死亡谷芽胞桿菌NBIF-001 母藥急性毒性研究

石麗橋，劉穎娟，王月瑩，閔 勇，劉曉艷

（1.湖北省生物農(nóng)藥工程研究中心，武漢 430064；2.武漢大學(xué)中南醫(yī)院，武漢 430071）

死亡谷芽胞桿菌（Bacillus vallismortis）是一種好氧、產(chǎn)胞的革蘭氏陽性細(xì)菌，歸類于枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）群，由美國學(xué)者1996 年首次從美國死亡谷國家公園的土壤中分離獲得［1］。NBIF-001 是由湖北省生物農(nóng)藥工程研究中心分離和保藏的一株具有高殺菌活力的死亡谷芽胞桿菌（中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏號(hào)為CCTCC No：M2015087），前期研究表明其對多種植物病原菌具有良好的抑制作用［2，3］。 按照《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法》（GB/T 15670—2017），對NBIF-001 母藥進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)，以期為該藥的安全生產(chǎn)和田間應(yīng)用提供毒理學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

SPF 級健康成年Wistar 大鼠及大鼠飼料、墊料由湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（鄂）2015-0018。飼養(yǎng)于湖北省生物農(nóng)藥工程研究中心SPF 級大鼠實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)室溫度20～26 ℃，濕度40%～70%。NBIF-001 母藥，含量為1 000 億CFU/g，類黃色粉末，由湖北省生物農(nóng)藥工程研究中心提供。

1.2 方法

所有試驗(yàn)均按照GB/T 15670.2—2017、GB/T 15670.5—2017、GB/T 15670.6—2017《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法》中規(guī)定的方法進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 大鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

采用限量試驗(yàn)，樣品按5 000 mg—kg 的劑量24 h內(nèi)1 次灌胃給藥后，染毒動(dòng)物未出現(xiàn)明顯的中毒癥狀，大鼠體重增長正常，14 d 內(nèi)動(dòng)物均未出現(xiàn)死亡。試驗(yàn)結(jié)束處死存活大鼠，大體解剖肉眼觀察未見明顯病理改變。雌、雄大鼠急性經(jīng)口毒性半數(shù)致死量（LD50）＞5 000 mg—kg（表1）。

表1 死亡谷芽胞桿菌NBIF-001 母藥大鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)

2.2 大鼠急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)

采用限量試驗(yàn)，樣品按5 000 mg—kg 的劑量染毒2 種性別大鼠后，染毒大鼠未出現(xiàn)明顯的中毒癥狀，大鼠體重增長正常，14 d 內(nèi)動(dòng)物均未出現(xiàn)死亡。試驗(yàn)結(jié)束處死存活大鼠，大體解剖肉眼觀察未見明顯病理改變。雌、雄大鼠急性經(jīng)口毒性LD50＞5 000 mg—kg（表2）。

表2 死亡谷芽胞桿菌NBIF-001 母藥大鼠急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)

2.3 大鼠急性吸入毒性試驗(yàn)

動(dòng)物染毒后10 min 開始出現(xiàn)抓鼻、不安、臥伏，4 h 染毒停止后大鼠癥狀恢復(fù)正常，14 d 內(nèi)染毒動(dòng)物未出現(xiàn)死亡。試驗(yàn)結(jié)束處死存活大鼠，大體解剖肉眼觀察未見明顯病理改變。雌、雄大鼠急性吸入LD50＞5 000 mg—m3（表3）。

表3 死亡谷芽胞桿菌NBIF-001 母藥大鼠急性吸入毒性試驗(yàn)

3 小結(jié)與討論

NBIF-001 是一株具有高殺菌活力的死亡谷芽胞桿菌，前期研究結(jié)果顯示，NBIF-001 對番茄枯萎病菌、番茄早疫病菌、禾谷鐮刀菌、小麥赤霉病菌或水稻紋枯病菌均具有抑制作用，同時(shí)對灰霉病和棒孢葉斑病具有良好的防效［4，5］。黃大野等［4，5］利用NBIF-001 進(jìn)行了防病研究工作，發(fā)現(xiàn)在菌液濃度為1×108CFU/mL 條件下對黃瓜葉部灰霉病和番茄果實(shí)灰霉病都具有良好的防治作用，防效分別達(dá)85.91% 和72.52%；對棒孢葉斑病的防治效果達(dá)71.46%，且與啶酰菌胺聯(lián)用具有明顯的增效作用和良好的相容性，具有較好的田間應(yīng)用前景。

本研究參照《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法》（GB/T 15670—2017）中規(guī)定的方法對NBIF-001 母藥進(jìn)行了急性毒性試驗(yàn)，結(jié)果顯示，雌、雄大鼠急性經(jīng)口毒性LD50＞5 000 mg—kg，急性經(jīng)皮毒性LD50＞5 000 mg—kg，急性吸入毒性LD50＞5 000 mg—m3；按照《農(nóng)藥登記資料規(guī)定》中的相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)判斷，NBIF-001 母藥急性毒性分級為IV 級，屬微毒級，是一種綠色安全的生物農(nóng)藥。