遠(yuǎn)志地上部位芒果苷和總皂苷含量測定研究

魏巍 劉雅晴 田盛 吳雪梅 王海波

【摘?要】?目的：建立遠(yuǎn)志地上部位的芒果苷和總皂苷含量測定方法，為遠(yuǎn)志非藥用資源開發(fā)提供支持。方法：采用HPLC液相色譜法、比色法分別對遠(yuǎn)志地上部位芒果苷及總皂苷進(jìn)行含量測定。結(jié)果：遠(yuǎn)志地上部位樣品總皂苷含量范圍是0.30～0.75 mg/g，芒果苷含量范圍是8.48～9.19 mg/g。結(jié)論：HPLC液相色譜法、比色法測定遠(yuǎn)志地上部位中的芒果苷和總皂苷含量的方法簡單、可靠。

【關(guān)鍵詞】?遠(yuǎn)志;總皂苷;芒果苷

【中圖分類號】R284.1?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A?【文章編號】1007-8517（2020）19-0039-04

Abstract：Objective To establish a method for the determination of Mangigerin and Total saponins in the above ground part of Radix Polygalae to provide support for the development of non-medicinal resources in Radix Polygalae. Methods The contents of mangiferin and total saponins were determined by HPLC and colorimetric method respectively.Results The total saponins content ranged from 0.30 to 0.75 mg/g， and the range of Mangiferin content was 8.48 to 9.19 mg/g.Conclusion The method determination of Mangiferin and total saponins in Radix Polygalae by HPLC and colorimetric method is simple and reliable.

Key?words：Radix Polygalae;Total Saponins;Mangiferin

中藥遠(yuǎn)志最早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，并被視為養(yǎng)命要藥，其性溫，味苦、辛，具有安神益智、祛痰、消腫的功效。其來源為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志Polygala tenuifolia Willd.和卵葉遠(yuǎn)志P.sibirica L.的干燥根[1]。從遠(yuǎn)志中可分離得到諸多活性成分，以三萜皂苷類、酮類和寡糖酯類為主要活性成分[2]，但其地上部位常常作為廢料丟棄。為更好利用遠(yuǎn)志藥材資源，進(jìn)一步考察遠(yuǎn)志主要藥效成分在其地上部位的分布及含量情況，對其地上部位花、莖、葉進(jìn)行了成分及含量測定分析。研究發(fā)現(xiàn)其地上部位含有芒果苷，是一種四羥基酮碳苷，屬雙苯吡酮類化合物。芒果苷具有抗病毒、抗癌、免疫調(diào)節(jié)、保肝利膽、止咳平喘等多種生物活性[3-5]。還可用于高血壓的治療，具有降壓及保護(hù)炎癥損傷等作用 [6]。為綜合利用遠(yuǎn)志植株資源，本研究采用HPLC液相色譜法、比色法，對遠(yuǎn)志地上部位的芒果苷及總皂苷含量進(jìn)行測定，為遠(yuǎn)志非藥用部分的開發(fā)利用提供參考。

1?材料與試劑

1.1?儀器?Agilent1100高效液相色譜儀（美國Agilent公司），RPL-D2000柱溫箱（大連日普利科技儀器有限公司），Cculab Alc-110.4分析天平（德國Sartorius 公司）、CP225D分析天平（德國Sartorius 公司）、TD2002C型電子天平（天津天馬衡基儀器有限公司）、U3010 紫外分光光度計（日本日立公司）、HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋（江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司）。

1.2?試劑與試藥?細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷對照品（批號：141027）、芒果苷對照品（批號：160228）購于成都克洛瑪生物科技有限公司，純度≥98.5%，甲醇（色譜純，天津市大茂化學(xué)試劑廠），乙腈（色譜純，天津市大茂化學(xué)試劑廠），水（純凈水，杭州娃哈哈集團(tuán)公司），鹽酸（分析純，西隴化工股份有限公司），磷酸（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司），甲醇、鹽酸（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠），遠(yuǎn)志地上部位樣品來源于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥用資源苗圃園（遼寧大連，二年期，11月份采收），見表1。經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)許亮教授、邸學(xué)高級實驗師鑒定，為遠(yuǎn)志科植物遠(yuǎn)志（P.tenuifolia Willd.）的地上部位。

2?方法與結(jié)果

2.1?HPLC測定芒果苷含量

2.1.1?色譜條件?色譜柱：Kromasil ODS色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：0.05%磷酸乙腈溶液（A）-0.05%磷酸水溶液（B），梯度洗脫：0～12 min： 10%～15%（A）， 25～32 min： 22%～45%（A），35 min：12%（A），柱溫：35 ℃，檢測波長：258 nm，流速1.0 mL/min;進(jìn)樣量：10 μL。色譜圖如圖1所示。

2.1.2?對照品溶液的制備?精密稱取芒果苷對照品適量，加甲醇配制成每1 mL含1.25 mg的對照品溶液，作為對照品儲備液備用。精密稱取對照品儲備液適量，加甲醇配制成每1 mL含0.1 mg的對照品溶液，備用。

2.1.3?供試品溶液的制備?取遠(yuǎn)志地上部位藥材樣品粉末0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%乙醇25 mL，超聲處理二次，每次25 min，濾過，合并濾液，減壓濃縮至5 mL左右，定量轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加50%乙醇定容至刻度。濾過，續(xù)濾液用微孔濾膜（0.45μm）過濾，即得。

2.1.4?線性范圍考察?分別精密吸取芒果苷對照品溶液2 μL、4 μL、6 μL、8 μL、10 μL、12 μL進(jìn)樣，以色譜峰面積Y對芒果苷對照品質(zhì)量X進(jìn)行回歸處理，得回歸方程為：Y=233.69X+33.60，r=0.9991。結(jié)果表明，芒果苷在0.2～1.2 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.5?精密度實驗?精密吸取芒果苷對照品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測得芒果苷色譜峰面積RSD值為2.0%，儀器精密度良好。

2.1.6?穩(wěn)定性實驗?精密吸取同一份遠(yuǎn)志地上部位供試品溶液，按“2.1.1”項下的色譜條件，分別于配制后的0、1、2、3、4、6、8、10?h進(jìn)樣分析，測得色譜峰面積的RSD值為2.4%。結(jié)果表明，供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.1.7?重現(xiàn)性實驗?按照“2.1.3”項下方法制備遠(yuǎn)志地上部位供試品溶液6份，按照“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，測得RSD值為2.4%。方法重現(xiàn)性良好。

2.1.8?加樣回收率實驗?采用加樣回收率法，精密稱取已知含量的同一份遠(yuǎn)志地上部位藥材0.05 g，置具塞瓶中，加入相當(dāng)量的芒果苷對照品儲備液。按照“2.1.3”項下方法制備供試品溶液，再按照“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)行測定，計算其加樣回收率。結(jié)果表明本品的平均回收率為104.6%，RSD為2.8%，符合相關(guān)規(guī)定。

2.1.9?樣品含量測定，按“2.1.1”項下色譜條件測定6批樣品，結(jié)果見表2。

2.2?比色法測定總皂苷含量

2.2.1?對照品溶液的制備?精密稱定細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷對照品適量，加甲醇配制成每1 mL含0.01 mg的對照品溶液，備用。

2.2.2?樣品測定?精密吸取對照品溶液及供試品溶液適量于試管中，再精密加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，密塞，60℃水浴加熱15 min，取出，冷卻5 min，加入5 mL冰醋酸稀釋，搖勻，靜置15 min，576 nm處測定吸光度。

2.2.3?供試品溶液的制備?取遠(yuǎn)志地上部位樣品0.1 g，精密稱定，置具塞試管中，精密加入75%乙醇5 mL，超聲處理50 min，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，備用。

2.2.4?測定波長的選擇?精密吸取對照品溶液及供試品溶液適量，以相應(yīng)試劑為空白溶液;按“2.2.2”項下測定方法，于400～800 nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果表明，對照品與供試品在576 nm處有最大吸收，故選擇576 nm為測定波長。

2.2.5?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制?分別精密吸取細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷對照品溶液5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、30 μL、40 μL，按“2.2.2”項下測定方法進(jìn)行測定，以吸光度Y對細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷對照品質(zhì)量X進(jìn)行回歸處理，得回歸方程為：Y=0.0151X-0.0947，r=0.9896。結(jié)果表明，細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷在0.05～0.4 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.6?總皂苷含量測定結(jié)果?按“2.2.2”項下測定方法測定6批樣品，結(jié)果見表3。

3?結(jié)論與討論

3.1?色譜條件的優(yōu)化?芒果苷為多羥基酚類化合物，在色譜柱中拖尾嚴(yán)重，但在流動相中加入酸可以明顯減輕該現(xiàn)象，經(jīng)優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)使用0.05% 磷酸溶液作為水相時能夠較好地抑制芒果苷拖尾現(xiàn)象并提高了檢測的靈敏度。此外，本實驗采用了含磷酸乙腈—水溶液梯度洗脫，操作簡便，能夠?qū)崿F(xiàn)遠(yuǎn)志地上部分的快速檢測。在該色譜條件下，芒果苷出峰時間為15 min，測定方法簡便、快速。經(jīng)比較258 nm、320 nm兩個吸收波長，發(fā)現(xiàn)258 nm處有較強(qiáng)的紫外吸收，且峰形較好，基線平穩(wěn)，分離度較高，故選擇258 nm作為檢測波長。

3.2?遠(yuǎn)志地上部位利用?遠(yuǎn)志在安神益智、交通心腎上的功效良好，臨床應(yīng)用十分廣泛，但隨著遠(yuǎn)志需求量日益增加及野生資源日益減少，遠(yuǎn)志在市場中的供需矛盾日益顯現(xiàn)。且栽培遠(yuǎn)志因栽培期長，產(chǎn)量不大，價格較高，極大影響了遠(yuǎn)志成分及提取物的提取生產(chǎn)。而遠(yuǎn)志根莖入藥用，地上部位常被丟棄。遠(yuǎn)志地上部位來源廣，價格便宜，尚未得到充分的利用。因此，遠(yuǎn)志地上部位的開發(fā)逐漸受到關(guān)注。本研究結(jié)果顯示，遠(yuǎn)志的地上部位含有的芒果苷及總皂苷成分，平均含量分別為8.74 mg/g和0.53 mg/g。以芒果苷開發(fā)為例，其降血糖、抗炎、抗動脈粥樣硬化、抗癌等作用，在臨床上可用于糖尿病、急性支氣管炎、癌癥等疾病的預(yù)防與治療，抗氧化作用則可用于抗衰老的保健品或護(hù)膚品的研究開發(fā)。皂苷類成分是遠(yuǎn)志主要活性成分，在祛痰鎮(zhèn)咳、保護(hù)神經(jīng)元、改善學(xué)習(xí)記憶以及保護(hù)心腦血管等方具有良好的藥理活性。以細(xì)葉遠(yuǎn)志皂苷為例，其在實驗中被證實可通過抗Aβ沉積、抗Tau蛋白磷酸化、抑制炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生等生理活性達(dá)到抗癡呆及神經(jīng)保護(hù)方面的作用，具有良好的應(yīng)用前景[7-8]。藥用植物資源的綜合利用也已成為中藥資源可持續(xù)發(fā)展的趨勢，對遠(yuǎn)志地上部位的藥用成分含量研究，能夠為更好的綜合利用遠(yuǎn)志藥材資源提供研究支持。

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（收稿日期：2020-05-09?編輯：劉?斌）