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    對(duì)比三七不同炮制品中皂苷類成分的含量

    2020-12-17 11:08:36陳英鑾
    中國民族民間醫(yī)藥 2020年21期
    關(guān)鍵詞:皂苷類生品油炸

    陳英鑾

    廣東省陽春市中醫(yī)院,廣東 陽春 528467

    三七,別名田七、參三七、血山草等,為五加科植物三七的干燥根及根莖,分布于云、桂、川、贛一帶,其中以云南文山為著名道地藥材,三七歸心、肝、胃、小腸經(jīng),味甘、微苦、性溫,生品具有活血化瘀、消腫定痛的功效[1]。中醫(yī)自古就有生熟功效各異且用法不同之說[2],而熟品三七主治失血過多、生血乏源、久病虧虛、腎精虧損等造成的血虛證,以及產(chǎn)后暈血、氣血不足、身體虛弱,有四肢無力、頭昏眼花、腰膝酸軟、食欲不振、面色蒼白等癥狀[3]。傳統(tǒng)記載三七炮制方法有“油炸”“蒸法”兩種熟制方法,通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)[4],本實(shí)驗(yàn)增加“砂燙”“烘焙”兩種熟制方法。三七總皂苷皂苷作為三七有效成分之一,有活血化瘀、活絡(luò)通脈之功效,現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),三七總皂苷具有增加腦血容量及抑制血小板聚集之效,對(duì)造血組細(xì)胞的增值作用[5]?!吨袊幍洹穂6](2015版第一部)對(duì)于三七的皂苷記載僅有人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb、三七皂苷R1含量測定的標(biāo)準(zhǔn),本實(shí)驗(yàn)利用HPLC法對(duì)三七不同炮制品皂苷成分(Rg1、R1、Rd、Rb1、Re),在油炸、蒸制、砂燙、烘焙等炮制方法下含量的變化進(jìn)行測定。

    1 材料準(zhǔn)備

    1.1 藥品選取 選取三七生品(于文山高田三七種植產(chǎn)業(yè)基地采挖),按照《中國藥典》要求對(duì)藥品進(jìn)行油炸、蒸制、砂燙、烘焙等炮制加工。

    1.2 試劑選取 選取三七總皂苷標(biāo)準(zhǔn)品(購于國家藥品生物制品檢定所),采用哇哈哈公司生產(chǎn)的純化水,使用乙腈(色譜純,購至國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、甲醇(色譜純,購至國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。

    1.3 儀器及輔料選取 選擇安捷倫高效液相色譜儀(型號(hào):Agilent 1260 II代);色譜柱(Hypersi 1 BDS-C18,250 mm×4.6 mm,5 μm);十萬分之一電子分析天平(AE-204,METTLER TOLEDO);四兩裝高速萬能粉碎機(jī)(型號(hào)XS-D4A,浙江屹立工貿(mào)有限公司);藥典篩(篩號(hào):4,孔徑:0.25 mm,浙江上虞市道墟張興紗篩廠);水浴鍋(HH-6,邦西儀器科技有限公司);電熱真空干燥箱(型號(hào):ZK-820,上海陽光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司);沙子(河沙);微波爐(MQ-L213B型美的微波爐);食用油(福臨門植物調(diào)和油)。

    2 制備樣品及對(duì)照品溶液

    2.1 制備對(duì)照品溶液 參照《中國藥典》(2015版第一部)中對(duì)當(dāng)歸皂苷含量要求,Rg1、Rb1及R1要有不小于5.0%的總含量,且其制得對(duì)照品溶液分別要有0.4 mg/mL、0.4 mg/mL、0.2 mg/mL的濃度,以此為標(biāo)準(zhǔn),取三七總皂苷對(duì)照品干燥至恒重,采用十萬分之一電子分析天平進(jìn)行精密稱量,取0.1430 g移至容量瓶,最終加甲醇制得對(duì)照品濃度均為:三七總皂苷1.430 g/mL;人參皂苷Re 0.061 g;人參皂苷Rd 0.099 mg/mL;人參皂苷Rg10.403 mg/mL;人參皂苷Rb10.419 mg/mL;三七皂苷R10.101 mg/mL。

    2.2 制備樣品溶液 將油炸、蒸制、砂燙、烘焙過的炮制三七樣品及生品三七樣品進(jìn)行粉碎;過四號(hào)篩,對(duì)其進(jìn)行精密稱量,取0.6 g置于回流瓶中(規(guī)格為250 mL),用胖度移液管精密量取甲醇50 mL加入回流瓶中,用封口膜封存靜置過夜,第二天置于水浴鍋上于溫度80℃的情況下回流2 h,放冷,回流前后進(jìn)行對(duì)回流瓶及其內(nèi)容物重量進(jìn)行稱量,并用甲醇進(jìn)行補(bǔ)重,搖勻后對(duì)其進(jìn)行過濾(采用F型0.45 μm聚偏氟乙烯微孔有機(jī)濾膜,上海興亞凈化材料廠生產(chǎn)),取續(xù)濾液。

    3 三七不同炮制品的制備

    砂燙:取適當(dāng)干凈河沙置于鐵鍋內(nèi),進(jìn)行翻炒攪拌,待其砂熱并具有流動(dòng)性時(shí),將三七倒入,并進(jìn)行翻炒攪拌,待三七表面燙至呈金黃色時(shí),立即取出,放冷,并進(jìn)行敲碎,打粉。過四號(hào)藥典篩;蒸制:用水對(duì)三七進(jìn)行浸潤,時(shí)間為1~2 h,對(duì)其進(jìn)行6 h清水蒸制,后取出干燥,放冷,敲碎,打粉,過四號(hào)藥典篩;烘焙:用微波爐對(duì)三七進(jìn)行中檔烘焙10 min左右,取出,放冷,敲碎,打粉,過四號(hào)藥典篩;油炸:使用植物調(diào)和油對(duì)三七進(jìn)行文火煎炸,至其表面呈金黃色,取出,放冷,打粉,過四號(hào)藥典篩。另取生品三七進(jìn)行干燥打粉,過四號(hào)藥典篩[7]。

    4 HPLC法分析

    4.1 HPLC分析 準(zhǔn)備采用Hypersi 1 BDS-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱,柱溫設(shè)置20℃;流動(dòng)相條件:以乙腈-水進(jìn)行梯度洗脫,流速為1 mL/min,檢測波長設(shè)置203 mm,進(jìn)樣量設(shè)置為10 μL,塔板數(shù)按三七皂苷R1計(jì)算,應(yīng)不低于4000。洗脫步驟見表1。

    表1 流動(dòng)相洗脫梯度表

    4.2 對(duì)照品線性關(guān)系 對(duì)三七總皂苷對(duì)照品進(jìn)行梯度量?。壕芪?、5、7、9、11、13 μL的對(duì)照品溶液,按上述方法進(jìn)行準(zhǔn)備工作后,對(duì)峰面積進(jìn)行測定。以峰面積為Y軸,以進(jìn)樣量為X軸(單位為μg),線性方程公式為y=mx+b,以m表斜率,b表截距,R2為相關(guān)系數(shù),線性范圍單位為mg,分析進(jìn)樣量與峰面積的關(guān)系,結(jié)果顯示,正線性相關(guān)性較好,因此,其可以較好地應(yīng)用于評(píng)價(jià)各炮制加工情況下的三七皂苷含量。

    4.3 生品三七及其不同炮制品含量 精密稱取生三七粉0.6 g,按上述方法進(jìn)行樣品溶液制備,對(duì)生三七三種皂苷:人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1及三七皂苷R1進(jìn)行含量探究,測定其峰面積進(jìn)行計(jì)算,總含量為7.98%,符合藥典要求。另取四種炮制品粉末0.6 g,按上述方法進(jìn)行樣品溶液制備,對(duì)其進(jìn)行HPLC法含量測定,峰面積見表2。

    4.4 生品三七及其不同炮制品含量圖譜比較 結(jié)果如圖1~5所示。圖1為三七生品HPLC圖譜以及41~44 min放大圖,可以看到在40 min左右時(shí)出現(xiàn)了較大的波動(dòng)。圖2為蒸制三七HPLC圖譜變化情況其中HPLC圖譜在25 min時(shí)有一定波動(dòng),40 min時(shí)波動(dòng)達(dá)到頂峰。圖3為油炸三七,同樣是在40 min之前達(dá)到頂峰,而且還出現(xiàn)兩個(gè)巔峰,只有一個(gè)組分含量出現(xiàn)明顯的增加情況。圖4、圖5分別是砂燙三七與烘焙三七的檢測結(jié)果,都是在40 min左右達(dá)到峰值,但是具體峰值的數(shù)值存在差異。

    表2 生品三七及其不同炮制品峰面積對(duì)比

    5 討論

    目前炮制加工三七多以油炸三七與蒸三七為研究對(duì)象,通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)[8-9],本實(shí)驗(yàn)相應(yīng)增加砂燙法與烘焙法兩種新方法。砂燙法具有溫度高,傳熱快且均勻的特點(diǎn);而烘焙法為微波烘焙,具有受熱均勻,溫度相對(duì)較低的特點(diǎn)。炮制品與生三七外觀有不同之處,油炸三七與砂燙三七呈金黃色,而蒸制三七與烘焙三七的顏色較深。

    本次研究中,除烘焙情況下,蒸制保留皂苷最多,其次是油炸,最后是砂燙,而烘焙炮制加工,除人參皂苷Rb1類成分,其它皂苷類成分均有增加。初步推測可能是由于烘焙破壞了促使皂苷類成分分解的成分,對(duì)抗處理樣品時(shí)回流加熱對(duì)其皂苷類成分的破壞。而查閱文獻(xiàn)可知[10],進(jìn)行樣品處理時(shí),超聲情況下的三七皂苷類成分與回流情況下的三七皂苷類成分有出入,且前者保留皂苷能力大于后者。而本次實(shí)驗(yàn)的溫度大小為砂燙最大,油炸次之,然后是蒸制,最后是烘焙,而三七皂苷類成分與其大小關(guān)系相反,由此得出,炮制溫度與三七皂苷類成分有負(fù)相關(guān)關(guān)系。

    綜上所述,不同炮制情況下的三七,其皂苷含量會(huì)有所不同,不同炮制情況下三七皂苷含量大小順序?yàn)楹姹?蒸制>油炸>砂燙,初步推測為溫度越高,三七皂苷含量變化越大。而值得注意的是,本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示了三七其它成分的增減情況,而隨著炮制溫度的增高(烘焙至砂燙),三七所含其它含量有增加情況,即其除三七皂苷外其它含量的峰面積有增高情況,且在分析過程中,筆者還發(fā)現(xiàn)在R1與Rd的峰面積圖之間,其原有含量的變化及新成分的增加較為突出,值得進(jìn)一步探究。

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