20%菜籽粕和谷氨酰胺添加對黔東南小香雞腸道指數(shù)及免疫機(jī)能的影響

張柏林 劉寧 楊乾 謝宇瀟 王慶容 宋培勇 曹珍 廖世永

摘要：為研究日糧中添加20%菜籽粕及20%菜籽粕日糧中添加不同水平谷氨酰胺（Glutamine，Gln）對黔東南小香雞腸道指數(shù)及免疫機(jī)能的影響，將120只1 日齡體質(zhì)量相近的黔東南小香雞隨機(jī)分為4組，分別為對照組（飼喂基礎(chǔ)日糧）、菜籽粕組（菜籽粕等量替代基礎(chǔ)日糧中20%豆粕）及菜籽粕組日糧中分別添加0.5%、1.0% Gln的試驗(yàn)組，每組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只雞，試驗(yàn)期為21 d。結(jié)果表明：與對照組相比，20%菜籽粕添加顯著降低了采食量及體增質(zhì)量（P<0.05），顯著降低了十二指腸、空腸及回腸相對長度和相對質(zhì)量（P<0.05）及脾臟、胸腺和法氏囊指數(shù)（P<0.05）。此外，20%菜籽粕添加還顯著降低了血清免疫球蛋白A（Immunoglobulin A，IgA）、免疫球蛋白G（Immunoglobulin G， IgG）及免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）含量（P<0.05），降低了空腸黏膜免疫分泌型免疫球蛋白A（Secretory immunoglobulin A，sIgA）含量以及空腸黏膜MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平（P<0.05）。與20%菜籽粕組相比，20%菜籽粕日糧中添加0.5% Gln僅顯著增加了回腸相對長度（P<0.05）;而20%菜籽粕日糧中添加1.0% Gln顯著增加了十二指腸、空腸及回腸相對長度和相對質(zhì)量（P<0.05），顯著增加了脾臟、胸腺和法氏囊免疫器官指數(shù)（P<0.05），顯著增加了血清IgA、IgG和IgM含量（P<0.05），顯著增加了空腸黏膜sIgA含量和空腸黏膜MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平（P<0.05）。由此可見，日糧中20%菜籽粕添加顯著降低了黔東南小香雞腸道指數(shù)及腸道免疫機(jī)能，但在20%菜籽粕日糧中添加1.0% Gln則對菜籽粕產(chǎn)生的抑制作用具有較好的改善作用。

關(guān)鍵詞：谷氨酰胺;菜籽粕;黔東南小香雞;腸道指數(shù);免疫機(jī)能

中圖分類號：S816.11文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號：1000-4440（2020）05-1255-10

Abstract： The aim of this study was to investigate the effects of 20% rapeseed meal and 20% rapeseed meal supplemented with different levels of glutamine （Gln） on intestine indices and immune function of Qiandongnan Xiaoxiang chicken. A total of 120 1-day-old Qiandongnan Xiaoxiang chicken with similar body weight were randomly divided into four groups （A， B， C and D）， and there were five replicates in each group and six chickens per replicate. Group A was defined as control group and was fed with the basal diet， whereas group B was fed with diets supplemented with 20% rapeseed meal （equivalent amount of soybean meal was replaced by rapeseed meal in the basal diet）， and group C and group D were separately supplemented with 0.5% Gln and 1.0% Gln on the basis of the basal diet. The duration of this experiment was 21 days. Compared with the control group， dietary supplemented with 20% rapeseed meal significantly decreased feed intake and body weight gain （P<0.05）， decreased the relative length and relative weight of duodenum， jejunum and ileum （P<0.05） and decreased spleen index， thymus index and bursa index （P<0.05）. Moreover， dietary supplemented with 20% rapeseed meal significantly decreased the contents of immunoglobulin A（IgA）， immunoglobulin G（IgG） and immunoglobulin M（IgM） in serum （P<0.05）， and decreased the secretory immunoglobulin A （sIgA） contents and mRNA expression levels of MUC1 and MUC2 in jejunal mucosa （P<0.05）. Compared with 20% rapeseed meal supplementation group， 0.5% Gln supplementation only increased relative length of ileum （P<0.05）， but 1.0% Gln supplementation significantly increased the relative length and relative weight of duodenum， jejunum and ileum and spleen index， thymus index and bursa index （P<0.05）. Additionally， 1.0% Gln supplementation increased the contents of IgA， IgG and IgM in serum （P<0.05） and the content of sIgA in jejunal mucosa （P<0.05）， and mRNA expression levels MUC1 and MUC2 in jejunal mucosa （P<0.05）. Therefore， 20% rapeseed meal supplementation significantly reduced intestine indices and immune function of Qiandongnan Xiaoxiang chicken， however， 1.0% Gln supplementation could improve the inhibitory effect.

Key words：glutamine;rapeseed meal;Qiandongnan Xiaoxiang chicken;intestine index;immune function

黔東南小香雞是貴州省極具特色的優(yōu)質(zhì)肉雞品種，主要分布于貴州省黔東南及鄰近地區(qū)，具有體型嬌小、結(jié)實(shí)緊湊、結(jié)構(gòu)勻稱、適應(yīng)能力強(qiáng)等特點(diǎn)[1]。但傳統(tǒng)的黔東南小香雞飼養(yǎng)主要是粗放式，沒有統(tǒng)一的日糧配制標(biāo)準(zhǔn)。近年來隨著小香雞規(guī)?；B(yǎng)殖的推行，其日糧的科學(xué)配制也越來越受到關(guān)注。但隨著中國畜牧業(yè)的快速發(fā)展，蛋白質(zhì)飼料尤其是優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)飼料資源供應(yīng)緊缺已成為限制中國飼料工業(yè)發(fā)展的重要因素。中國雜粕資源豐富，因而選擇一定比例的雜粕來代替豆粕，對中國飼料行業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有深遠(yuǎn)意義[2]。

菜籽粕是榨取菜籽油后的副產(chǎn)物，并且菜籽粕含有較多的粗蛋白質(zhì)，粗蛋白質(zhì)含量為30.0%～39.7%，富含蛋氨酸，是優(yōu)質(zhì)的禽類飼料蛋白質(zhì)來源[3-4]。然而，菜籽粕中含有硫代葡萄糖苷、植酸、芥子堿和單寧等抗?fàn)I養(yǎng)因子，能夠影響動(dòng)物的腸道發(fā)育、養(yǎng)分消化利用率及免疫性能，這在一定程度上限制了其在飼料中的應(yīng)用[5-6]。大多數(shù)研究結(jié)果表明，在早期肉雞日糧中添加10%左右的菜籽粕并不影響肉雞的生長性能[7-9]。然而隨著菜籽粕添加量的增加，菜籽粕會(huì)對肉雞產(chǎn)生不利影響。Rabie等[9]選用Cobb肉雞為研究對象，分別在其日糧中添加0、10.0%、12.5%、15.0%及20.0%的菜籽粕，發(fā)現(xiàn)日糧中添加20.0%菜籽粕顯著降低了21日齡肉雞的平均日增質(zhì)量，增加了料質(zhì)量比，而其他菜籽粕添加水平對肉雞平均日增質(zhì)量及料質(zhì)量比均沒有顯著影響。Min等[10]選用1日齡肉雞為研究對象，分別在其日糧中添加0、5%、10%、15%、20%及25%水平的菜籽粕，試驗(yàn)期為18 d，發(fā)現(xiàn)日糧中添加25%菜籽粕顯著降低了肉雞平均日增質(zhì)量及平均日采食量。Gopinger等[8]研究結(jié)果顯示，日糧中菜籽粕含量達(dá)到或超過20%時(shí)，肉雞的腸道形態(tài)受到破壞。盡管菜籽粕是優(yōu)良的豆粕替代品，但以上結(jié)果均表明，日糧中添加高劑量的菜籽粕（達(dá)到或超過20%）會(huì)降低肉雞生長性能，破壞腸道形態(tài)，進(jìn)而影響肉雞的生長及健康。然而，小腸是機(jī)體養(yǎng)分消化和利用的重要場所，具有重要的黏膜屏障功能。因此，盡早地促進(jìn)幼禽腸道的功能完善將有利于提高雛雞健康，進(jìn)而更大程度地發(fā)揮其生長潛力和提高機(jī)體的抗病能力[11-12]。因此，為了盡可能地提高菜籽粕在日糧中的添加水平，我們設(shè)想在日糧中添加20%菜籽粕的基礎(chǔ)上采取營養(yǎng)性干預(yù)措施對肉雞腸道進(jìn)行保護(hù)，進(jìn)而為肉雞發(fā)揮最大的生產(chǎn)潛能提供保障。

谷氨酰胺（Glutamine，Gln）是腸道細(xì)胞的“重要燃料”，具有促進(jìn)腸上皮細(xì)胞增殖與分化的作用[13]。日糧中添加Gln有利于促進(jìn)腸道生長及發(fā)育，促進(jìn)免疫細(xì)胞增殖、免疫器官發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能[14-16]。Bartell[17]研究結(jié)果表明，日糧中添加1% Gln 顯著增加了肉雞十二指腸及空腸絨毛高度。Wu等[13]的研究結(jié)果同樣表明，日糧中添加1% Gln增加了腸道絨毛高度及絨毛高度與隱窩深度的比值。并且，日糧中添加Gln有利于維持腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性，提高腸道黏膜免疫水平[18]。王中華等[19]在肉雞日糧中分別添加0、0.5%、1.0%及1.5% Gln，發(fā)現(xiàn)日糧中添加Gln顯著增加了肉雞胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)，并且以1.0% Gln添加效果最好。以上結(jié)果說明，日糧中添加Gln有利于促進(jìn)腸道及免疫器官發(fā)育。因此，我們推測，日糧中添加Gln有可能降低高劑量菜籽粕添加對肉雞腸道發(fā)育及健康的不利影響，但到目前為止，有關(guān)研究還未見報(bào)道。因此，本研究擬選取黔東南小香雞為研究對象，通過在其日糧中添加20%菜籽粕及不同水平Gln，研究其對黔東南小香雞免疫性能及腸道免疫機(jī)能的影響，從而為黔東南小香雞早期日糧的科學(xué)配制及菜籽粕的合理利用提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理

選用120只1日齡體質(zhì)量相近且健康的雄性黔東南小香雞，隨機(jī)分為4組，分別為對照組（飼喂基礎(chǔ)日糧）、菜籽粕組（菜籽粕等量替代對照組日糧中20%豆粕）及菜籽粕日糧組中分別添加0.5%和1.0% Gln試驗(yàn)組，每個(gè)處理組5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)6只雞?；A(chǔ)日糧和菜籽粕組日糧為等能等氮日糧。日糧配制參照雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)（2004）進(jìn)行。日糧配方及營養(yǎng)成分如表1所示。

試驗(yàn)在貴州省榕江山農(nóng)發(fā)展有限責(zé)任公司進(jìn)行。試驗(yàn)雞只采取離地籠養(yǎng)，6只/籠，早、中、晚各飼喂1次。整個(gè)試驗(yàn)期，雞只自由采食及飲水。在試驗(yàn)1～3 d，雞舍內(nèi)溫度保持在35 ℃左右，以后每2 d下降1 ℃，直到降至25 ℃左右，相對濕度維持在55%～65%左右。整個(gè)試驗(yàn)期，雞只采用23 h光照和 1h黑暗的光照程序。保持雞舍干燥清潔，按照常規(guī)免疫程序進(jìn)行免疫，試驗(yàn)期為21 d。

1.2主要試驗(yàn)材料及來源

試驗(yàn)所用菜籽粕購自遵義金鼎農(nóng)業(yè)科技有限公司（粗蛋白質(zhì)含量為35.00%）。Gln購自上海斐雅科技發(fā)展有限公司，含量為99.10%。

1.3主要試驗(yàn)儀器

FA-1004型電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn);VELP ZX3型旋渦混勻器，東南科創(chuàng)科技有限公司生產(chǎn);BBS-SDC型超凈工作臺(tái)，濟(jì)南鑫貝西生物技術(shù)有限公司生產(chǎn);UVS-99型微量核蛋白測試儀，上海創(chuàng)萌生物科技有限公司生產(chǎn);CFX Connect-三通道梯度熒光定量PCR儀，美國Bio-Rad公司生產(chǎn)）。

1.4樣品采集

1.4.1小腸組織收集試驗(yàn)結(jié)束前1 d晚上6∶00，所有雞只進(jìn)行斷料處理，但可自由飲水。第2 d早上8∶00，所有雞只進(jìn)行空腹稱質(zhì)量。每個(gè)處理組分別選擇10只符合群體均質(zhì)量的肉雞進(jìn)行稱質(zhì)量并宰殺。宰殺后立即打開腹腔，分別收集十二指腸、空腸及回腸，用于腸道指數(shù)的測定。

1.4.2免疫器官收集分別摘取脾臟、胸腺和法氏囊等免疫器官，并用精密電子天平稱質(zhì)量，用以免疫器官指數(shù)的測定。

1.4.3血清收集將方法1.4.1中每個(gè)處理選擇的10只空腹稱質(zhì)量的黔東南小雞進(jìn)行宰殺，采集頸靜脈血液至10 ml離心管中，傾斜放置以利于血清析出。在4 ℃、2 500 r/min條件下離心15 min，將收集到的血清進(jìn)行分裝，保存在-20 ℃冰箱中待測。

1.4.4空腸黏膜收集在空腸中部采集5 cm左右的腸段，縱向剖開腸段，用預(yù)冷的生理鹽水沖掉食糜，用載玻片刮取腸黏膜后裝入2 ml凍存管中，放入液氮中保存待測。

1.5測定指標(biāo)及方法

1.5.1腸道指數(shù)測定將雞只宰殺（每個(gè)處理10只，每個(gè)重復(fù)2只）后立即打開腹腔，分別采集十二指腸、空腸及回腸，除去腸系膜并輕輕擠出食糜，用精密天平和尺子分別測定各腸段的質(zhì)量及長度，進(jìn)行腸道指數(shù)計(jì)算。公式如下：腸道相對長度=各腸段長度（cm）/宰前活質(zhì)量（kg）。腸道相對質(zhì)量=各腸段質(zhì)量（g）/宰前活質(zhì)量（kg）。

1.5.2免疫器官指數(shù)測定縱向打開腹腔分別摘取脾臟、胸腺和法氏囊。用精密天平分別稱取胸腺、脾臟和法氏囊質(zhì)量進(jìn)行免疫器官指數(shù)測定，具體計(jì)算公式如下：免疫器官指數(shù)（g/kg）=免疫器官質(zhì)量（g）/宰前活質(zhì)量（kg）。

1.5.3血清免疫球蛋白含量測定采用商品化試劑盒進(jìn)行血清免疫球蛋白A（Immunoglobulin A，IgA）、免疫球蛋白G（Immunoglobulin G， IgG）及免疫球蛋白M（Immunoglobulin M，IgM）含量測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

每1 kg飼糧提供：維生素A 6 000 IU，硫胺素2.00 mg，核黃素4.00 mg，煙酸42.00 mg，吡哆醇4.00 mg，維生素B12 0.01 mg，維生素D3 2 000 IU，維生素E 30 IU，維生素K3 1.80 mg，泛酸鈣10.00 mg，生物素0.15 mg，葉酸0.85 mg，鐵 （以硫酸亞鐵計(jì)） 80.00 mg，銅（以硫酸銅計(jì)） 8.00 mg，錳 （以硫酸錳計(jì)）80.00 mg，鋅（以硫酸鋅計(jì)） 65.00 mg，碘（以碘化鉀計(jì)） 0.50 mg，硒（以亞硒酸鈉計(jì)）0.25 mg。營養(yǎng)成分：粗蛋白質(zhì)為實(shí)測值，其余為計(jì)算值。

1.5.4空腸黏膜分泌型免疫球蛋白A（Secretory immunoglobulin A，sIgA）含量測定空腸黏膜sIgA含量測定采用商品化試劑盒測定，具體操作按照試劑盒說明書進(jìn)行。試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.5.5空腸黏膜黏蛋白基因MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平的測定稱取一定質(zhì)量的空腸黏膜樣品，放入盛有1 ml預(yù)冷的 RNAiso Plus（產(chǎn)品編號：D9108A，TaKaRa）的DEPC預(yù)處理的5 ml離心管中，冰浴勻漿至液體澄清為止。然后經(jīng)分相、RNA沉淀、RNA洗滌及RNA重溶，并用微量分光光度計(jì)測定所提取RNA的OD260/280值。利用PrimeScriptTM RT master Mix反轉(zhuǎn)試劑盒進(jìn)行RNA的轉(zhuǎn)錄，將轉(zhuǎn)錄后的cDNA置于-20 ℃保存。根據(jù)NCBI公布的基因序列設(shè)計(jì)目的基因引物并以β-actin基因作內(nèi)參，所有引物由生工生物公司合成，內(nèi)參及目的基因序列見表2。

利用TB Green Premix Ex Taq試劑盒（No. RR420A）進(jìn)行RT-PCR試驗(yàn)，按試劑盒說明書操作。基因表達(dá)的相對定量計(jì)算參照Livak 等[20]的方法進(jìn)行。

1.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

應(yīng)用SPSS 20.0中的一般線性模型進(jìn)行方差分析，若差異顯著則用Duncans進(jìn)一步進(jìn)行比較。結(jié)果以平均數(shù)及平均標(biāo)準(zhǔn)誤表示，P<0.05表示差異顯著。

2結(jié)果與分析

2.120%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞生長性能的影響

如表3所示，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了黔東南小香雞的采食量及體增質(zhì)量（P<0.05），但對飼料轉(zhuǎn)化率沒有顯著影響（P>0.05）。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln對采食量、體增質(zhì)量及飼料轉(zhuǎn)化率均沒有顯著影響（P>0.05）且與對照組差異不顯著（P>0.05）。然而，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了體增質(zhì)量及采食量（P<0.05），但對飼料轉(zhuǎn)化率沒有顯著影響（P>0.05），且與對照組差異不顯著（P>0.05）。

2.220%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞腸道指數(shù)的影響

如表4所示，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了黔東南小香雞十二指腸、空腸及回腸的相對長度和相對質(zhì)量（P<0.05）。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln顯著增加了回腸相對長度（P<0.05），但對十二指腸和空腸的相對長度及相對質(zhì)量、回腸相對質(zhì)量均沒有顯著影響（P>0.05），并且0.5% Gln添加組空腸相對質(zhì)量與對照組差異不顯著（P>0.05），但十二指腸和回腸相對長度及相對質(zhì)量、空腸相對長度均顯著低于對照組（P<0.05）;日糧中添加1.0% Gln顯著增加了十二指腸、空腸及回腸的相對長度和相對質(zhì)量（P<0.05），并且與對照組差異不顯著（P>0.05）。日糧中添加1.0% Gln組十二指腸相對長度及相對質(zhì)量、回腸相對長度均顯著高于0.5% Gln添加組（P<0.05）。

2.320%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞免疫器官指數(shù)的影響

如表5所示，與對照組相比，20%菜籽粕添加顯著降低黔東南小香雞胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)（P<0.05）。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln對胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)無顯著影響（P>0.05），且與對照組差異不顯著（P>0.05）;日糧中添加1.0% Gln顯著增加了胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)和脾臟指數(shù)（P<0.05），且與對照組差異不顯著（P>0.05）。1.0% Gln添加組脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均顯著高于0.5% Gln添加組（P<0.05），但法氏囊指數(shù)與0.5% Gln添加組差異不顯著（P>0.05）。

2.420%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞血清免疫球蛋白含量的影響

如表6所示，與對照組相比，20%菜籽粕添加顯著降低了黔東南小香雞血清IgA、IgM和IgG含量（P<0.05）。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln對血清IgA、IgM和IgG含量沒有顯著影響（P>0.05），但顯著低于對照組（P<0.05）;日糧中添加1.0% Gln顯著增加了血清IgA、IgM和IgG含量（P<0.05），且與對照組差異不顯著（P>0.05）。日糧中添加1.0% Gln組血清IgA、IgM和IgG含量均顯著高于0.5% Gln添加組（P<0.05）。

2.520%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞空腸黏膜sIgA含量的影響

如圖1所示，與對照組相比，20%菜籽粕添加顯著降低了黔東南小香雞空腸黏膜sIgA含量（P<0.05）。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln對空腸黏膜sIgA含量的影響不顯著（P>0.05），但顯著低于對照組（P<0.05）;日糧中添加1.0% Gln顯著增加了空腸黏膜sIgA含量（P<0.05），且與對照組差異不顯著（P>0.05）。日糧中添加1.0% Gln組空腸黏膜sIgA含量顯著高于0.5% Gln添加組（P<0.05）。

2.620%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞空腸黏膜MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)的影響

如圖2所示，與對照組相比，20%菜籽粕添加顯著降低了黔東南小香雞空腸黏膜MUC1及MUC2 mRNA表達(dá)水平（P<0.05）; 與20%菜籽粕組相比，添加0.5% Gln對MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平?jīng)]有顯著影響（P>0.05），但顯著低于對照組（P<0.05）。然而，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平（P<0.05），且與對照組差異不顯著（P>0.05）。日糧中添加1.0% Gln組空腸黏膜MUC1及MUC2 mRNA表達(dá)水平均顯著高于0.5% Gln添加組（P<0.05）。

3討論

3.120%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞生長性能的影響

菜籽粕是家禽日糧中常用的蛋白質(zhì)來源，是一種經(jīng)濟(jì)有效的大豆粕替代品[20-21]。然而，菜籽粕中含有大量抗?fàn)I養(yǎng)因子，如葡萄糖硫甙、芥子酸、植酸和一些可溶性非淀粉多糖，這些抗?fàn)I養(yǎng)因子的存在會(huì)影響家禽的生長性能[22]。Rabie等[9]研究結(jié)果表明，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了1～21日齡肉雞生長性能。Sina等[23]研究結(jié)果同樣表明，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了1～21日齡肉雞體增質(zhì)量。本研究也發(fā)現(xiàn)，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了1～21日齡肉雞采食量及料質(zhì)量比。本研究中，20%菜籽粕添加對生長性能的抑制作用可能是由于菜籽粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子的存在降低了肉雞生長性能。然而，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了肉雞總采食量，增加了體增質(zhì)量。Dai等[24]研究結(jié)果也顯示，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了肉雞生長性能。Bartell等[25]研究結(jié)果同樣表明，與對照組相比，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了肉雞體增質(zhì)量，平均提高了11%。日糧中添加1.0% Gln對生長性能的改善作用可能是由于Gln添加提高了養(yǎng)分的消化率，進(jìn)而改善了生長性能。

3.220%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞腸道指數(shù)的影響

本研究結(jié)果表明，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了黔東南小香雞十二指腸、空腸及回腸相對長度和相對質(zhì)量。這表明，日糧中添加高劑量的菜籽粕影響了黔東南小香雞的腸道發(fā)育。菜籽粕中抗?fàn)I養(yǎng)因子可使肉雞腸道產(chǎn)生過敏反應(yīng)，使得腸道絨毛高度降低，造成腸道黏膜萎縮[26]。本研究中腸道指數(shù)的降低可能與高劑量菜籽粕添加使得日糧中抗?fàn)I養(yǎng)因子水平較高有關(guān)。與20%菜籽粕組相比，日糧中添加0.5% Gln顯著增加回腸相對長度，1.0% Gln添加則顯著增加了十二指腸、空腸及回腸相對長度和相對質(zhì)量。戴四發(fā)等[27]研究發(fā)現(xiàn)，日糧中添加0.4% Gln顯著增加了3周齡AA肉雞的回腸長度及相對質(zhì)量，但對十二指腸和空腸的影響不顯著。與本研究結(jié)果相似，黃曉亮等[28]研究結(jié)果同樣表明，外源性Gln添加可以促進(jìn)小腸的生長發(fā)育，表現(xiàn)為肉雞十二指腸、空腸和回腸質(zhì)量及長度的增加。以上結(jié)果表明，日糧中添加Gln對腸道生長發(fā)育具有促進(jìn)作用，并且具有劑量依賴性。Gln可為腸道上皮細(xì)胞提供代謝燃料，促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化，從而促進(jìn)腸道形態(tài)和黏膜發(fā)育[29]。以上結(jié)果表明高劑量菜籽粕日糧中添加1.0% Gln可能通過促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞增殖和發(fā)育，進(jìn)而引起腸道指數(shù)的增加。

3.320%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞免疫器官指數(shù)的影響

免疫器官指數(shù)是反映免疫器官發(fā)育狀況的指標(biāo)，是評價(jià)機(jī)體免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)。免疫器官的發(fā)育狀況直接影響機(jī)體的免疫應(yīng)答水平和抵抗外來病原菌入侵的能力[30]。脾臟、胸腺和法氏囊是禽類最重要的免疫器官。其中，胸腺主要參與細(xì)胞免疫，而脾臟具有參與免疫應(yīng)答的功能，法氏囊是禽類所特有的中樞淋巴器官[31]。動(dòng)物的免疫能力取決于免疫器官的生長發(fā)育狀態(tài)及機(jī)能強(qiáng)弱，它的生長發(fā)育影響著肉雞的免疫能力[32]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加20%菜籽粕顯著降低了黔東南小香雞免疫器官指數(shù)。吳正可[33]研究結(jié)果表明，日糧中添加15%菜籽粕顯著降低了21日齡肉雞胸腺指數(shù)，但對脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)沒有影響。這意味著，日糧中添加高水平的菜籽粕在一定程度上影響了肉雞免疫器官的發(fā)育，降低了機(jī)體免疫機(jī)能。在正常情況下，免疫器官的質(zhì)量會(huì)隨著器官細(xì)胞的增殖分化而升高，免疫器官指數(shù)的升高則意味著免疫系統(tǒng)的快速成熟[34]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加1.0% Gln可增加免疫器官指數(shù)，說明Gln對免疫器官的生長發(fā)育具有促進(jìn)作用，這與周聯(lián)高等[31]的研究結(jié)果相似。日糧中添加Gln能夠促進(jìn)免疫器官的發(fā)育和成熟，提高機(jī)體免疫機(jī)能，具體表現(xiàn)為：胸腺內(nèi)胸腺小葉數(shù)量增加，法氏囊內(nèi)淋巴濾泡數(shù)量增多及脾臟內(nèi)脾小結(jié)增多、增大[35-36]。此外，日糧中添加Gln為機(jī)體免疫器官的發(fā)育提供了豐富的嘌呤、嘧啶等活性前體物質(zhì)，從而促進(jìn)了免疫器官的生長發(fā)育[37-38]。以上結(jié)果表明，日糧中添加Gln可能通過加強(qiáng)免疫細(xì)胞增殖分化，促進(jìn)胸腺、脾臟及法氏囊等免疫器官的發(fā)育，增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫功能，從而改善日糧中高劑量菜籽粕添加對免疫機(jī)能的不利影響。

3.420%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞免疫球蛋白含量的影響

免疫球蛋白IgA、IgG和IgM由漿細(xì)胞分泌，是一類結(jié)構(gòu)相似并具有抗體活性的血清球蛋白，其含量的高低能反應(yīng)機(jī)體免疫系統(tǒng)的狀況，是評價(jià)免疫系統(tǒng)的一項(xiàng)重要指標(biāo)[39-40]。本研究發(fā)現(xiàn)，20%菜籽粕添加顯著降低了血清IgA、IgG和IgM含量。Aleksandra等[5]研究結(jié)果表明，日糧中添加15%菜籽粕顯著降低了肉雞IgM含量，但對IgA含量沒有影響。這與本研究的結(jié)果不同，造成結(jié)果出現(xiàn)差異的原因可能是由于菜籽粕的添加量不同引起。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在20%菜籽粕日糧中添加0.5% Gln對IgA、IgG和IgM含量并沒有顯著影響，但添加1.0% Gln顯著增加IgA、IgM和IgG含量。這可能是由于Gln對血清免疫球蛋白含量的影響具有劑量依賴性。Bartell等[25]也得到了與本試驗(yàn)相似的結(jié)果，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了21日齡Cobb肉雞血清 IgA 及IgG含量。Gln添加能夠促CD4+（T-輔助細(xì)胞的一種）的增殖[41]，而IgG及IgM是T輔助細(xì)胞依賴性抗體，是T輔助細(xì)胞響應(yīng)的指示物[42]。這意味著Gln可能通過提高T-輔助細(xì)胞的增殖而增加了血清IgG或IgM含量。20%菜籽粕日糧降低了黔東南小香雞的體液免疫水平，而在其日糧中添加1.0% Gln則有助于改善這種不利影響。

3.520%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞空腸黏膜sIgA含量的影響

sIgA是腸道淋巴細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的一種IgA抗體，是機(jī)體發(fā)揮免疫作用的一道重要屏障，可以阻止細(xì)菌等病原微生物在黏膜表面的黏附，具有免疫清除、免疫屏障、中和病毒等功能[43-46]。但到目前為止，有關(guān)菜籽粕添加對腸道sIgA分泌的影響還未見報(bào)道。本試驗(yàn)結(jié)果表明，20%菜籽粕添加顯著降低了空腸黏膜sIgA的含量。sIgA是腸道黏膜固有層漿細(xì)胞產(chǎn)生的主要免疫效應(yīng)因子，是機(jī)體分泌量最多的免疫球蛋白。并且，sIgA為主的體液免疫在腸道免疫中起主要作用，對腸道黏膜起著重要的保護(hù)作用[47]。本研究中sIgA含量的降低與血清免疫球蛋白（IgA、IgG及IgM）含量降低的結(jié)果是相一致的，這意味著20%菜籽粕添加降低了機(jī)體體液免疫水平，這種效應(yīng)可能與菜籽粕中含有大量的抗?fàn)I養(yǎng)因子有關(guān)。然而，日糧中添加1.0% Gln顯著增加了肉雞空腸黏膜sIgA的含量。這與李虎等[32]的研究結(jié)果相似，其研究結(jié)果表明，日糧中添加Gln顯著增加了肉雞十二指腸sIgA含量。并且日糧中添加Gln能夠顯著增加腸黏膜中分泌sIgA漿細(xì)胞數(shù)量，增加腸道sIgA含量[18，48]，而Gln缺乏或不足時(shí)，sIgA含量隨之下降[49]。因此，我們推測，日糧中添加Gln可能通過增加空腸黏膜sIgA漿細(xì)胞數(shù)量，進(jìn)而增加空腸黏膜sIgA含量，從而有效解除了高劑量菜籽粕添加對腸道免疫球蛋白分泌的抑制作用，在一定程度上增強(qiáng)了腸道黏膜的免疫屏障功能。

3.620%菜籽粕和Gln添加對黔東南小香雞空腸黏膜MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平的影響

黏蛋白是一類由組織上皮細(xì)胞分泌的糖蛋白，在不同組織中具有不同的功能，主要由杯狀細(xì)胞和潘氏細(xì)胞分泌。在腸道組織中主要是膜結(jié)合型MUC1和分泌型MUC2 2種。其中，MUC2是構(gòu)成腸黏液層的主要成分，而MUC1有保護(hù)和潤滑作用，可促進(jìn)上皮細(xì)胞的黏附，從而增強(qiáng)腸道免疫能力[50-51]。但就我們所知，到目前為止，有關(guān)Gln對肉雞腸道黏膜MUC1及MUC2 mRNA表達(dá)水平的影響還未見報(bào)道。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，20%菜籽粕添加可顯著降低空腸黏膜MUC1及MUC2 mRNA表達(dá)水平，而添加1.0% Gln則顯著增加了MUC1和MUC2 mRNA表達(dá)水平。Gln是腸道黏膜細(xì)胞的重要能量來源，在腸道修復(fù)和腸道免疫系統(tǒng)方面發(fā)揮著重要作用[52-53]。Wang等[54]研究結(jié)果表明，含有Gln的腸外營養(yǎng)可提高小鼠小腸MUC2 mRNA表達(dá)水平。高玉琪等[55]研究結(jié)果表明，日糧中添加Gln顯著增加了獺兔回腸黏膜MUC1 mRNA表達(dá)水平。這可能是由于日糧中添加Gln刺激了腸隱窩干細(xì)胞增殖并轉(zhuǎn)化為杯狀細(xì)胞，從而增加腸道黏蛋白的分泌，進(jìn)而增強(qiáng)腸道的免疫性能[56]。

4結(jié)論

日糧中20%菜籽粕添加降低了黔東南小香雞免疫性能及腸道免疫水平，在其日糧中添加1.0% Gln在一定程度上緩解了高含量菜籽粕添加對黔東南小香雞免疫機(jī)能的不利影響，有利于提高機(jī)體的免疫機(jī)能和生長性能。

參考文獻(xiàn)：

[1]廖飛，趙孝木，姜艷，等.黔東南小香雞的品種遺傳資源特點(diǎn)及開發(fā)利用[J]. 貴州畜牧獸醫(yī)， 2015， 39（3）：27-29.

[2]吳瑩，樊振，馬貴軍.發(fā)酵蛋白飼料在畜牧養(yǎng)殖行業(yè)中的研究應(yīng)用進(jìn)展[J]. 飼料研究， 2018（6）：1-3，13.

[3]劉丹丹，汝應(yīng)俊，年芳，等.肉仔雞對不同來源菜籽粕氨基酸消化率的比較研究[J]. 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2014， 49（2）：13-20.

[4]NEGA T， WOLDES Y. Review on nutritional limitations and opportunities of using rapeseed meal and other rape seed by-products in animal feeding[J]. Journal of Nutritional Health & Food Engineering， 2018， 8（1）： 43-48.

[5]ALEKSANDRA D， KATARZYNA O， ANITA Z， et al. The effect of raw and fermented rapeseed cake on the metabolic parameters， immune status， and intestinal morphology of turkeys[J]. Poultry Science， 2018， 97（11）： 1-11.

[6]GRELA E， CZECH A， KIESZ M， et al. A fermented rapeseed meal additive： Effects on production performance， nutrient digestibility， colostrum immunoglobulin content and microbial flora in sows[J]. Animal Nutrition， 2019， 5 （4）：373-379.

[7]WOYENGO T A， KIARIE E， NYACHOTI C M. Growth performance， organ weights， and blood parameters of broilers fed diets containing expeller-extracted canola meal[J]. Poultry Science， 2011， 90 （11）：2520-2527.

[8]GOPINGER E， XAVIER E G， ELIAS M C， et al. The effect of different dietary levels of canola meal on growth performance， nutrient digestibility， and gut morphology of broiler chickens[J]. Poultry Science， 2014， 93 （5）：1130-1136.

[9]RABIE M H， HAYAM M A， ABO E M， et al. Nutritional and physiological effects of different levels of canola meal in broiler chick diets[J]. Asian Journal of Animal and Veterinary Advances， 2015， 10（4）：161-172.

[10]MIN Y N， HANCOCK A， YAN F， et al. Use of combinations of canola meal and distillers dried grains with solubles in broiler starter diets[J]. Journal of Applied Poultry Research， 2009， 18 （4）：725-733.

[11]GAO T， ZHAO M， ZHANG L， et al. In ovo feeding of l-arginine regulates intestinal barrier functions of posthatch broilers by activating the mTOR signaling pathway[J]. Journal of the science of food and agriculture， 2018， 98（4）：1416-1425.

[12]UNI Z， TAKO E， GAL-GARBER O， et al. Morphological， molecular， and functional changes in the chicken small intestine of the late-term embryo[J]. Poultry Science， 2003， 82 （11）：1747-1754.

[13]WU Q， LIU N， WU X， et al. Glutamine alleviates heat stress-induced impairment of intestinal morphology， intestinal inflammatory response， and barrier integrity in broilers[J]. Poultry Science， 2018， 97 （8）：2675-2683.

[14]SAKAMOTO M I， MURAKAMI A E， SILVEIRA T G V， et al. Influence of glutamine and vitamin E on the performance and the immune responses of broiler chickens[J]. Brazilan journal of poultry science， 2006， 8 （4）：243-249.

[15]賈海燕.谷氨酰胺在冷應(yīng)激雛雞肺損傷中保護(hù)作用的研究[D].哈爾濱：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009.

[16]劉艷芬，馬建升，黃銀姬，等.谷氨酰胺對肉仔雞免疫器官發(fā)育及免疫功能的影響[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2006， 26 （5）：567-569.

[17]BARTELL S M. The effect of supplemental glutamine on growth performance， development of the gastrointestinal tract， and immune response of broiler chicks[D]. Georgia： The university of Georgia， 2003.

[18]XING S， ZHANG B， LIN M， et al. Effects of alanyl-glutamine supplementation on the small intestinal mucosa barrier in weaned piglets[J]. Asian-Australasian Journal of Animal Science， 2017， 30（2）：236-245.

[19]王中華，黃修奇，楊艷玲. 谷氨酰胺對肉仔雞生長、屠宰性能和免疫器官指數(shù)的影響[J]. 中國家禽， 2011， 33 （18）：69-70.

[20]LIVAK K， SCHMITTGEN T. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2-△△Ct method[J]. Methods， 2000， 25 （4）：402-408.

[21]TOGHYANI M， RODGERS N， BAREKATAIN M R， et. al. Apparent metabolizable energy value of expeller-extracted canola meal subjected to different processing conditions for growing broiler chickens[J]. Poultry Science， 2014， 93（9）：2227-2236.

[22]ULLAH Z， REHMAN Z U， YIN Y， et. al. Comparative ileal digestibility of amino acids in 00-rapeseed meal and rapeseed meal fed to growing male broilers[J]. Poultry Science， 2017， 96（8）： 2736-2742.

[23]SINA P， PARVIZ F， NEGIN D. Growth performance， organ weights and， blood parameters of broilers fed diets containing graded levels of dietary canola meal and supplemental copper [J]. Journal of Poultry Science， 2013， 50：354-363.

[24]DAI S F， WANG L K， WEN A Y， et. al. Dietary glutamine supplementation improves growth performance， meat quality and colour stability of broilers under heat stress[J]. British Poultry Science， 2009， 50 （3）：333-340.

[25]BARTELL S M， BATAL A B. The effect of supplemental glutamine on growth performance， development of the gastrointestinal tract， and humoral immune response of broilers[J]. Poultry Science， 2007， 86 （9）：1940-1947.

[26]胡永娜. 微生物發(fā)酵菜籽粕營養(yǎng)價(jià)值的評定及其對肉仔雞生長發(fā)育的影響[D].雅安： 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2012.

[27]戴四發(fā)，王立克，金光明，等. 外源谷氨酰胺對AA肉雞腸道早期生長發(fā)育的影響 [J]. 中國飼料， 2002（16）：12-13.

[28]黃曉亮，劉艷芬，廖建財(cái)，等. 谷氨酰胺對肉雞腸道發(fā)育及小腸消化酶活性的影響[J]. 中國飼料， 2009（14）：38-41.

[29]XUE G， BAREKATAIN R， WU S， et al. Dietary L-glutamine supplementation improves growth performance， gut morphology， and serum biochemical indices of broiler chickens during necrotic enteritis challenge[J]. Poultry Science， 2018， 97 （4）：1334-1341.

[30]胡永娜，王之盛，李愛科. 固態(tài)發(fā)酵菜籽粕對肉仔雞生長性能、免疫功能及消化酶活性的影響[J]. 動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)， 2012， 24（7）：1293-1301.

[31]周聯(lián)高，章世元，劉艷芬，等. 谷氨酰胺對肉仔雞生產(chǎn)性能及免疫機(jī)能的影響[J]. 動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)報(bào)， 2008，20（3）：305-310.

[32]李虎，李海英，李曉斌，等. 谷氨酰胺替代飼用抗生素對黃羽肉雞免疫器官指數(shù)及小腸黏膜免疫的影響[J]. 中國畜牧獸醫(yī)， 2012， 39 （12）：82-88.

[33]吳正可. 多菌種固態(tài)發(fā)酵菜籽粕的工藝優(yōu)化及其肉雞的飼用價(jià)值評定[D].北京： 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院， 2018.

[34]程強(qiáng). 日糧中添加包被肉桂油對肉雞免疫功能和腸黏膜屏障基因表達(dá)的影響[D].武漢：武漢輕工大學(xué)， 2018.

[35]張敏，鄒曉庭，孫亞麗，等. 谷氨酰胺對1～3周齡肉仔雞免疫功能的影響[J]. 畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2009， 40 （10）：1494-1498.

[36]李升和，王玨，范光麗，等. 谷氨酰胺對肉雞免疫器官胚后發(fā)育的影響[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2006， 26（1）：74-78

[37]WANG B， WU G， ZHOU Z， et al. Glutamine and intestinal barrier function[J]. Amino Acids， 2015， 47 （10）：2143-2154.

[38]鄧留坤. 胚胎注射谷氨酰胺對肉仔雞早期生長發(fā)育的影響[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)， 2010.

[39]鄒曉庭. 谷氨酰胺對斷奶仔豬生長、免疫的影響及其機(jī)理研究[D].杭州：浙江大學(xué)， 2007.

[40]王麗. 谷氨酰胺對斷奶仔豬免疫應(yīng)激調(diào)節(jié)作用及其分子機(jī)制的研究[D].沈陽：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2017.

[41]BARTELL S M， BATAL A B. The effect of supplemental glutamine on growth performance， development of the gastrointestinal tract， and humoral immune response of broilers[J]. Poultry Science， 2007， 86 （9）：1940-1947.

[42]YEH S L， YEH C L， LIN M T， et. al. Effects of glutamine-supplemented total parenteral nutrition on cytokine production and T cell population in septic rats[J]. Journal of Parenteral & Enteral Nutrition， 2001， 25 （5）：269-274.

[43]MATHERS A R， CUFF C F. Role of Interleukin-4 （IL-4） and IL-10 in serum immunoglobulin G antibody responses following mucosal or systemic reovirus infection[J]. Journal of Virology， 2004， 78 （7）：3352-3360.

[44]李欣，岳冬輝，畢巖. sIgA在黏膜免疫中的作用[J]. 河南中醫(yī)， 2015， 35 （12）：3212-3214.

[45]李成，尹莉莉，朱電鋒，等. 黨參多糖對仔豬小腸黏膜免疫功能的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2018，34（2）：347-355.

[46]楊海峰，陳曉蘭，邱樹磊，等. 不同中藥提取物的免疫調(diào)節(jié)作用比較[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，46（23）：158-162.

[47]梅林. 黏膜s-IgA免疫及其神經(jīng)調(diào)節(jié)[J]. 國外醫(yī)學(xué)（生理、病理科學(xué)與臨床分冊）， 2002， 22（2）：180-182.

[48]MANTIS N J， ROL N， CORTHSY B. Secretory IgAs complex roles in immunity and mucosal homeostasis in the gut[J]. Mucosal Immunology， 2011， 4 （6）：603-611.

[49]劉濤. 谷氨酰胺對早期斷奶仔豬腸道營養(yǎng)與免疫功能影響機(jī)理的研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2002.

[50]康磊，李文立，姜建陽，等. 谷氨酰胺對熱應(yīng)激肉雞s-IgA、血液內(nèi)毒素和細(xì)胞因子的影響[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2012， 32（4）： 609-614.

[51]馮奇. 日糧NDF水平對斷奶獺兔腸MUC1、MUC2與FASN表達(dá)的影響[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)， 2013.

[52]余晶儀，郝小燕，龍敏，等. MUC2基因表達(dá)對益生菌調(diào)節(jié)腸屏障作用的影響[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2013， 33（2）：197-201.

[53]陳國旺，黃大鵬. 谷氨酰胺對畜禽免疫及小腸黏膜基因的研究進(jìn)展[J]. 飼料研究， 2015（20）：5-8.

[54]WANG X， PIERRE J F， HENEGHAN A F， et al. Glutamine improves innate immunity and prevents bacterial enteroinvasion during parenteral nutrition[J]. Jpen Journal of Parenteral & Enteral Nutrition， 2014， 39 （6）：688-697.

[55]高玉琪，任戰(zhàn)軍，胡志剛，等. 日糧添加不同水平谷氨酰胺對幼齡獺兔免疫性能及回腸黏蛋白基因表達(dá)的影響[J]. 中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)， 2016， 36 （4）：110-115.

[56]邢深. 日糧添加丙氨酰谷氨酰胺對仔豬小腸黏膜屏障功能的影響[D].南京：南京農(nóng)業(yè)大學(xué)， 2016.

（責(zé)任編輯：張震林）