漿膜腔積液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)中國(guó)專(zhuān)家共識(shí)（2020）

吳 茅，周道銀，許紹強(qiáng)，張時(shí)民，樊愛(ài)琳，黃道連，高建軍，段愛(ài)軍，朱鳳嬌，趙成艷，高菊興君安醫(yī)學(xué)細(xì)胞平臺(tái)專(zhuān)家委員會(huì) 組 稿 閆立志，劉超群 執(zhí) 筆

參加共識(shí)討論的專(zhuān)家（按姓氏拼音排序）：

柏世玉1， 曹 科2， 竇心靈3， 丁邦勝4， 段愛(ài)軍5， 樊愛(ài)琳6， 高菊興7， 顧劍飛8， 高建軍9， 高海燕10，何 勇11， 黃 俊12， 黃道連13，胡 晶14，蔣錦文15，金 鑫16，盧興國(guó)17，李相磊18，劉超群19，梁 勤20，林慧君21，繆 峰22，潘 巍23，茹進(jìn)偉24，孫宏華25，吳 茅26，王敏敏27，王 哲28，許紹強(qiáng)29，夏萬(wàn)寶30，邢銘芬31，許銀懷32，岳保紅33，閆立志34，張軍格35，張時(shí)民36，張建富37，張春瑩38，曾強(qiáng)武39，趙成艷40，朱鳳嬌41，莊順紅42，周玉利43，周道銀44，周 麟45，鄭智弦46，鄭 瑞47

（1.山東省泰安市中心醫(yī)院，山東泰安 271000； 2.深圳市兒童醫(yī)院，廣東深圳 518026；3.酒泉市人民醫(yī)院，甘肅酒泉 735000；4.安徽省立醫(yī)院，合肥 230001；5.河南信合醫(yī)院，河南信陽(yáng) 465200；6.空軍軍醫(yī)大學(xué)附屬西京醫(yī)院，西安 710032；7.臨沂市人民醫(yī)院，山東臨沂 276002；8.復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院，上海 200040；9.邯鄲市第一醫(yī)院，河北邯鄲 056002；10.哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，哈爾濱 150001；11.湖南保靖縣人民醫(yī)院，湖南保靖 416500；12.成都市第三人民醫(yī)院，成都 610031；13.南方醫(yī)科大學(xué)附屬中山市博愛(ài)醫(yī)院，廣東中山 528400；14.重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院，重慶 400016；15.東陽(yáng)市人民醫(yī)院，浙江東陽(yáng) 322100；16.浙江省立同德醫(yī)院， 杭州 310012；17.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院，杭州 310009；18.開(kāi)封市中心醫(yī)院，河南開(kāi)封 475000；19. 浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬金華中醫(yī)院，浙江金華321017； 20.甘肅省中醫(yī)院，蘭州 730050；21.浙江省人民醫(yī)院，杭州 310014；22.原山東省寄生蟲(chóng)病防治研究所，山東濟(jì)寧 272000；23.海鹽縣人民醫(yī)院，浙江海鹽 314300；24.樂(lè)昌市人民醫(yī)院，廣東樂(lè)昌 512200； 25.中山大學(xué)附屬第七醫(yī)院，廣東深圳 518000；26.浙江省人民醫(yī)院，杭州 310014；27.杭州市第一人民醫(yī)院，杭州 310006；28.保定第一醫(yī)院，河北保定 071000；29.廣東三九腦科醫(yī)院，廣州 510510；30.上海市松江區(qū)中心醫(yī)院，上海 201600；31.湖州市南潯區(qū)人民醫(yī)院，浙江湖州 313009；32.濮陽(yáng)市疾病預(yù)防控制中心，河南濮陽(yáng) 457000；33.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院，鄭州 450052；34.內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院，內(nèi)蒙古包頭 014010；35.象山縣紅十字臺(tái)胞醫(yī)院，浙江象山 315731；36.北京協(xié)和醫(yī)院，北京 100730；37.江蘇省人民醫(yī)院，南京 210029；38.四川大學(xué)華西醫(yī)院，成都 610041；39.貴州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，貴陽(yáng) 550001；40.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第二醫(yī)院，遼寧大連 116000；41.浙大一院三門(mén)灣分院，浙江三門(mén) 317100；42.金華市中心醫(yī)院，浙江金華 321000；43.杭州市第一人民醫(yī)院，杭州 310006；44.上海長(zhǎng)海醫(yī)院，上海 200433； 45.諸暨市中醫(yī)醫(yī)院，浙江諸暨 311800；46.梧州市紅十字會(huì)醫(yī)院，廣西梧州 543000；47.浙江省臺(tái)州醫(yī)院，浙江臨海317000 ）

漿膜腔積液是指在疾病情況下，胸腔、腹腔、心包腔及睪丸鞘膜腔內(nèi)積聚過(guò)多液體的總稱(chēng)。漿膜腔積液常規(guī)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)與影像學(xué)、病理液基等技術(shù)一樣有著重要的臨床意義，能夠?yàn)榕R床提供及時(shí)的、有效的、全面的診療依據(jù)，受到臨床醫(yī)生的廣泛重視。目前漿膜腔積液常規(guī)細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)在國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室發(fā)展不均衡，操作不規(guī)范，報(bào)告格式及診斷標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一[1-2]，君安醫(yī)學(xué)細(xì)胞平臺(tái)為進(jìn)一步推廣漿膜腔積液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查，使其操作規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，經(jīng)全國(guó)多位從事該領(lǐng)域研究的專(zhuān)家共同商討，根據(jù)國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室發(fā)展情況，并參考國(guó)內(nèi)外大量文獻(xiàn)，制定出漿膜腔積液細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢驗(yàn)與診斷技術(shù)共識(shí)。

1 檢驗(yàn)?zāi)康?/h2>

計(jì)數(shù)漿膜腔積液中細(xì)胞數(shù)量及各類(lèi)有核細(xì)胞所占百分比，準(zhǔn)確識(shí)別各類(lèi)細(xì)胞、寄生蟲(chóng)、結(jié)晶等有形成分，發(fā)現(xiàn)細(xì)菌和真菌，為疾病的診斷、鑒別診斷、治療效果和預(yù)后評(píng)估提供檢驗(yàn)依據(jù)[3-4]。

2 標(biāo)本采集[5]

2.1 標(biāo)本容器 漿膜腔積液由臨床醫(yī)生采集，建議使用標(biāo)本專(zhuān)用管（有蓋、帶刻度、EDTA-K2抗凝劑），采集后加蓋，顛倒混勻3 ～5 次，立即送檢。

2.2 標(biāo)本量 標(biāo)本留取量至少8 ～10ml，有形成分較少時(shí)可留取50ml 標(biāo)本或多管送檢。

2.3 標(biāo)本標(biāo)識(shí) 標(biāo)本留取后需要做唯一標(biāo)識(shí)（推薦使用條碼標(biāo)簽），至少包括患者姓名、住院號(hào)或門(mén)診號(hào)及標(biāo)本類(lèi)型。

3 標(biāo)本運(yùn)送與接收

3.1 標(biāo)本的運(yùn)送 標(biāo)本采集后2h 內(nèi)由專(zhuān)人送檢，注意生物安全防護(hù)，避免溢出。

3.2 標(biāo)本的接收 標(biāo)本由檢驗(yàn)科工作人員接收，核對(duì)標(biāo)本信息、標(biāo)本種類(lèi)、標(biāo)本留取時(shí)間，觀察標(biāo)本量是否符合要求，觀察標(biāo)本顏色、性狀，以及其它特殊要求是否滿(mǎn)足；對(duì)于不合格標(biāo)本，執(zhí)行標(biāo)本拒收程序或讓步檢驗(yàn)。

標(biāo)本離心前，若手工計(jì)數(shù)細(xì)胞參照臨床體液檢驗(yàn)技術(shù)要求WS/T 662-2020 施行[6]；儀器計(jì)數(shù)參照自動(dòng)化體液分析模式操作要求施行。

4 標(biāo)本處理

接收后的標(biāo)本要及時(shí)處理，避免細(xì)胞及其它有形成分破壞，相對(duì)離心力400g，離心時(shí)間5～10 min；對(duì)離心效果不理想的標(biāo)本，可以先用吸管吸出大部分上清液后再次離心，以達(dá)到高度濃縮目的；對(duì)于血性標(biāo)本，離心后可以吸取“白膜”層，混勻后再次離心；未能及時(shí)處理的標(biāo)本應(yīng)放在2～8℃冰箱中儲(chǔ)存，不超過(guò)48h。

5 制片

5.1 制片要求 推片為首選方法，要求片膜的頭、體、尾層次清晰，薄厚適度；有核細(xì)胞數(shù)量較少時(shí)，可制作2 張無(wú)尾片，以提高陽(yáng)性率。

5.2 制片方法 將離心后的標(biāo)本管緩慢拿出，避免顛倒或晃動(dòng)，用一次性塑料吸管緩慢吸出上清液，靠近底部沉淀時(shí)可用加樣器吸取多余上清液，如底部沉淀量多或比較黏稠，可適當(dāng)增加上清液殘留量。將底部沉渣混勻，取大約10μl 標(biāo)本滴加在載玻片一端，用推片向另一端推制成約2 ～4cm 長(zhǎng)度的涂片，推片角度30°～ 45°，推片時(shí)根據(jù)沉渣的濁度或黏稠度調(diào)整推片角度和速度，濁度或黏稠度較大時(shí)，適當(dāng)降低推片角度和速度；濁度或黏稠度較小時(shí)，適當(dāng)增加推片角度和速度。注意多份標(biāo)本制片時(shí)，推片不能重復(fù)使用或清洗后使用，避免交叉污染。

注：細(xì)胞較少時(shí)，可以使用細(xì)胞涂片離心機(jī)制片。

5.3 制片數(shù)量 建議制片數(shù)量3 ～5 張；如果加做其它染色法，根據(jù)標(biāo)本量的多少增加制片數(shù)量，制片結(jié)束后，在玻片上注明編號(hào)、患者姓名、日期、標(biāo)本種類(lèi)。

6 染色

6.1 常用的染色方法有瑞-姬染色或瑞氏染色，根據(jù)鑒別需要加選其它染色。

6.2 染色時(shí)將自然干燥的涂片水平放置在染片架上進(jìn)行染色（方法同血涂片），按照瑞-姬染色標(biāo)本操作程序染色，染色時(shí)間5 ～10 min，特殊標(biāo)本可以鏡下觀察染色效果。

6.3 染好的涂片用流水緩慢沖洗，沖洗時(shí)應(yīng)注意將涂片水平放置在水龍頭下小水沖洗，盡量減少染料沉渣沉積，避免流水直接沖洗片膜，將沖洗后的涂片片尾朝上，自然晾干。

7 閱片與細(xì)胞分類(lèi)

7.1 閱片 先用低倍鏡瀏覽片尾，必要時(shí)瀏覽全片。了解有無(wú)體積較大的細(xì)胞或成堆細(xì)胞，觀察細(xì)胞分布與排列，發(fā)現(xiàn)其它有價(jià)值的有形成分，再用油鏡對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)。

7.2 細(xì)胞分類(lèi) 在涂片染色較好、細(xì)胞分布均勻的部位，以“弓”字從片尾到中間的順序分類(lèi)計(jì)數(shù)100 ～200 個(gè)有核細(xì)胞，分類(lèi)結(jié)果以百分比形式報(bào)告。

7.3 涂片保存 發(fā)出報(bào)告后，對(duì)涂片進(jìn)行分類(lèi)歸檔，妥善保管，保存時(shí)限按各實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行處置，一般保存3 ～5年。

8 報(bào)告

有條件的單位推薦出具圖文報(bào)告，報(bào)告包括常規(guī)和細(xì)胞學(xué)兩個(gè)部分。對(duì)化膿性炎癥、消化道穿孔、結(jié)核性及惡性腫瘤細(xì)胞的標(biāo)本，可先電話(huà)通知臨床醫(yī)生，再出具正式報(bào)告[7]。

8.1 常規(guī)部分 包括顏色、透明度、李凡他試驗(yàn)、細(xì)胞總數(shù)、有核細(xì)胞計(jì)數(shù)及細(xì)胞分類(lèi)計(jì)數(shù)百分比等。

8.2 細(xì)胞學(xué)部分 包括圖像、形態(tài)學(xué)描述、異常細(xì)胞的分級(jí)報(bào)告、提示或建議等。同時(shí)報(bào)告其它有形成分，如細(xì)菌、真菌、包涵體、寄生蟲(chóng)、結(jié)晶、脂肪滴及其它有價(jià)值的形態(tài)信息。

8.2.1 圖像：用圖像采集系統(tǒng)在鏡下選擇涂片細(xì)胞分布均勻，染色良好的部位，對(duì)診斷有價(jià)值的細(xì)胞或有形成分進(jìn)行拍攝，選擇有代表性的圖片。

8.2.2 形態(tài)學(xué)描述：對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行必要的形態(tài)描述，包括細(xì)胞分布、細(xì)胞大小、胞質(zhì)量、胞質(zhì)內(nèi)容物、胞質(zhì)著色、核大小、核形、核染色質(zhì)排列、核仁數(shù)量與大小等。對(duì)其它異常細(xì)胞或有形成分進(jìn)行必要的形態(tài)學(xué)描述。

8.2.3 異常細(xì)胞的分級(jí)報(bào)告：未查見(jiàn)惡性細(xì)胞、查見(jiàn)核異質(zhì)細(xì)胞、查見(jiàn)可疑惡性細(xì)胞、查見(jiàn)惡性細(xì)胞。如果能夠確定上皮源性的惡性細(xì)胞則報(bào)告癌細(xì)胞；如果能夠確定是造血淋巴組織惡性細(xì)胞則報(bào)告為白血病細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞；如果不能確定來(lái)源時(shí)，一律報(bào)告惡性細(xì)胞。

8.2.4 提示和建議：根據(jù)細(xì)胞數(shù)量、種類(lèi)，以及形態(tài)學(xué)變化，結(jié)合臨床資料，向臨床提供合理性提示或建議。

9 生物安全與防護(hù)

9.1 標(biāo)本的采集、運(yùn)送必須符合生物安全要求，防止溢出。如標(biāo)本溢出后，應(yīng)立即對(duì)污染的環(huán)境和設(shè)備進(jìn)行消毒處理。

9.2 檢驗(yàn)人員在處理標(biāo)本時(shí)，需做好個(gè)人防護(hù)，嚴(yán)格執(zhí)行生物安全管理程序，對(duì)有明確傳染性的標(biāo)本按級(jí)別進(jìn)行防護(hù)。

9.3 廢棄標(biāo)本及其它相關(guān)的廢棄物，嚴(yán)格執(zhí)行醫(yī)療廢物處理流程。

10 臨床意義[8-9]

10.1 非腫瘤性有核細(xì)胞

10.1.1 檢出中性粒細(xì)胞，比例及數(shù)量增多，提示急性炎癥；并發(fā)壞死顆粒及細(xì)胞碎片出現(xiàn)，提示化膿性炎癥可能。

10.1.2 檢出淋巴細(xì)胞，多見(jiàn)于漏出性積液，也可見(jiàn)于病毒感染、腫瘤或淋巴瘤等疾?。蝗袅馨图?xì)胞比例及數(shù)量明顯增多，考慮結(jié)核性積液可能。

10.1.3 檢出嗜酸性粒細(xì)胞，比例及數(shù)量增多，提示氣胸、血胸、過(guò)敏性疾病或寄生蟲(chóng)感染可能，也偶見(jiàn)于腫瘤或結(jié)核性積液中。

10.1.4 檢出嗜堿性粒細(xì)胞，比例及數(shù)量增多，提示存在變態(tài)反應(yīng)性疾病。

10.1.5 檢出巨噬細(xì)胞，且比例及數(shù)量增多，提示慢性非特異性炎癥、急性炎癥恢復(fù)期；此外，也可見(jiàn)于腫瘤、病毒或寄生蟲(chóng)感染等。

10.1.6 檢出漿細(xì)胞，少量與免疫反應(yīng)有關(guān)；若伴有形態(tài)異常和數(shù)量增多，提示漿細(xì)胞白血病、多發(fā)性骨髓瘤可能。

10.1.7 檢出退化間皮細(xì)胞，提示間皮細(xì)胞在積液中存在較長(zhǎng)時(shí)間或有害因素?fù)p傷。

10.1.8 檢出核異質(zhì)間皮細(xì)胞或間皮細(xì)胞不典型增生，提示漿膜受損、慢性炎癥、水腫或有害因素?fù)p傷間皮細(xì)胞；中、高度核異質(zhì)細(xì)胞不排除腫瘤細(xì)胞可能。

10.1.9 檢出巨核細(xì)胞，提示髓外造血或外傷可能，需結(jié)合臨床及其它相關(guān)檢查。

10.1.10 檢出含鐵血黃素細(xì)胞（結(jié)合鐵染色），提示漿膜腔陳舊性出血。

10.1.11 檢出狼瘡細(xì)胞，提示系統(tǒng)性紅斑狼瘡或其它免疫性疾病可能。

10.1.12 檢出鱗狀上皮等外源性細(xì)胞，提示空腔臟器穿孔或術(shù)后瘺道可能，需要結(jié)合其它有形成分綜合分析。

10.2 腫瘤細(xì)胞

10.2.1 檢出可疑惡性間皮瘤細(xì)胞，提示漿膜腔原發(fā)性惡性腫瘤，建議結(jié)合免疫組化及其它檢查進(jìn)一步明確。

10.2.2 檢出腺癌細(xì)胞、鱗狀上皮癌細(xì)胞、未分化（或低分化）癌細(xì)胞、小細(xì)胞癌、骨髓瘤細(xì)胞、神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞、惡性黑色素瘤細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞，提示腫瘤細(xì)胞漿膜腔轉(zhuǎn)移，建議結(jié)合免疫組化及組織病理學(xué)進(jìn)一步明確。

10.2.3 檢出造血淋巴組織系統(tǒng)原始細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞，則提示白血病細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞侵犯漿膜腔，需結(jié)合病史。

10.3 其它有形成分

10.3.1 檢出結(jié)晶類(lèi)：膽固醇結(jié)晶提示囊性、包裹性積液；檢出膽紅素結(jié)晶并發(fā)脂肪滴、細(xì)菌或真菌、鱗狀上皮細(xì)胞等，提示空腔臟器穿孔；檢出橙色血質(zhì)結(jié)晶（血晶），提示漿膜腔陳舊性出血。

10.3.2 檢出細(xì)菌及真菌，提示漿膜腔細(xì)菌或真菌感染（需排除污染）。

10.3.3 檢出寄生蟲(chóng)，提示寄生蟲(chóng)感染。

10.3.4 檢出花粉或植物細(xì)胞，提示空腔臟器穿孔（需排除污染）。