嗅素結構域家族蛋白4在類風濕性關節(jié)炎的表達及其臨床意義

王茹，趙瑞婧，范亞莉，宋雅楠，張東升，王鴿，劉旭靜，王玉環(huán)

作者單位：1西安交通大學醫(yī)學部，陜西 西安710061；2西安交通大學醫(yī)學院附屬中心醫(yī)院呼吸科，陜西 西安710003；3延安大學醫(yī)學院，陜西 延安716000；4西安交通大學第二附屬醫(yī)院內分泌科，陜西 西安710004；5延安大學咸陽醫(yī)院心內科，陜西 西安712000

類風濕性關節(jié)炎（rheumatoid arthritis，RA）是一 種以對稱性多關節(jié)炎為主要臨床表現(xiàn)的全身性、慢性、自身免疫性疾病。目前，其發(fā)病機制仍有待進一步明確。該病為一種常見的自身免疫性疾病，我國RA的患病率為32%～36%［1］。RA病人的預后在很大程度上是由疾病活動性決定的。

人類嗅素結構域家族蛋白4（olfcctomedin4，OLFM4）屬于olfcctomedin家族相關成員，是一種糖蛋白，可正常表達于人的多種組織及器官。其在腫瘤組織中表達具有特異性，在胰腺癌、宮頸癌、結腸癌、胃癌等中均為高表達。其與消化系統(tǒng)腫瘤的關系成為近年研究的熱點［2］。而本研究則通過檢測OLFM4在RA關節(jié)滑膜組織中的表達，探討其與人類風濕關節(jié)炎的臨床病理關系。

1 資料與方法

1.1一般資料收集2017年10月至2018年10月期間就診于西安市紅會醫(yī)院的13例確診RA病人滑膜組織存檔蠟塊。其中，男性5例，女性8例；年齡范圍為36～63歲，平均年齡55歲。所選病人均符合2010年美國風濕病學會（ACR）/歐洲抗風濕聯(lián)盟（EULAR）修訂的RA分類診斷標準。另選取14例骨關節(jié)炎病人作為對照。標本經(jīng)10%中性甲醛固定、常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片厚5μm。本研究符合《世界醫(yī)學協(xié)會赫爾辛基宣言》相關要求，病人或近親屬對研究方案簽署知情同意書。

1.2方法采用SP法檢測OLFM4，一抗工作濃度1∶500，HRP-DAB顯色，操作嚴格按照免疫組化試劑使用說明書進行。免疫組化試劑盒購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司，HRP-DAB顯色劑、兔抗OLFM4抗體（NBP2-24535）均購自美國羅福斯生物制劑公司。

1.3結果判斷標準OLFM4陽性表達定位于細胞質，染色為棕黃色［3］。隨機選取3個高倍鏡（40×）視野。染色強度分4級：無色為0分、淺黃色為1分、棕黃色為2分、黃褐色為3分。判斷0分為陰性，1分為弱陽性，2分為陽性，3分為強陽性。

1.4統(tǒng)計學方法OLFM4在RA病人及骨關節(jié)炎病人滑膜組織表達，OLFM4與RA臨床病理關系比較均采用χ2檢驗，統(tǒng)計分析由SPSS 18.0軟件完成，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 OLFM4在骨關節(jié)炎、RA病人滑膜組織中的表達情況在骨關節(jié)炎病人滑膜組織中OLFM4細胞質及細胞核均未出現(xiàn)明顯的棕黃色或棕褐色顆粒，鏡下視野呈陰性表達（見圖1），而在RA病人中OLFM4表達時，陽性表達定位于細胞質，染色為棕黃色（見圖2）。14例骨關節(jié)炎病人滑膜組織中，OLFM4陽性表達1例（7.14%），其中弱陽性1例（7.14%），陰性表達13例（92.86%）；13例RA病人滑膜組織中，OLFM4陽性表達10例（76.92%），其中強陽性5例（38.46%），弱陽性5例（38.46%），陰性表達3例（23.08%），OLFM4在RA病人滑膜組織中的陽性表達高于骨關節(jié)炎病人（χ2＝13.595，P＝0.012）。

2.2 OLFM4表達與類風濕性關節(jié)炎病人臨床病理的關系13例類風濕性關節(jié)炎滑膜組織標本中OLFM4表達與病人類風濕因子表達有關（P＜0.05），但與病人性別、年齡、ESR、CRP、及抗環(huán)瓜氨酸肽（CCP）抗體并不具有明顯的相關性（P＞0.05），見表1。

表1 OLFM4的表達與類風濕性關節(jié)炎病人臨床病理參數(shù)的關系/例

3 討論

RA對女性的影響較男性多3倍以上，于各年齡層次均可發(fā)病，但患病者年齡多集中于40～60歲之間。RA的早期臨床表現(xiàn)為關節(jié)腫脹及疼痛，人們往往可于體檢時發(fā)現(xiàn)，因此快速準確地轉診到風濕病專科對于早期緩解疼痛癥狀和預防或減少殘疾至關重要［4］。近年來，針對該疾病的相關研究不斷深入，但仍尚無特異性的臨床診斷方法［5］。因此，如何能夠早期、迅速，且特異性的確診RA是我們所迫切需要解決的問題。

OLFM4，又稱為 hOLfD［6］、GW112［7］，OLFM4 是olfcctomedin家族成員之一，該家族成員總數(shù)超過100多種，可分為7個亞族，因為都具有由一個250個氨基酸構成的C-末端序列，故被叫做“olfcctomedin結構域”。在細胞增殖、黏附和周期調節(jié)、神經(jīng)發(fā)育及腫瘤發(fā)生、發(fā)展中均發(fā)揮著非常重要的作用［6］，OLFM4最初發(fā)現(xiàn)于人的結腸炎黏膜隱窩上皮細，它位于人類第13號染色體q14.3，含有5個外顯子，跨度為23 000 bp，大小在156～801 bp，內含子大小在980～7 400 bp［2］。OLFM4 在許多癌癥腫瘤細胞中已被證明有著密切的相關性，如胃癌［8］、胰腺癌［9-10］、結直腸癌［11］、非小細胞肺癌［12］等，其更是結直腸癌不同階段的定量蛋白質組學方法中新的非轉移性腫瘤標記物［13］。同時，其對于小腸干細胞分化也有一定的作用［14-15］。此外，其參與人髓系細胞白血病細胞的生長、分化、凋亡等過程［16-17］。但OLFM4在自身免疫性疾病特別是RA分子研究方面仍較為新穎，以往少見報道。本課題組通過檢測OLFM4在RA病人滑膜組織中的表達，旨在研究其表達是否會與RA的發(fā)病有關。進一步的研究分析發(fā)現(xiàn)，RA病人滑膜組織OLFM4水平與部分臨床病理學參數(shù)有關［17］，如病人RF是否異常，提示OLFM4在RA的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮相關作用。

本研究嚴格按照實驗規(guī)范執(zhí)行，但仍可能存在以下幾方面的局限：首先，納入研究的病人數(shù)較少，故而可能會導致匯總結果偏高。其次，同樣由于研究對象數(shù)量較少，導致本研究未能分析OLFM4表達與病人預后之間的關系。再次，研究結果可見OLFM4在骨關節(jié)炎病人的滑膜組織表達幾乎均為陰性。因此，仍需更大量、更多樣本、更高質量的研究來科學、客觀、全面的評價OLFM4在診斷RA方面的價值。

通過以上的實驗，我們可以看到OLFM4在確診為RA病人的滑膜組織中的表達與骨關節(jié)炎病人滑膜組織表達差異有統(tǒng)計學意義。提議對疑似RA的成人進行OLFM4表達檢測?？傊?，OLFM4在提示RA的病情發(fā)展中具有重要作用，可為RA及骨關節(jié)炎的早期檢測、診斷、治療、預防提供新的靶點和分子標志物。

（本文圖1，2見插圖12-1）