不同方法測定飼料中的中性洗滌纖維與酸性洗滌纖維含量分析

李 博，張丹丹，程 景，靳 光，王棟才，孫銳鋒，徐 芳，梁 圓，張元慶

（山西農(nóng)業(yè)大學（山西省農(nóng)業(yè)科學院）動物科學學院，山西太原 030032）

傳統(tǒng)測定飼料中粗纖維（CF）的方法是經(jīng)過稀酸、稀堿處理后烘干可得，此方法測定的結果僅包括部分纖維素、半纖維素和木質(zhì)素，測得的結果會低于實際測定結果[1]。Van Soest 等[2]在1991 年提出測定飼料中性洗滌纖維（NDF）和酸性洗滌纖維（ADF）的方法，主要是通過消煮、過濾法進行參比分析，目前仍是學界公認的精準度較高的方法。在此原理基礎上，發(fā)展了濾袋法、ANKOM 纖維儀法[3-4]。朱立濤等[5]、張崇玉等[6]用濾袋法測定了飼料原料的CF 含量，同時以國標法測定結果驗證了濾袋法測定結果的準確性，表明濾袋法測定粗纖維是可行的。劉磊等[7]采用濾袋法測定了飼料CF、NDF 和ADF 殘渣中各成分含量。國內(nèi)研究已對濾袋法和ANKOM 測定方法進行改進[8-9]。但ANKOM原裝濾袋價格昂貴，為了節(jié)約成本，同時探索一種測定NDF、ADF 準確高效的方法，本試驗將傳統(tǒng)濾袋用于ANKOM 儀器中測定飼料中NDF、ADF，并采用濾袋法和ANKOM 纖維儀法驗證其測定準確性及可行性，為飼料中NDF、ADF 的不同測定方法分析以及飼料數(shù)據(jù)庫建立時的差異分析提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 試驗選取13 個高纖維、低纖維飼料（小麥秸、構樹、連翹、苜蓿、苜蓿青貯、全株玉米青貯、豆科青貯、精料、白酒糟、豆粕、玉米胚芽餅、DDGS、噴漿玉米），65℃烘干制成風干樣品，粉碎，過40 目篩，然后將樣品充分混合均勻，密封保存以備分析測定。

飼料纖維分析濾袋（傳統(tǒng)濾袋）由北京一牛肉牛信息技術研究中心研制，進口特制無紡布，42 mm×53 mm，孔徑38～45 μm。ANKOM 專用濾袋F57（ANKOM 2000i 型全自動纖維分析儀，孔徑25 μm，美國ANKOM 科技公司）。

1.2 濾袋法測定NDF、ADF 含量

1.2.1 濾袋法測定飼料NDF 含量 ①將濾袋用2B 鉛筆編號后置于105℃烘箱中烘干，稱重。②樣品烘干稱重，計算水分或干物質(zhì)含量。③稱取風干飼料樣品0.5～0.6 g，無損轉移至濾袋中，并用塑料袋封口機封口。每個樣品做4 個平行樣。④在600 mL 高腰燒杯中加入約260 mL中性洗滌劑、2～3 滴十氫化萘、耐高溫α-淀粉酶6 mL和0.5 g 無水亞硫酸鈉，再放入3～4 個已裝好樣品的濾袋，并放置壓塊。⑤套上冷凝裝置，在調(diào)溫電爐上加熱，煮沸1 h。⑥煮沸完畢后取出濾袋，并用熱水沖洗和洗衣機甩干5 次以上，直至洗液中無泡沫，再用20 mL丙酮沖洗2 次。⑦將濾袋置于105℃烘箱中烘干，稱重。

1.2.2 濾袋法測定飼料ADF 含量 ①同1.2.1 測定步驟①、②和③。②在600 mL 高腰燒杯中加入約260 mL酸性洗滌劑、2～3 滴十氫化萘，再放入3～4 個已裝好樣品的濾袋，并放置壓塊。③同1.2.1 測定步驟⑤。④煮沸完畢后取出濾袋，用熱水沖洗和甩干濾袋至洗液呈中性，再用少量的丙酮沖洗2 次。⑤同1.2.1 測定步驟⑦。

1.3 ANKOM 測定飼料NDF、ADF 含量 使用ANKOM專用濾袋F57，操作步驟遵循ANKOM 2000i 的操作說明。每個飼料樣品做4 個平行，樣品稱樣0.5～0.6 g。

1.4 ANKOM（傳統(tǒng)濾袋）測定飼料NDF、ADF 含量使用傳統(tǒng)濾袋，具體操作步驟遵循ANKOM 2000i 的操作說明。每個飼料樣品做4 個平行，樣品稱樣0.5～0.6 g。

1.5 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)用Excel 2016 整理，以平均值±標準差的方式表示。使用SPSS 21.0 對變量結果進行配對樣本T 檢驗及線性回歸分析，P＞0.05 為差異不顯著，P＜0.05 為差異顯著。

2 結果

2.1 不同方法測定飼料中NDF 含量的分析 由表1 可知，經(jīng)過配對樣本T 檢驗分析，ANKOM 纖維儀法、ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）與濾袋法以及ANKOM纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）與ANKOM 纖維儀法配對分析測定結果差異均不顯著。

2.2 不同方法測定飼料中ADF 含量的分析 由表2 可知，ANKOM 纖維儀法、ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）與濾袋法經(jīng)過配對以及ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）與ANKOM 纖維儀法配對分析測定結果差異均不顯著。

表1 不同方法測定飼料中的NDF 含量的分析（風干基礎） %

2.3 ANKOM 測定飼料中的NDF、ADF 含量校正結果以濾袋法測定飼料中的NDF、ADF 結果校正ANKOM纖維儀法和ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）測定結果，建立的回歸公式極顯著（P＜0.001），ANKOM 纖維儀法和ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）測定結果與濾袋法測定結果有密切的相關性，建立的公式有意義（表3）。

3 討 論

Van Soest 等[2]提出的測定NDF、ADF 方法，雖說仍是國際上公認的測定NDF、ADF 準確度較高的方法，但在實際測定過程中發(fā)現(xiàn)煮沸時間、消煮方式、飼料質(zhì)量、洗滌液比例、過濾時濾孔的孔徑大小以及濾膜面積等均會對飼料NDF、ADF 的測定結果產(chǎn)生影響[10-12]。另外在測定過程中，每次消煮只能測定一個樣品，測定量少；消煮過程中，溫度及冷凝水調(diào)節(jié)不當時會造成洗滌劑沸騰，且在抽濾過程中容易造成樣品損失。

表2 不同方法測定飼料中的ADF 含量的分析（風干基礎） %

表3 不同方法測定飼料中NDF、ADF 含量校正結果

濾袋法是在Van Soest 法的基礎上，改進得到的一種精確、簡便的方法。使用濾袋法測定時可將多個濾袋放于同個燒杯中一起消煮，可以擴大樣品測定量；在洗滌過程中省去抽濾步驟，避免抽濾耗時耗力，而濾袋也因其獨特的材質(zhì)可避免洗滌時造成的包裝破裂樣品損失。所以濾袋法測定同時可以批量測定多個樣品，既提高了試驗測定的準確度、精確度；也提高了試驗的效率，節(jié)省時間[4]。楊喆等[13]利用濾袋法測定苜蓿草中粗纖維的含量，操作方法簡單，檢測效率高，且適用于大批量測定；張晨等[14]研究表明聚酯網(wǎng)袋法與國標法測定飼料的CF 以及濾袋法與國標法測定飼草中NDF、ADF含量結果[15]均差異不顯著，且用濾袋法效率高、成本低，精密度優(yōu)于國標法。

ANKOM 纖維儀法相較于濾袋法，可以解決因加熱不均造成的洗滌劑濃度變化引起的測定誤差，減少了因人為操作造成的測定誤差，且試驗操作過程簡單、安全，測定樣品量更大。Nguyen 等[16]分別按照AOAC 991.43 和AOAC 2011.43 方法用ANKOM 儀器測定日糧總纖維以及可溶性和不溶性纖維的含量無差異，表明ANKOM 儀器測定纖維含量準確率較高。但ANKOM纖維儀價格昂貴，原裝濾袋價格較高。

利用濾袋法和ANKOM 纖維儀法測定飼料NDF、ADF 時，稱取的樣品質(zhì)量均為0.5～0.6 g，相較于Van Soest 法，濾袋法和ANKOM 法省去了抽濾的過程，消除了因為抽濾產(chǎn)生的誤差。濾袋材質(zhì)及孔徑的大小同樣會影響纖維的測定結果[17]，一般纖維測定儀會配有專用的纖維濾袋，ANKOM 纖維濾袋價格昂貴，來源單一，測定樣本量大時費用較高。因此，本研究設計了利用傳統(tǒng)濾袋代替ANKOM 濾袋測定飼料NDF、ADF 含量試驗，各操作步驟與ANKOM 纖維儀法均保持一致，所用飼料來自同一批，消除因飼料原料、操作等不同造成的測定誤差。通過與濾袋法配對樣本T 檢驗分析試驗結果，NDF、ADF 測定結果差異均不顯著，表明用傳統(tǒng)濾袋代替ANKOM 原裝濾袋測定飼料中的NDF、ADF 含量是可行的。在此基礎上，本研究建立了濾袋法校正ANKOM 法（傳統(tǒng)濾袋）測定測定飼料中的NDF、ADF 含量回歸公式，說明ANKOM 纖維儀法和ANKOM 纖維儀（傳統(tǒng)濾袋）測定結果與濾袋法測定結果有密切的相關性，建立的公式有意義。

4 結 論

本研究通過配對樣本T 檢驗分析，使用傳統(tǒng)濾袋代替ANKOM 濾袋測定飼料NDF、ADF 含量差異不顯著，可以用傳統(tǒng)濾袋代替ANKOM 原裝濾袋測定飼料中的NDF、ADF 含量。不同方法測定測定飼料中的NDF、ADF 含量建立的校正公式分別為NDF濾袋法=-1.46+1.064NDFANKOM（R2=0.923，P＜0.001），NDF濾袋法=0.786+0.993NDFANKOM（傳統(tǒng)濾袋）（R2=0.884，P＜0.001）；ADF濾袋法=0.545+1.026ADFANKOM（R2=0.954，P＜0.001），ADF濾袋法=1.176+0.996ADFANKOM（傳統(tǒng)濾袋）（R2=0.936，P＜0.001）。