食管癌患者病理組織AEG-1及E-cad表達(dá)情況及相關(guān)性

夏永欣 張 萌 張向東

食管癌是世界上常見的惡性腫瘤之一，而我國是食管癌的高發(fā)國家，近年來其發(fā)病率還有逐年上升的趨勢[1-2]。因早期癥狀不明顯，所以多數(shù)患者確診時已經(jīng)處于中晚期。研究[3-4]發(fā)現(xiàn)，星形細(xì)胞上調(diào)基因-1(AEG-1)能夠促進(jìn)人體多種腫瘤的增殖、遷移和侵襲。E-鈣黏附蛋白(E-cad)在正常生理狀態(tài)中可維持上皮細(xì)胞的基本結(jié)構(gòu)和功能，而在多種腫瘤的表達(dá)中明顯減少或缺失。本研究旨在探討AEG-1和E-cad在食管鱗癌組織中的表達(dá)及相關(guān)性，以期能為患者治療和預(yù)后提供臨床指導(dǎo)價值。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取我院2016年1月至2018年1月收治的64例食管癌患者，男性34例，女性30例，年齡33～75歲，平均(53.15±10.24)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合食管癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，且經(jīng)組織病理活檢確診為食管癌者；②年齡在33～75歲之間者；③術(shù)前未行放化療及免疫治療者；④臨床資料完整者；⑤患者及家屬對本研究內(nèi)容均知情同意等。排除標(biāo)準(zhǔn)：①存在手術(shù)禁忌無法提取標(biāo)本者；②伴有心、肝、腎嚴(yán)重功能障礙者；③伴有嚴(yán)重感染、凝血系統(tǒng)疾病者；④臨床資料不完整者等。分別取患者食管癌組織和癌旁組織(距離癌組織≥5 cm)為食管癌組織組(n=64)和癌旁組織組(n=64)。本院醫(yī)學(xué)倫理委員會審核并通過本研究。

1.2 免疫組化法檢測

參照試劑盒說明書上的具體步驟對2組病理組織的AEG-1及E-cad進(jìn)行SP免疫組化檢測。具體操作如下：取2組病理組織，切成4 μm厚的連續(xù)切片放置載玻片上，石蠟包埋，H2O2封閉，高壓抗原熱修復(fù)。滴加一抗，24 h后滴加二抗，DAB顯色后，用蘇木精復(fù)染、水洗、封片、拍照。陰性對照采用PBS替換一抗。

1.3 染色結(jié)果判定

結(jié)果判定由同一位醫(yī)師選用高倍顯微鏡采用雙盲法進(jìn)行觀察、判定。計數(shù)陽性細(xì)胞(染色為棕色)占細(xì)胞總數(shù)的百分比，按照顏色和著色陽性細(xì)胞數(shù)分為：0分，無著色，著色陽性細(xì)胞數(shù)≤10%；1分，灰黃色，著色陽性細(xì)胞數(shù)>10%～50%；2分，金黃色，著色陽性細(xì)胞數(shù)>50%～75%；3分，棕黃色，著色陽性細(xì)胞數(shù)>75%。陰性：0～2分，陽性：≥3分。

1.4 觀察指標(biāo)

(1)食管癌組織組及癌旁組織組AEG-1及E-cad的表達(dá)水平差異；(2)食管癌組織中AEG-1及E-cad表達(dá)的相關(guān)性；(3)AEG-1和E-cad的表達(dá)與臨床病理的關(guān)系。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS 21.0進(jìn)行處理，構(gòu)成比以百分率(%)標(biāo)示，采用χ2檢驗進(jìn)行比較，P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，相關(guān)分析采用Spearman。

2 結(jié)果

2.1 食管癌組織組及癌旁組織組AEG-1及E-cad表達(dá)

食管癌組織組AEG-1的陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織組(P<0.01)，E-cad的陽性表達(dá)率顯著低于癌旁組織組(P<0.01)，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。見表1。

表1 AEG-1及E-cad在食管癌組織組及癌旁組織組的表達(dá)(例，%)

2.2 AEG-1及E-cad在食管癌組織中表達(dá)的相關(guān)性

AEG-1及E-cad在食管癌組織中的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)性，(P<0.01)。見表2。

表2 AEG-1及E-cad在食管癌組織中表達(dá)的相關(guān)性/例

2.3 AEG-1和E-cad的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

癌細(xì)胞分化程度、浸潤程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是AEG-1在食管癌組織中陽性表達(dá)的影響因素，癌細(xì)胞分化程度、浸潤程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是E-cad在食管癌組織中陽性表達(dá)的影響因素，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.01)。見表3。

3 討論

近年來，世界許多國家和地區(qū)食管癌發(fā)病率都呈逐年升高的趨勢[6]。目前生物學(xué)指標(biāo)的檢測在食管癌患者治療及預(yù)后評估中的價值日漸凸顯，了解這些生物學(xué)指標(biāo)對于指導(dǎo)治療、預(yù)測預(yù)后具有積極的作用[7]。

AEG-1是新近發(fā)現(xiàn)的原癌基因，位于8號染色體上。大量研究[8]表明，AEG-1可有效促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移。相關(guān)研究[9]發(fā)現(xiàn)，AEG-1在多種惡性腫瘤中都處于高表達(dá)狀態(tài)。本結(jié)果顯示，食管癌組織中AEG-1的陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織。同時本研究通過分析AEG-1的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示：癌細(xì)胞分化程度、浸潤程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是AEG-1在食管癌組織中陽性表達(dá)的影響因素。大量研究[10]發(fā)現(xiàn)，AEG-1的表達(dá)與食管鱗癌組織的浸潤程度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有顯著的相關(guān)性，與患者的不良預(yù)后存在密切聯(lián)系。基礎(chǔ)研究[11]證實，AEG-1在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤組織中表達(dá)量異常增加，顯著高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的腫瘤組織，提示AEG-1與腫瘤組織的浸潤和轉(zhuǎn)移存在密切聯(lián)系。同時本研究還發(fā)現(xiàn)在食管癌組織中AEG-1的表達(dá)與腫瘤的分化程度存在密切聯(lián)系，而與患者的性別、年齡及腫瘤的病理類型、部位無關(guān)，其具體機(jī)制還需進(jìn)一步探討。

表3 AEG-1和E-cad的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

E-cad是鈣黏蛋白家族的一種，其基因位于16q22-1。生理狀態(tài)中，E-cad能夠介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間的黏附反應(yīng)，維持組織結(jié)構(gòu)完整性。研究[12]發(fā)現(xiàn)，腫瘤細(xì)胞會穿透基膜和細(xì)胞外基質(zhì)，浸潤至機(jī)體的血管、淋巴中，提示，腫瘤組織的轉(zhuǎn)移與細(xì)胞連接結(jié)構(gòu)的破壞密切相關(guān)。研究[13-14]證明，E-cad的表達(dá)缺失將會降低細(xì)胞間的黏附力，促進(jìn)癌組織去分化和轉(zhuǎn)移，影響患者預(yù)后。沈瓊等[15]研究發(fā)現(xiàn)，E-cad在正常增生期子宮內(nèi)膜的表達(dá)明顯高于癌性內(nèi)膜中的表達(dá)，而且隨著子宮內(nèi)膜癌患者臨床分期、淋巴轉(zhuǎn)移及浸潤深度的增加，其陽性率也呈逐漸下降的趨勢。本研究通過對64例食管癌患者食管癌組織和癌旁組織進(jìn)行免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，食管癌組織中AEG-1的陽性表達(dá)率顯著高于癌旁組織，E-cad的陽性表達(dá)率顯著低于癌旁組織；癌細(xì)胞分化程度、浸潤程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是E-cad在食管癌組織中陽性表達(dá)的影響因素。與相關(guān)研究[16]報道一致。

本研究通過分析AEG-1及E-cad在食管癌組織表達(dá)中的相關(guān)性，結(jié)果顯示，AEG-1及E-cad在食管癌組織表達(dá)中呈明顯負(fù)相關(guān)性。鈣黏附蛋白E是一種細(xì)胞跨膜蛋白，其作用機(jī)制為，E-cad與β連環(huán)素結(jié)合形成E-cad/β連環(huán)素復(fù)合體，維持組織結(jié)構(gòu)的功能。相關(guān)文獻(xiàn)[17]報道，AEG-1可通過激活Wnt/β-catenin通路，降低β-catenin水平，加強(qiáng)表面黏附分子的表達(dá)。另外，有研究[18]證實，食管癌組織的標(biāo)本中，AEG-1表達(dá)水平越高，E-cad表達(dá)就越低，提示AEG-1可能是通過Wnt/β-catenin信號通路以下調(diào)E-cad的表達(dá)。

綜上，食管癌患者病理組織AEG-1呈陽性表達(dá)，E-cad呈陰性表達(dá)，且AEG-1及E-cad在食管癌組織表達(dá)中呈明顯負(fù)相關(guān)性。