血清循環(huán)miR-145及miR-34a對老年高血壓性肥厚型心肌病患者的診斷價值

鞏亮 王曉春 姜順濤 楊光磊

(遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 1心內(nèi)科，貴州 遵義 563000；2綜合病房)

高血壓是全世界老年人面臨的共同健康威脅，與多種心血管不良事件相關(guān)〔1〕。一項大宗流行病學(xué)報告表明，2010年全球31.1%的成年人患有高血壓〔2〕。2019年我國慢性病疾控中心數(shù)據(jù)顯示，60歲以上人群高血壓患病率達58.3%，且隨年齡增長而升高〔3〕。高血壓會造成多種器官損害如高血壓性心臟病(HHD)、高血壓性腦病和高血壓腎病。高血壓能引起以心肌纖維化及心肌肥大為特征的心臟重塑，進而增加心力衰竭或猝死的風(fēng)險〔4〕。此外，心肌肥大還是腦卒中和冠心病的主要危險因素之一，HHD患者發(fā)生心血管事件的風(fēng)險是不伴心臟病患者的2～4倍〔5〕。因此，心肌肥大的早期篩查和診斷對于改善高血壓患者預(yù)后至關(guān)重要。診斷心肌肥大的方法包括心電圖、超聲心動圖、計算機斷層掃描和磁共振成像等，然而，這些技術(shù)難免存在敏感性和特異性低、診斷時間長和技術(shù)復(fù)雜等缺陷〔6～8〕，因此，需要開發(fā)更準確、更簡便的方法來檢測高血壓性心肌肥大。miRNA是一種小分子內(nèi)源性非編碼RNA，循環(huán)miRNA具有穩(wěn)定性好、含量豐富、提取檢測和定量相對方便等特點，可作為有效的臨床生物標志物使用。本文擬探討血清循環(huán)miR-145及miR-34a對老年高血壓性肥大型心肌病患者的診斷價值。

1 資料與方法

1.1研究對象 選取遵義醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)科2017年1月至2019年10月就診的高血壓患者82例，納入標準：①年齡65～80歲；②符合我國2018年高血壓防治指南提供的高血壓診斷標準：收縮壓≥140 mmHg和(或)舒張壓≥80 mmHg〔9〕。排除標準：①其他原因如先天或遺傳因素引起的心肌肥大；②嚴重肝腎損傷；③其他心臟病影響彩超判讀結(jié)果者；④惡性腫瘤者。根據(jù)心臟彩超結(jié)果將患者分為心肌肥大組和無心肌肥大組〔10〕。同時收集其臨床資料包括性別、年齡、體重指數(shù)(BMI)、血脂情況、糖尿病史、左心室重量指數(shù)、Cornell電壓。

1.2血樣采集及RNA抽提 所有患者采集5 ml外周血至含有乙二胺四乙酸(EDTA)的真空管中，分離血清并儲存在-80℃下，使用QIAGEN公司miRNasy Mini Kit試劑盒提取總RNA。使用Nanodrop 1000分光光度計對所有樣品進行定量。

1.3逆轉(zhuǎn)錄PCR使用EXIQON公司 miRNA逆轉(zhuǎn)錄及Mercury Universal cDNA合成試劑盒及Applied Biosystems公司的9700 PCR儀進行逆轉(zhuǎn)錄PCR反應(yīng)。

1.4MicroRNA實時定量PCR 使用Thermo Fisher公司TaqMan miRNA分析試劑盒及Applied Biosystems公司的9700 PCR儀進行實時定量PCR。通過Ct值，即熒光強度達到給定閾值時所需的循環(huán)數(shù)并計算2-ΔΔCt來定量microRNA的表達，并使用RNU6B作為內(nèi)參將表達量標準化。

1.5統(tǒng)計學(xué)方法 使用SPSS26.0及GraphPad Prism6.0軟件進行t檢驗、χ2檢驗、Logistic多元回歸模型分析，采用受試者工作特征(ROC)曲線分析miRNA的診斷效能。

2 結(jié) 果

2.1兩組基線資料比較 心肌肥大組收縮壓、高血壓病程、左心室重量指數(shù)、Cornell電壓顯著高于無心肌肥大組(P<0.01)。見表1。

表1 兩組基線資料比較

2.2兩組循環(huán)血清miR-145與miR-134a比較 與無心肌肥大組(1.27±0.20、13.98±1.37)相比，miR-145、miR-134a在心肌肥大組血清中的表達量(1.87±0.26、18.02±1.57)顯著上調(diào)(t=11.203、12.015，P<0.001)。

2.3miR-145與miR-34a對心肌肥大的診斷效能評估 miR-145與miR-34a對心肌肥大診斷的曲線下面積(AUC)分別為〔0.818(95%CI0.728～0.909),0.792(95%CI0.695～0.889)，P<0.001〕。見圖1。根據(jù)ROC曲線確定的miR-145和miR-34a最佳靈敏度和特異度下截斷值分別為1.80和15.73。miR-145對診斷心肌肥大的特異度、靈敏度、陰性預(yù)測值、陽性預(yù)測值及約登指數(shù)分別為91.0%、74.8%、92.3%、71.4%、0.66；miR-34a分別為81.8%、67.3%、84.6%、62.5%、0.49。

圖1 血清循環(huán)miR-145與miR-34a對區(qū)分心肌肥大的ROC曲線

2.4臨床指標及miRNA與心肌肥大的Logistic回歸分析 單因素Logistic回歸顯示收縮壓、高血壓病程、miR-145和miR-34a均與心肌肥大相關(guān)。進一步納入多因素Logistic回歸模型發(fā)現(xiàn)，四者與心肌肥大風(fēng)險的關(guān)系由高至低依次為收縮壓、高血壓病程、miR-145、miR-34a(P<0.01)。見表2。

表2 各因素與心肌肥大的logistic回歸分析

3 討 論

HHD的發(fā)病機制與心臟重構(gòu)有關(guān)，心臟重構(gòu)包括心肌纖維化和心肌肥大〔11〕。因此，多種藥物可以通過逆轉(zhuǎn)高血壓心臟重構(gòu)從而改善高血壓患者的預(yù)后。miRNA可以通過靶向mRNA使其降解或直接抑制翻譯過程來調(diào)控基因表達從而影響心臟的生理及病理過程，已有報道其在心臟疾病如冠心病、心肌炎中發(fā)揮重要作用〔12，13〕。楊坤等〔14〕對miR-21在心臟疾病中的作用作了綜述且指出其可能作為潛在的診斷及治療靶點，然而目前miRNA在HHD中的作用仍未得到充分研究。本研究發(fā)現(xiàn)miR-145及miR-34a在HHD患者血清中高表達，由此推測其可能作為HHD患者心肌肥厚的潛在診斷指標，因此設(shè)計了本課題。

血流動力學(xué)變化是引起心肌重構(gòu)的主要原因，且其效應(yīng)隨時間延長變得更為顯著，左心室重量指數(shù)及Cornell電壓分別為超聲及心電圖診斷心肌肥厚的重要標準，本研究結(jié)果說明所納入的對象心肌肥厚表型典型，具有良好的代表性。

Li等〔15〕報道m(xù)iR-145可通過NF-κB 信號通路加重慢性炎癥反應(yīng)從而使小鼠動脈粥樣硬化惡化，Yuan等〔16〕和Wang等〔17〕研究顯示，miR-145可通過CD40調(diào)控缺氧誘導(dǎo)的心肌細胞炎癥反應(yīng)使細胞凋亡。在高血壓方面，Liao等〔18〕發(fā)現(xiàn)miR-145參與了體力活動誘導(dǎo)的高血壓血管平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)換過程。miR-34a與心肌梗死關(guān)系及其抑制劑的治療作用已有報道，研究證實，心肌梗死后，miR-34a在心臟組織中高表達，而miR-34a的敲低可減少心肌細胞凋亡，改善患者預(yù)后〔19，20〕。Liu等〔21〕研究顯示，miR-34a在高血壓患者外周血中上調(diào)，且其上調(diào)可通過靶向TIGF2促進血管內(nèi)皮損傷。綜上，miR-34a不僅在高血壓患者血清中高表達，而且在高血壓性肥厚型心肌病中會進一步上調(diào)。

本研究發(fā)現(xiàn)miR-145與miR-34a對心肌肥大均有較好的診斷能力。本研究結(jié)果還說明，收縮壓每升高1 mmHg、高血壓病程每延長及1年、miR-145和miR-34a的表達每增高1個單位、心肌肥大的風(fēng)險依次增高1.54、1.44、1.28、1.19倍。

綜上，miR-145與miR-34a在老年高血壓性肥厚型心肌病患者血清中表達高于無心肌肥大患者，其表達升高與心肌肥大風(fēng)險有關(guān)，對于高血壓性心肌肥大有較好的診斷價值。