低膽固醇含量等作用[46-48]。目前對(duì)紅豆杉葉干粉的研究多集中在其自身的藥用價(jià)值和提取方面[49-50]，將紅豆杉葉干粉直接作為飼料添加劑應(yīng)用到畜禽生產(chǎn)中，目前鮮有報(bào)道。本試驗(yàn)在仙居雞飼糧中添加不同水平的紅豆杉葉干粉，研究發(fā)現(xiàn)仙居雞胸肌中的膽固醇含量呈現(xiàn)出下降的趨勢(shì)，這可能與紅豆杉葉干粉中含有的黃酮類物質(zhì)有關(guān)。姜義寶[51]發(fā)現(xiàn)黃酮類物質(zhì)可以顯著提高肉羊的日增重（P<0.05)，明顯降低料重比（P<0.05)，顯著降低甘油三酯和總膽固醇。

4 結(jié)論

添加不同水平的紅豆杉葉干粉可以改善肌肉品質(zhì)、降低膽固醇的含量，同時(shí)紫杉醇可以沉積到肌肉和肝臟中，且在肝臟中紫杉醇沉積量較高。本試驗(yàn)條件下，建議紅豆杉葉干粉的添加量為4%。