慢性乙型肝炎患者血清纖維蛋白原樣蛋白1與HBV DNA載量的相關(guān)性分析

謝明容 張川

慢性乙型肝炎是因乙型肝炎病毒感染導(dǎo)致的慢性病毒感染性肝病，若早期救治不及時(shí)，將發(fā)展為肝纖維化，甚至發(fā)展為肝衰竭、肝硬化[1]。目前，用于評價(jià)慢性乙型肝炎患者肝纖維化的標(biāo)準(zhǔn)方法為肝組織病理學(xué)檢查，這種檢查方法雖準(zhǔn)確度高，但因其具有創(chuàng)傷性，應(yīng)用有局限[2]。故找到一種可以評價(jià)慢性乙型肝炎患者病情進(jìn)展的無創(chuàng)手段極為關(guān)鍵且必要。研究認(rèn)為，監(jiān)測慢性乙型肝炎患者的乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)DNA載量復(fù)制情況可以作為患者病情進(jìn)展的直接標(biāo)志[3]。但這種HBV DNA監(jiān)測的方法對于部分低水平病毒復(fù)制的乙型肝炎e抗原陰性的患者，監(jiān)測敏感度與特異度均降低，應(yīng)用仍有局限[4]。研究發(fā)現(xiàn)，由肝臟分泌的纖維蛋白家族中的纖維蛋白原樣蛋白1(FLP1)用于肝纖維化早期診斷有一定價(jià)值[5]。FLP1是一種特異性促肝增殖因子，能夠加速正常肝細(xì)胞增殖，保護(hù)肝細(xì)胞不受其他有害物質(zhì)的損傷，其血清濃度變化可能反映了肝細(xì)胞損傷與病變情況[6]。本研究主要檢測慢性乙型肝炎患者的血清FLP1、表達(dá)情況，分析患者血清FLP1與HBV DNA載量的相關(guān)性，旨在為慢性乙型肝炎感染者早期診斷與疾病進(jìn)展提供一種敏感的血清檢測指標(biāo)。

資料與方法

一、研究對象

在獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意后，選取我院2017年8月至2019年10月期間就診的204例慢性乙型肝炎患者作為研究對象，全部患者及其家屬對此次研究實(shí)施的內(nèi)容均知情，并簽署知情同意書。全部患者均經(jīng)肝臟穿刺后病理活檢結(jié)果確診，根據(jù)肝纖維化的嚴(yán)重程度對患者進(jìn)行分組，分別為S0組(42例)、S1組(39例)、S2組(46例)、S3組(38例)、S4組(39例)，上述全部患者均符合《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》[7]中慢性乙型肝炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除：嚴(yán)重心肺功能不全患者、自身免疫性肝炎患者、其他類型病毒性肝炎患者、酒精性肝病患者、心理疾患或精神疾患等無法很好配合研究的患者、合并其他重要臟器功能衰竭的患者。5組不同肝纖維化嚴(yán)重程度患者的性別、年齡、體重、病程等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。見表1。

二、研究方法

(一)肝穿刺組織活檢 經(jīng)肝臟彩超輔助下定位，使用肝臟穿刺針(16G)經(jīng)皮穿刺吸入適量肝組織，石蠟包埋之后進(jìn)行蘇木精-伊紅染色法，由病理科2名有資深經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師閱片，并參照《慢性乙型肝炎防治指南(2015更新版)》中纖維化嚴(yán)重程度分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分析，包括S0～S4級。

(二)血清FLP1水平檢測 采集全部患者的空腹外周靜脈血5 mL，經(jīng)3000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，離心處理后，取上清液保存待檢。使用rinogen-like protein 1 Elisa Kit(HMl2166，BIOSWAMP)試劑盒，采用酶聯(lián)免疫吸附檢測血清FLP1水平。

(三)HBV DNA載量檢測 采集全部患者的空腹外周靜脈血5 mL，經(jīng)3000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，離心處理后，取上清液保存待檢。采用實(shí)時(shí)熒光定量(fluorescent quantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR)檢測HBV DNA載量水平，檢測儀器為PE 5700型自動(dòng)熒光PCR檢測儀，試劑盒由廣州中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供，操作步驟嚴(yán)格參照說明書。結(jié)果判讀[8]：樣品HBV DNA含量低于1.0×103拷貝/mL時(shí)判定為陰性，反之則判定為陽性，比較各組HBV DNA拷貝數(shù)的對數(shù)值。

表1 5組慢性乙型肝炎患者的基線資料比較

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

結(jié) 果

一、5組患者血清FLP1水平、HBV DNA載量拷貝數(shù)的對數(shù)值比較

隨著慢性乙型肝炎患者的肝纖維化分級加重，患者的血清FLP1水平降低、HBV DNA載量拷貝數(shù)的對數(shù)值升高，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 5組患者血清FLP1水平、HBV DNA載量拷貝數(shù)的對數(shù)值比較(±s)

二、5組患者HBV DNA陽性率比較

隨著慢性乙型肝炎患者肝纖維化分級加重，患者HBV-DNA陽性檢出率升高，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 5組患者HBV DNA陽性檢出率比較

三、不同HBV DNA載量對數(shù)值患者的血清FLP1水平比較

隨著HPV DNA載量拷貝數(shù)對數(shù)值的升高，患者血清FLP1水平呈下降趨勢，4組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 4組不同HBV DNA載量對數(shù)值慢性乙型肝炎

四、血清FLP1水平與HBV DNA載量拷貝數(shù)對數(shù)值的相關(guān)性結(jié)果

將血清FLP1作為自變量，HBV DNA載量拷貝數(shù)對數(shù)值作為因變量，經(jīng)雙變量Pearson直線相關(guān)檢驗(yàn)結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎患者的血清FLP1水平與HBV DNA載量拷貝數(shù)對數(shù)值呈負(fù)相關(guān)(r=-0.584，P<0.001)。見圖1。

圖1 血清FLP1水平與HBV DNA載量拷貝數(shù)對數(shù)值相關(guān)性散點(diǎn)圖

討 論

目前，臨床上常通過檢測患者的HBV DNA載量來反映病毒復(fù)制情況，并將其作為慢性乙型肝炎患者治療的適應(yīng)證及主要療效評價(jià)方法[9]。但這一方法依然存在局限，部分乙型肝炎病毒e抗原結(jié)果為陽性者，其e抗原在轉(zhuǎn)陰之后，血清HBV DNA載量的檢測結(jié)果多為陰性，此時(shí)因慢性乙型肝炎患者已經(jīng)接受抗病毒治療，其體內(nèi)的HBV DNA載量降低至檢測的下限以下；加之部分患者可能出現(xiàn)HBV突變的情況，常規(guī)檢測常無法獲得真實(shí)的病毒復(fù)制情況，此時(shí)若為這類患者行肝功能檢查或肝穿刺，可以發(fā)現(xiàn)HBV依然處于活動(dòng)期，這就降低了病毒載量檢查的準(zhǔn)確度與特異度[10-11]。可見，這些常規(guī)的檢查方法均無法很好反映出患者的真實(shí)的病毒復(fù)制情況，故還應(yīng)找到一種準(zhǔn)確度高、特異度高且無創(chuàng)的血清學(xué)標(biāo)志物，與HBV DNA載體聯(lián)合用于慢性乙型肝炎早期病毒復(fù)制與活動(dòng)情況的評價(jià)，以提高評價(jià)的準(zhǔn)確性。

FLP1是一種肝源性生長因子，可以加速正常肝細(xì)胞的增殖[12]。FLP1基因包含外顯子8個(gè)與內(nèi)含子7個(gè)，編碼氨基酸有312個(gè)，其中有22個(gè)N端氨基酸屬于先導(dǎo)肽，其單體相對分子質(zhì)量為34×103，在機(jī)體中常以同源二聚體的形式來發(fā)揮自身局部的促正常肝細(xì)胞增殖的生物學(xué)活性[13-14]。部分研究表明，F(xiàn)LP1在肝組織呈高表達(dá)，能夠經(jīng)自分泌加速正常肝細(xì)胞的增殖，在肝臟的再生過程中不斷分泌并上調(diào)自身表達(dá)量[15-16]。FLP1在刺激正常肝細(xì)胞增殖的同時(shí)，并不會(huì)對肝癌細(xì)胞產(chǎn)生刺激，不會(huì)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生增殖，相反，F(xiàn)LP1的過表達(dá)還有一定抑制肝癌細(xì)胞生長繁殖的作用[17]?；贔LP1的這些特點(diǎn)，推測其可能與慢性乙型肝炎患者肝纖維化有關(guān)。HBV DNA載量的表達(dá)情況不僅可以用于反映病毒復(fù)制情況，同時(shí)該載量還與各類肝病患者肝纖維化有關(guān)，常被作為肝纖維化分級主要的評價(jià)指標(biāo)[18]。

本研究共納入204例慢性乙型肝炎患者，參照相關(guān)文獻(xiàn)根據(jù)肝纖維化分級進(jìn)行分組，比較各組患者的血清FLP1水平及HBV DNA載量對數(shù)值，結(jié)果顯示，隨著肝纖維化分級提高，患者血清FLP1水平降低、HBV DNA載量對數(shù)值升高、HBV DNA陽性率升高；后根據(jù)HBV DNA載量對數(shù)值分組后，比較各組的血清FLP1水平結(jié)果顯示，隨著HBV DNA載量對數(shù)值升高，患者血清FLP1降低，可見二者間有一定相關(guān)性。進(jìn)一步進(jìn)行雙變量相關(guān)性檢驗(yàn)結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎患者的血清FLP1水平與HBV DNA載量間呈負(fù)相關(guān)，推測二者間互相影響，血清FLP1水平的變化檢測可能對早期監(jiān)測慢性乙型肝炎患者病毒復(fù)制及肝纖維化的進(jìn)展有一定指導(dǎo)價(jià)值。但本研究尚無較多循證依據(jù)可作為理論支持，加之此次研究納入樣本量相對較少，且未對治療前后的各指標(biāo)進(jìn)行觀察比較，研究仍有局限，還應(yīng)在未來進(jìn)一步展開大樣本、長時(shí)間的研究加以驗(yàn)證，以指導(dǎo)臨床。