甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)雄性不育三系制種技術(shù)

潘永忠 樊友軍 劉克敏 徐 姮 梅 軍 王自品 涂金星

（1 中墾錦繡華農(nóng)武漢科技有限公司，武漢 430070；2 民樂縣科普力農(nóng)業(yè)科技有限公司，甘肅民樂 734500；3 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢 430070）

細(xì)胞質(zhì)雄性不育、細(xì)胞核雄性不育和化學(xué)雜交劑誘導(dǎo)雄性不育是油菜雜種優(yōu)勢(shì)利用的三大主要途徑。波里馬不育系和陜2A 不育系在油菜雜種優(yōu)勢(shì)利用中得到了充分利用，不過在實(shí)際應(yīng)用時(shí)，初花期這2 種不育系遇到低溫時(shí)會(huì)產(chǎn)生微量花粉，特殊年份風(fēng)險(xiǎn)會(huì)加劇。細(xì)胞核雄性不育系在制種應(yīng)用中表現(xiàn)為雄性不育穩(wěn)定性好，花粉徹底敗育，雙隱性核不育兩系法育種目前應(yīng)用較多，隱性核不育恢復(fù)系雖然易找到，但保持系卻難以找到，制種時(shí)需要拔除50%可育株[1]，費(fèi)時(shí)費(fèi)工較麻煩；而雙顯性核不育、三隱性核不育育種目前應(yīng)用較少?；瘜W(xué)誘導(dǎo)雄性不育目前在化學(xué)雜交劑應(yīng)用上有一定突破，但制種應(yīng)用技術(shù)還在探索中，整體在雜交制種領(lǐng)域應(yīng)用較少。甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)雄性不育系的特點(diǎn)是花藥退化徹底，無花粉，同時(shí)對(duì)周邊環(huán)境反應(yīng)不敏感，表現(xiàn)出十分穩(wěn)定的不育性，而且配合力很高，幾乎所有甘藍(lán)型油菜品種都可以作為它的保持系，是目前被公認(rèn)的世界上不育性最穩(wěn)定、最好的油菜不育材料[2-3]。因此甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)不育系的應(yīng)用前景十分廣闊。

蘿卜細(xì)胞質(zhì)在我國(guó)應(yīng)用相對(duì)較晚，目前剛剛起步，甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)不育系在雜交制種技術(shù)方面相對(duì)缺乏，本文旨在通過對(duì)華油雜705 的雜交制種技術(shù)進(jìn)行實(shí)地實(shí)施研究，以期為甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)不育系在雜交制種技術(shù)方面獲取一些經(jīng)驗(yàn)。

以華油雜705 為試驗(yàn)材料。該雜交種屬于甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)雄性不育三系品種，由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)、武漢綠色保姆生物技術(shù)有限公司共同于2018年登記，登記編號(hào)：GPD 油菜（2018）420102。

作為甘藍(lán)型油菜蘿卜細(xì)胞質(zhì)雄性不育三系品種，在應(yīng)用推廣中，特別是蘿卜細(xì)胞質(zhì)雄性不育系在甘藍(lán)型雜交油菜制種應(yīng)用上是一個(gè)嶄新的課題，受育種家委托，于2016 年、2017 年分別在湖北襄陽(yáng)和甘肅張掖市境內(nèi)進(jìn)行華油雜705 的雜交種試制工作，并于2018 年度在甘肅省民樂縣相對(duì)規(guī)模面積制種取得成功。4 年來華油雜705 制種面積累計(jì)20hm2，每667m2平均產(chǎn)量173.5kg；2018 年度制種面積6.67hm2，平均產(chǎn)量165kg；2019 年度制種面積8hm2，喜獲高產(chǎn)，平均產(chǎn)量190kg，且種子質(zhì)量均達(dá)到或超過了國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 4407.2-2008。

1 親本來源及特征特性

華油雜705 母本T36A 是[（Ogura-INRA×T336）×T36]BC6 雜交育成的穩(wěn)定雙低蘿卜細(xì)胞質(zhì)雄性不育系。父本BRS201R 是由[（R2000×輪回群體）×輪回群體]C5 的雙低株系123 與油菜亞基因組材料BRS201 雜交選育而成。同期播種的條件下，母本初花期和終花期與父本基本一致；相同管理?xiàng)l件下，母本一般比父本植株高出12～13cm。母本花瓣略皺縮，花藥完全敗育無花粉，葉色較深，株高2.2～2.3m，中位分枝在70cm 以上，一次有效分枝數(shù)5～6 個(gè)，單株有效角果數(shù)400～500 個(gè)，角粒數(shù)24～30 個(gè)，千粒重3.68g；父本花瓣圓大，開展度好，平展，株高2.0～2.1m，一次有效分枝數(shù)5～7 個(gè)，單株有效角果數(shù)200～250 個(gè)，角粒數(shù)24～28 個(gè)，千粒重4.00g。

2 品種特征特性

華油雜705 全生育期209.7d，初花期比對(duì)照圣光127 晚7～9d，終花期與對(duì)照圣光127 相當(dāng)。幼苗半直立，葉色深綠，裂葉2～3 對(duì)，花瓣長(zhǎng)度中等、寬中等，呈側(cè)疊狀。株高176.85cm，中部分枝類型，一次有效分枝數(shù)5.95 個(gè)，單株有效角果數(shù)193.4 個(gè)，每角粒數(shù)19.7 粒，千粒重3.71g。芥酸含量0，硫苷含量27.48μmol/g，含油量43.96%。低感菌核病，抗病毒病，苗期抗寒性較好，抗倒性強(qiáng)。第1 生長(zhǎng)周期每667m2產(chǎn)量200.2kg，比對(duì)照圣光127 增產(chǎn)6.09%；第2 生長(zhǎng)周期產(chǎn)量200.2kg，比對(duì)照圣光127 增產(chǎn)2.1%。

3 高產(chǎn)保純制種技術(shù)

3.1 地塊選擇制種基地應(yīng)選擇相對(duì)集中連片、土質(zhì)肥沃、灌溉條件好，且3 年內(nèi)未種植過十字花科作物的田塊。需充分考慮田間雜草類型，根據(jù)具體情況及時(shí)除草。了解當(dāng)?shù)靥鞖馇闆r，避免自然災(zāi)害的發(fā)生；了解當(dāng)?shù)貧夂驐l件，充分考慮植株在授粉期的氣溫情況，氣溫高達(dá)30℃以上時(shí)，花粉活力很差，會(huì)造成結(jié)實(shí)不好，嚴(yán)重影響產(chǎn)量，甚至有絕收的風(fēng)險(xiǎn)，要避免在該地區(qū)制種。建立隔離區(qū)，可采用天然隔離，房屋、樹林、山谷等，或空間、時(shí)間隔離。

3.2 整地施肥一般在3 月20 日前完成施肥、整地及鋪膜。施足底肥，每667m2施有機(jī)肥40kg、尿素15kg、鉀肥10kg、磷肥50kg、磷酸二銨10kg、硼肥200g。在30cm 土層內(nèi)進(jìn)行犁鏵、旋耕、整平。每667m2噴施氟樂靈100g 兌水15kg，防雜草。鋪設(shè)黑色地膜，機(jī)械作業(yè)完成地膜鋪設(shè)工作。

3.3 適期播種春播條件下（甘肅民樂），在4 月1-10 日播種，即在鋪膜1 周后播種。一方面保證除草劑藥效在土壤中充分作用，同時(shí)避免影響種子發(fā)芽；另一方面鋪膜1 周后，地膜的保墑作用可充分發(fā)揮。播種時(shí)，父本植株間距15～16cm，母本植株間距18～20cm；父母本播種行距20cm；父母本行比2∶6，即2行父本，6行母本交叉播種。采用機(jī)械點(diǎn)播，每穴2～3 粒。

3.4 苗期管理出苗后要及時(shí)進(jìn)行田間觀察，對(duì)出苗不整齊的田塊要及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)苗移栽，避免出現(xiàn)斷壟現(xiàn)象；同時(shí)在植株3～4 片真葉時(shí)定苗，每穴保留2～3 株，多余的予以拔除。適時(shí)了解父母本的田間長(zhǎng)勢(shì)情況，針對(duì)華油雜705 父本苗期長(zhǎng)勢(shì)偏弱特點(diǎn)，苗期有意識(shí)促進(jìn)其營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)，使用赤霉素或蕓苔素內(nèi)植物調(diào)節(jié)劑促進(jìn)父本加速生長(zhǎng)。在植株2～4 片真葉時(shí)，及時(shí)觀察并防治跳甲為害。及時(shí)鏟除燕麥、茴條、豬秧秧等雜草。

3.5 嚴(yán)格去雜苗期通過觀察植株形態(tài)進(jìn)行除雜，及時(shí)拔除包括混雜株、優(yōu)勢(shì)株、變異株、畸形株、病害株、自生油菜等雜株?；ㄆ谌ルs應(yīng)及早進(jìn)行，在第1朵花開放時(shí)即開始檢查制種田塊，將母本行的優(yōu)勢(shì)株、父本行的雜株拔除干凈。去雜要注意方法，避免將花粉人為地散于其他植株上，造成混雜。具體方法是先將花序向下折斷，再將植株拔出，并將花序踩于土中，不能將雜株高舉和帶出田外[4]。油菜收獲時(shí)，及時(shí)剔除授粉不良、花不盡植株，母本株中結(jié)成蘿卜角的植株。

對(duì)去雜情況進(jìn)行記載?；ㄆ诤蛫A果成熟期應(yīng)對(duì)油菜去雜情況、長(zhǎng)勢(shì)、長(zhǎng)相、地塊大小等進(jìn)行登記，并發(fā)放收購(gòu)許可證，作為收購(gòu)依據(jù)，以防摻假。

3.6 田間管理苗期精管父本，偏施追肥，使用植物調(diào)節(jié)劑促進(jìn)父本植株生長(zhǎng)。要充分考慮父母本早衰及后期花粉量不足問題，父本可考慮其中1 行隔株打頂，以保證后期花粉量充足。

及時(shí)澆水，植株進(jìn)入抽薹期時(shí)，及時(shí)澆水1 次，促進(jìn)植株薹期生長(zhǎng)；花期剛結(jié)束時(shí)，澆水1 次?？疵缟L(zhǎng)，考慮施肥，在第1 次澆水時(shí)，根據(jù)情況追肥每667m2施尿素5～6kg；在蕾苔期噴施硼肥、N、P、K 微肥1 次。

3.7 防治病蟲害苗期防治跳甲為害。天氣干旱易發(fā)生蚜蟲為害，終花后采取摘除蚜棒，裝入塑料袋內(nèi)深埋土中，或每667m2用10%吡蟲啉可濕性粉劑30g 兌水30～45kg 噴霧。

菌核病防治，做好中耕培土，及時(shí)摘除病、黃、老葉，隨即帶出田外，減輕病菌蔓延危害；病發(fā)初期每667m2用50%多菌靈可濕性粉劑100～200g 兌水50kg 防治1～2 次。

3.8 適時(shí)收獲，嚴(yán)把質(zhì)量關(guān)先收父本、后收母本。父本先于母本收割，在父本臨近終花期統(tǒng)一砍除父本，并運(yùn)出制種地塊以外單獨(dú)堆放；父本收割后，待母本角果80%左右黃熟時(shí)收割母本，收割前要認(rèn)真清理干凈漏割的父本和雜草。母本收割后要就近架在制種地油菜根茬上或?qū)⒅l倒立在根茬之上，防止泥土和雜草籽?；烊敕N子內(nèi)。收割的母本堆放4～5d 促后熟，選晴好天氣單場(chǎng)脫粒，嚴(yán)防父母本混雜和混入泥砂土塊等雜質(zhì)；種子脫籽后要及時(shí)在單場(chǎng)彩條布上晾曬，防止?jié)穹N存放導(dǎo)致發(fā)芽霉變，影響種子發(fā)芽率和色澤。種子曬干后要及時(shí)風(fēng)篩精選干凈以后再裝袋，袋內(nèi)外做好標(biāo)簽，防止裝混，要單獨(dú)放在干燥房間，防止種子吸潮變質(zhì)。

精細(xì)打場(chǎng)，防止混雜。嚴(yán)把種子收購(gòu)質(zhì)量關(guān)，種子收購(gòu)時(shí)，根據(jù)各制種戶制種面積和田間測(cè)產(chǎn)數(shù)量檔案，逐戶逐袋檢驗(yàn)種子質(zhì)量，種子無混雜，含水量不超過8%，凈度在98%以上，發(fā)芽率85%以上，種子籽粒整齊飽滿、色澤鮮亮，無雜草籽粒，各項(xiàng)質(zhì)量要求合格后，才能取樣、簽發(fā)種子質(zhì)量合格證，定級(jí)過秤收購(gòu)。收購(gòu)時(shí)每戶的種子取2 份樣品，一份作保留封存樣，另一份作當(dāng)年田間種植純度鑒定樣，田間鑒定以戶為單位，重點(diǎn)鑒定不育株和有無父本混雜，以提高制種戶質(zhì)量意識(shí)，確保種子質(zhì)量達(dá)標(biāo)[5]。防止摻假、使假，嚴(yán)把收種質(zhì)量關(guān)加強(qiáng)檢測(cè)鑒定，同時(shí)試驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行分子標(biāo)記鑒定。在云南元謀縣進(jìn)行田間正季鑒定，8 月中旬前后，視莢角成熟度七八成時(shí)取樣（手捏感覺到籽粒是硬的，剝開后看到籽粒有綠有黑）；春節(jié)前后開花時(shí)查看鑒定結(jié)果。