壯藥白飯樹質(zhì)量控制方法研究

陸崢琳，黃瑞松，梁子寧

（1.廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院，南寧 530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)，南寧 530001）

白飯樹（Flueggea virosa）又名白倍子、魚眼木、白魚眼、棵拉把、棵三多等［1-3］，為大戟科植物白飯樹的干燥全株［4］。在廣西多有分布，為壯族民間常用藥材。壯醫(yī)認(rèn)為，該品苦、微澀，涼，有小毒，具有清熱毒、除濕毒之功效，用于能唅能累（濕疹）、頭瘡、唄膿顯（膿皰瘡）、唄膿（癰腫）、發(fā)旺（痹?。?］。現(xiàn)代研究表明，白飯樹具有祛風(fēng)除濕、清熱解毒、消腫止痛、殺蟲止癢、止血等作用［5-7］。查閱歷版《中國藥典》和《廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)》等地方標(biāo)準(zhǔn)，均未見有白飯樹質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的收載。為確保壯藥白飯樹臨床用藥的安全有效和生產(chǎn)的質(zhì)量可控，本研究采集15批不同產(chǎn)地白飯樹樣品，對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，分別建立了性狀、鑒別（顯微和TLC鑒別）、檢查（水分、總灰分和酸不溶性灰分）、浸出物和含量測定等質(zhì)量控制方法，為壯藥白飯樹質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制訂提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試藥

白飯樹藥材采自廣西15個(gè)不同產(chǎn)地，具體信息見表1。經(jīng)廣西國際壯醫(yī)醫(yī)院黃瑞松主任藥師鑒定，為大戟科植物白飯樹，其中以8號(hào)樣品作為對(duì)照藥材；硅膠G薄層板（青島海洋化工廠分廠，批號(hào)20131118；煙臺(tái)化工研究所，批號(hào)20110308）；沒食子酸對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)110831-201204）；巖白菜素對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)111532-201203）；HPLC流動(dòng)相所用甲醇和乙腈均為色譜純（德國Merck公司），水為超純水，其他試劑均為分析純。

表1 15批白飯樹藥材信息

1.2 儀器

DMB-1223生物顯微鏡、Motic成像系統(tǒng)（廈門市麥克奧迪實(shí)業(yè)有限公司）；101-2-S-Ⅱ電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司）；SX系列箱式電阻爐（紹興市滬越科學(xué)實(shí)驗(yàn)儀器廠）；安捷倫1260高效液相色譜儀（帶自動(dòng)進(jìn)樣器及VWD檢測器，美國安捷倫公司）；KQ-3200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；XS205十萬分之一電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；EASY PUREⅡ超純水器（美國熱電公司）。

1.3 方法

1.3.1 性狀鑒別 采用經(jīng)驗(yàn)方法（眼看、手摸、鼻聞、口嘗）對(duì)15批白飯樹藥材的大小、質(zhì)地、形狀、氣味進(jìn)行觀察，確定藥材性狀。

1.3.2 顯微鑒別

1）橫切面觀察。分別取白飯樹的根、莖、葉，按石蠟切片法制作橫切面片，進(jìn)行橫切面觀察。

2）粉末觀察。取白飯樹干燥品粉碎，過60目篩，將粉末放置載玻片上，滴加水合氯醛1～2滴透化，再滴加稀甘油1～2滴裝片，觀察；或直接滴加稀甘油裝片觀察淀粉粒，確定藥材的顯微特征。

1.3.3 TLC鑒別

1）TLC鑒別一。取本品粉末0.4 g，加75%甲醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，作為供試品溶液。另取白飯樹對(duì)照藥材0.4 g，同法制成對(duì)照藥材溶液。再取沒食子酸對(duì)照品，加甲醇制成1 mg/mL的對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版通則0502）試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各1～3μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲酸（5∶4∶0.5∶0.5，V∶V）為展開劑展開，取出晾干，噴1%鐵氰化鉀溶液-1%三氯化鐵溶液（1∶1，V∶V）混合溶液（臨用時(shí)配制），放至斑點(diǎn)顯色清晰。

2）TLC鑒別二。取巖白菜素對(duì)照品，加甲醇制成1 mg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版通則0502）試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對(duì)照品藥材溶液各1～2μL，及上述對(duì)照品溶液2μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（5∶4∶2，V∶V∶V）為展開劑展開，取出晾干，噴1%三氯化鐵溶液-2%鐵氰化鉀溶液（1∶1，V∶V）混合溶液（臨用時(shí)配制），放至斑點(diǎn)顯色清晰。

1.3.4 檢查與浸出物測定 分別參照《中國藥典》2015年版通則0832水分測定法“第二法（烘干法）”和通則2302灰分測定法測定15批樣品水分、總灰分和酸不溶性灰分。以乙醇為提取溶劑，參照《中國藥典》2015年版通則2201醇溶性浸出物測定法項(xiàng)下的“熱浸法”測定15批樣品的浸出物。

1.3.5 巖白菜素含量測定

1）溶液制備。參照文獻(xiàn)方法［8］，取甲醇溶液作為陰性對(duì)照溶液；取巖白菜素對(duì)照品，加甲醇制成60μg/mL的對(duì)照品溶液；取白飯樹藥材粉末（過四號(hào)篩）0.5 g，加甲醇25 mL以超聲波法提取作為供試品溶液。

2）測定條件。參照文獻(xiàn)方法［8］，擬定波長275 nm；色譜柱為依利特SinoChrom ODS-BP（5μm，4.6 mm×250 mm）；進(jìn)樣量10μL；流動(dòng)相為甲醇-水（15∶85）；流量1.0 mL/min；柱溫25℃；理論板數(shù)按巖白菜素計(jì)算應(yīng)不低于2 000。

3）樣品含量測定。分別取15批不同產(chǎn)地白飯樹藥材粉末（過四號(hào)篩）0.5 g，按上述方法制備供試品溶液，進(jìn)樣測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 藥材形狀特征

白飯樹藥材的根多呈圓錐形，上粗下細(xì)，有分枝，長短不一，表面灰黃色至黃棕色，有細(xì)縱紋，枝根細(xì)；質(zhì)硬，斷面淺棕黃色。莖圓柱形，褐色至紅褐色，直徑0.5～2.5 cm，小枝具縱棱。單葉互生，葉柄長3～6 mm，葉片紙質(zhì)，皺縮或脫落，完整者展平后長圓形、倒卵形至橢圓形，長1.0～5.0 cm，寬1.0～3.5 cm，先端鈍圓而有極小的突尖，基部楔形，全緣，上面綠色，下面灰白至灰棕色。偶見花多朵簇生于葉腋或單生，花小，雌雄異株。偶見蒴果，近圓球形，直徑3～5 mm，淺黃棕色至黃棕色。氣微，微澀（圖1）。

圖1 白飯樹性狀

2.2 顯微特征

2.2.1 根橫切面特征 木栓層細(xì)胞3～5列，細(xì)胞類方形，排列緊密，外側(cè)有殘留落皮層，皮層較寬，細(xì)胞類圓形，稍切向延長，排列疏松。韌皮部較窄，細(xì)胞呈多邊形。形成層明顯。木質(zhì)部導(dǎo)管口徑較大，10～50μm，多單個(gè)散在或多個(gè)相聚，木射線明顯（圖2）。

圖2 根橫切面

2.2.2 莖橫切面特征 木栓層細(xì)胞2～3列，細(xì)胞類方形，排列緊密，可見皮孔，皮層較薄，細(xì)胞類圓形。韌皮部的纖維束斷續(xù)環(huán)狀排列，形成層明顯。木質(zhì)部導(dǎo)管呈縱向排列，木纖維較多，呈放射狀排列（圖3）。

2.2.3 葉橫切面特征 上、下表皮細(xì)胞均一列，類橢圓形或橢圓形，上表皮細(xì)胞較下表皮大；葉肉柵欄組織1～2列，長圓柱形，排列緊密；海綿組織的細(xì)胞近圓形或不規(guī)則形，排列疏松，但細(xì)胞間隙較大；葉脈上下表皮內(nèi)側(cè)具1～6層厚角組織細(xì)胞，其薄壁細(xì)胞內(nèi)含分泌物質(zhì)或草酸鈣簇晶，維管束呈半月形，木質(zhì)部在上方，導(dǎo)管縱向排列，形成層明顯，韌皮部在下方（圖4）。

圖3 莖橫切面

圖4 葉橫切面

2.2.4 粉末特征 粉末呈淡黃色或棕黃色。淀粉粒多見，單粒直徑2～15μm，臍點(diǎn)為點(diǎn)狀或一字狀，復(fù)粒由2～3粒組成。導(dǎo)管多為具緣孔紋導(dǎo)管，直徑17～57μm；纖維成束或散在，直徑10～25μm；草酸鈣簇晶多見，直徑7～32μm，多存在于薄壁細(xì)胞中（圖5）。

圖5 粉末顯微

2.3 TLC鑒別結(jié)果

在日光下檢識(shí)可見，各批次白飯樹供試品色譜在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點(diǎn)；分別在與沒食子酸及巖白菜素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的藍(lán)色斑點(diǎn)，薄層色譜分離效果好，斑點(diǎn)圓整清晰，比移值適中，重現(xiàn)性好。結(jié)果分別見圖6、圖7。

圖6 沒食子酸TLC色譜

圖7 巖白菜素TLC色譜

2.4 檢查與浸出物測定結(jié)果

測得15批藥材的水分為10.3%～11.3%，總灰分為2.6%～5.0%，酸不溶性灰分為0.04%～0.40%。15批樣品醇溶性浸出物為9.4%～13.4%（表2）。在供試品和巖白菜素對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)位置上，有相同保留時(shí)間的色譜峰，而陰性對(duì)照則無干擾，表明該方法專屬性強(qiáng)，無陰性干擾（圖8）。15批樣品按藥材干燥品計(jì)算，巖白菜素含量為0.096%～1.430%，平均含量為0.720%。

表2 水分、總灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物含量測定結(jié)果（n=2） （單位：%）

圖8 高效液相色譜

3 小結(jié)與討論

對(duì)15批白飯樹藥材進(jìn)行性狀和顯微觀察，總結(jié)藥材形狀特征為：根外皮灰黃色至黃棕色，質(zhì)硬；莖褐色至紅褐色，小枝具縱棱；單葉互生，葉片近革質(zhì)，長圓形、倒卵形至橢圓形，上面綠色，下面灰白至灰棕色。藥材以莖堅(jiān)實(shí)、枝葉茂盛者為佳。顯微鑒別要點(diǎn)為：根橫切面木質(zhì)部導(dǎo)管口徑較大，木射線明顯，呈放射狀；莖同一橫切面不同部位的韌皮部寬窄不一；粉末中淀粉粒和草酸鈣簇晶多見。

試驗(yàn)中曾對(duì)建立的TLC方法進(jìn)行了耐用性考察。結(jié)果表明，本研究建立的TLC方法對(duì)不同品牌預(yù)制板（青島海洋化工廠和煙臺(tái)市化學(xué)工業(yè)研究所）、不同展開溫度（8℃和30℃）、不同濕度（55%和88%）和不同點(diǎn)樣方式（點(diǎn)狀和條帶點(diǎn)樣）均顯示較好的薄層層析效果，說明該方法耐用性良好。TLC結(jié)果顯示，14批白飯樹藥材與對(duì)照藥材在相應(yīng)的位置上，均能檢出沒食子酸、巖白菜素，且斑點(diǎn)明顯，無干擾。說明建立的TLC鑒別方法專屬性強(qiáng)，可用作白飯樹的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制方法。

試驗(yàn)對(duì)白飯樹藥材的水分、總灰分、酸不溶性灰分及醇溶性浸出物進(jìn)行測定。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，綜合儲(chǔ)存條件等各種因素考慮，擬定藥材標(biāo)準(zhǔn)的水分不超過13.0%，總灰分不超過6.0%，酸不溶性灰分不超過2.0%，醇溶性浸出物不低于8.0%。

白飯樹含有巖白菜素，具有良好的鎮(zhèn)咳和治療胃腸道疾病如胃潰瘍、腹瀉及便秘的作用。此外，還具有良好的抗炎、抗心律失常、抗病毒、護(hù)肝作用［9-14］，是該藥材活性成分之一。因此，建立白飯樹巖白菜素含量測定方法，對(duì)于控制該藥材質(zhì)量具有重要意義。研究參考文獻(xiàn)［8，15，16］，采用HPLC法，建立白飯樹藥材中巖白菜素含量測定方法，測得15批樣品巖白菜素含量為0.096%（南寧市隆安縣）～1.430%（南寧市上林縣）。研究采集的藥材批次有限，測得樣品含量差異較大，考慮到今后樣品來源產(chǎn)地和采收季節(jié)不同，標(biāo)準(zhǔn)擬定巖白菜素含量按干燥品計(jì)不得低于0.30%。

試驗(yàn)建立的廣西產(chǎn)壯藥白飯樹質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的性狀、顯微鑒別、薄層鑒別、檢查（水分、總灰分和酸不溶性灰分）、浸出物和含量測定等質(zhì)量控制方法，經(jīng)方法學(xué)考察均符合藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制訂技術(shù)要求，方法可靠簡便，可用于控制白飯樹藥材質(zhì)量。該藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已收入《廣西壯族自治區(qū)壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（第三卷）》［17］，在白飯樹藥材的生產(chǎn)、流通、使用、檢驗(yàn)和管理監(jiān)督等方面將產(chǎn)生較好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益。