礬根‘葡萄蘇打’的組織培養(yǎng)快繁技術(shù)研究

趙玉琳，陳陸琴，張謹(jǐn)華

（1 太原植物園，山西太原 030025；2 晉中學(xué)院生物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院）

礬根（Heuchera micrantha）為虎耳草科礬根屬植物，原產(chǎn)美洲中部，為多年生耐寒性草本，葉基生，品種繁多，各品種葉色不同，喜溫涼，厭炎熱，是少有的彩葉陰生地被植物[1]。在冬季溫暖地區(qū)，葉子四季不凋，覆蓋力強，花葉兼美，適合做花鏡、花壇、地被材料或庭院綠化材料[2]。彩葉植物因其色彩富于變化，彩葉期長，觀賞價值較高，能夠豐富景觀色彩，烘托園林氣氛，彌補園林綠化中淡花期色彩單調(diào)的問題，所以彩葉植物在城市綠化建設(shè)中發(fā)揮著越來越重要的作用，并日益受到園林工作者的喜愛[3]。礬根因品種不同，有種子繁殖的，但種子發(fā)芽慢且不整齊；有分株繁殖的，但無法獲得大量礬根苗滿足市場需求[4]。通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)對礬根‘葡萄蘇打’進(jìn)行了快速繁殖，為規(guī)?；a(chǎn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗于2017～1018 年在太原植物園進(jìn)行，供試材料為礬根‘葡萄蘇打’。4 月初取帶腋芽的幼嫩莖段作為外植體。

1.2 試驗方法

1.2.1 無菌外植體的獲得。在盆栽的礬根‘葡萄蘇打’上剪取帶腋芽的莖段，用洗衣粉浸泡10min，并在流水下沖洗1h，在超凈工作臺上用濾紙吸干莖段上的水分，75%酒精消毒20s，0.1%的氯化汞溶液洗滌1～3min，無菌水沖洗5～6 次，無菌濾紙吸干莖段表面水分，接種到初代培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

1.2.2 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件?；九囵B(yǎng)基：MS 培養(yǎng)基，均加蔗糖30g/L，瓊脂6g/L，pH 值5.8～6.2。培養(yǎng)條件：溫度控制在25±2℃，光照時間為12h/d，光照強度為2000Lx。

1.2.3 誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選。以MS 為基本培養(yǎng)基，添加不同濃度的6-BA 0.1～1mg/L 和NAA 0.01～0.05mg/L 的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，觀察生長和誘導(dǎo)情況，確定最適合礬根‘葡萄蘇打’的初始培養(yǎng)基。

1.2.4 增殖培養(yǎng)基的篩選。在誘導(dǎo)芽的初代培養(yǎng)基上，通過調(diào)節(jié)植物激素6-BA 與NAA 的濃度，篩選最佳增殖培養(yǎng)基，25d 為1 個繼代周期。

1.2.5 生根培養(yǎng)基的篩選?；九囵B(yǎng)基為1/2MS，瓊脂6g/L，蔗糖15g/L，添加不同濃度的NAA，觀察礬根‘葡萄蘇打’試管苗生根的情況，30d 后統(tǒng)計生根率。

1.2.6 煉苗移栽。生根的試管苗具有5 條以上的正常根即可進(jìn)行移栽。先在煉苗室放置3d，然后在溫室打開瓶蓋煉苗2d，以培養(yǎng)基不染菌為宜。用鑷子取出組培苗，將其基部的培養(yǎng)基洗干凈，移入珍珠巖︰泥炭土=1︰1 的穴盤中，放入小拱棚，移栽7d 內(nèi)進(jìn)行50%～70%遮蔭，保證溫度在25℃左右，濕度在85%左右。

2 結(jié)果與分析

2.1 無菌苗的獲得

礬根作為一種多年生草本植物莖段比較嫩，不同消毒時間對礬根試管苗培養(yǎng)有一定的影響。在試驗過程中發(fā)現(xiàn)氯化汞消毒時間為1min 時，外植體不會受到損傷，但污染嚴(yán)重，污染率達(dá)90%。當(dāng)消毒時間為3min時，外植體的污染率較低，但外植體受損嚴(yán)重，在培養(yǎng)過程中出現(xiàn)褐化等現(xiàn)象，大多數(shù)外植體死亡，導(dǎo)致試管苗的獲得率降低。試驗表明礬根‘葡萄蘇打’用75%酒精20s，0.1%的氯化汞消毒2min 效果最佳，污染率達(dá)30%。

2.2 外源激素對礬根‘葡萄蘇打’初期誘導(dǎo)的影響

礬根‘葡萄蘇打’腋芽在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L 培養(yǎng)基上20d 左右均可產(chǎn)生愈傷組織，30d 誘導(dǎo)出大量不定芽，芽嫩，芽高整齊，叢狀，誘導(dǎo)率可達(dá)100%。

2.3 增殖培養(yǎng)基的篩選

選取粗壯且長勢相同的礬根‘葡萄蘇打’誘導(dǎo)苗接種到增殖培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)。隨著繼代次數(shù)的增加，叢生芽會出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，降低激素使用濃度，減少玻璃化程度，在MS+6-BA 0.4mg/L+NAA 0.05mg/L 培養(yǎng)基中，芽玻璃化現(xiàn)象較低，芽增殖率最高，可達(dá)82%，有效芽較多，且生長周期短。

2.4 生根及試管苗移栽成活情況

選取高度2cm 的壯苗接種于1/2MS+NAA 0.3mg/L的生根培養(yǎng)基上，30d 后苗生根率為98%，根長2～3cm，生根5～8 條，苗高4～6cm。經(jīng)煉苗移栽，成活率可達(dá)100%，經(jīng)過大田栽植能夠安全越冬。

3 小結(jié)

該研究發(fā)現(xiàn)礬根‘葡萄蘇打’在MS+6-BA 0.4mg/L+NAA 0.05mg/L 培養(yǎng)基中增殖率能夠達(dá)到最高，分化出的苗可直接轉(zhuǎn)入1/2MS+NAA 0.3mg/L 生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根，且生根效果較好，每個外植體能夠生根5 條以上，這樣可以縮短培養(yǎng)周期，降低生產(chǎn)成本，滿足工廠化生產(chǎn)的需求。生根苗經(jīng)鍛煉5d 后移栽到珍珠巖︰泥炭土=1︰1 的基質(zhì)中，成活率可達(dá)98%以上。