新生兒壞死性小腸結腸炎患者血清IL-12及IL-17水平檢測及臨床意義

陳小冰，張雪梅，陳求凝，謝邦貴，盧玉朱（三亞中心醫(yī)院新生兒科，海南三亞 572000）

壞死性小腸結腸炎（necrotizing enterocolitis,NEC）是一種常見于新生兒的急性腸道炎癥性疾病，其病情進展迅速，預后較差，治療時間長，嚴重時可出現(xiàn)感染性休克、多系統(tǒng)器官功能衰竭，病死率高達20%～30%[1]。早期發(fā)現(xiàn)新生兒NEC，并進行及時、有效的臨床治療，對改善NEC 患兒的預后具有重要意義。目前，新生兒NEC 的病因及具體發(fā)病機制尚未完全明確，且新生兒NEC 的早期癥狀多不典型，容易漏診或誤診。因此，探尋新生兒NEC 診斷及病情評估的生物學指標是研究熱點。近期的研究表明，促炎因子白細胞介素-12（interleukin-12, IL-12）及白細胞介素-17（interleukin-17，IL-17）通過促進各種炎癥因子的轉錄，啟動炎癥級聯(lián)反應，參與NEC 發(fā)病過程[2-3]。本研究通過觀察NEC 患兒血清IL-12 及IL-17 水平變化，分析其對新生兒NEC 診斷及病情評估的價值，為新生兒NEC 的診療提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選取2015年1月～2018年12月三亞中心醫(yī)院收治的足月新生兒 NEC 80 例作為病例組，其中男性52 例，女性28 例，胎齡37 ～40周，平均胎齡37.80±1.40 周。納入標準：①NEC的診斷符合《實用新生兒學》（4 版）標準[4]，且為足月新生兒；②存在腸道癥狀和體征，全身癥狀和體征，腹部 X 線平片顯示腸充氣或功能性梗阻，腸脹氣腸壁囊樣積氣體。排除標準：①非足月新生兒，低或極低出生體重兒；②并發(fā)其他消化系統(tǒng)疾病及感染性疾病者。另選取同期非消化系統(tǒng)疾病、非感染性疾病的健康足月新生兒65例作為對照組，其中男性44 例，女性21 例，胎齡37 ～41 周，平均胎齡38.30±1.60 周。兩組年齡、性別及胎齡等基本資料比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

1.2 方法 根據修正Bell 分期[4]，將80 例NEC患兒分為Ⅰ期31 例：主要表現(xiàn)為全身非特異性癥狀及胃腸道表現(xiàn)，腹部X 線檢查表現(xiàn)為腸間隙增寬，腸壁增厚，無腸壁積氣；Ⅱ期37 例：除Ⅰ期癥狀外還可表現(xiàn)為腸鳴音消失及腹痛加重，X 線可出現(xiàn)腸擴張，腸梗阻，腸壁積氣征或伴門靜脈積氣；Ⅲ期12 例：全身進行性惡化（如心動過緩，嚴重呼吸暫停，酸中毒，彌散性血管內凝血等），多有腹膜炎體征，X線常提示腸穿孔。對照組于出生3天后，病例組于治療前采集空腹靜脈血3 ml 置于未加抗凝劑的離心管中,置37℃水浴箱30min 后，以離心半徑13.5cm，3 500r/min 離心10min，分離血清保存于-80℃低溫，待檢。IL-12 及IL-17 采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測，試劑盒由上海科新生物技術股份有限公司提供。

1.3 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件分析，計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，方差分析多組間均數(shù)，采用成組t 檢驗進行兩組間比較；計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗。血清IL-12 及IL-17水平對新生兒NEC 的診斷價值應用受試者工作特征（receiver operating characteristic，ROC）曲線進行分析，曲線下面積（area under cure，AUC）比較采用Z 檢驗。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 病例組和對照組血清IL-12，IL-17，白細胞計數(shù)及血小板比較 見表1。病例組血清IL-12 及IL-17 水平明顯高于對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。兩組白細胞及血小板計數(shù)比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表1 病例組和對照組血清IL-12，IL-17，白細胞及血小板計數(shù)比較（±s）

表1 病例組和對照組血清IL-12，IL-17，白細胞及血小板計數(shù)比較（±s）

項目 對照組(n=65) 病例組(n=80) t P IL-12（ng/L） 20.62±5.83 63.80±10.27 12.640 ＜0.001 IL-17（ng/L） 6.35±2.28 22.73±6.50 9.752 ＜0.001白細胞（×109/L） 8.62±2.35 9.30±3.46 0.713 0.548血小板（×109/L） 263.40±58.20 258.60±56.30 0.492 0.637

2.2 各期NEC 患兒血清IL-12 及IL-17 水平比較見表2。Ⅲ期血清IL-12 及IL-17 水平均明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；且Ⅱ期血清IL-12 及IL-17 水平均明顯高于Ⅰ期，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表2 各期NEC 患兒血清IL-12 及IL-17 水平比較（±s）

表2 各期NEC 患兒血清IL-12 及IL-17 水平比較（±s）

項目 Ⅰ期(n=31) Ⅱ期(n=37) Ⅲ期(n=12) F P IL-12（ng/L） 51.72±7.40 62.40±9.52 79.30±14.80 10.205 ＜0.001 IL-17（ng/L） 14.20±4.38 20.85±6.17 34.60±9.72 7.228 ＜0.001

2.3 血清IL-12 及IL-17 水平對新生兒NEC 的診斷價值 見表3。血清IL-12 及IL-17 水平診斷新生兒NEC 的最佳截值分別為48.75ng/L，15.60 ng/L，兩項聯(lián)合診斷新生兒NEC 的曲線下面積（0.902，95%CI：0.845～0.963）明顯高于單項IL-12（0.826，95%CI：0.768～0.887） 及IL-17（0.797，95%CI：0.742～0.854），差異均有統(tǒng)計學意義（Z=4.658，5.116，P＜0.05），其敏感度和特異度為90.3%和83.5%。

表3 血清IL-12 及IL-17 水平對新生兒NEC 的診斷價值

3 討論

新生兒NEC 是臨床上常見的一類重癥消化系統(tǒng)疾病，其病情進展快，早期表現(xiàn)不典型，輕癥與重癥臨床表現(xiàn)差別較大，部分與早產兒并發(fā)癥難以鑒別，臨床上仍以預防、早期治療為主[5-6]。目前，臨床上缺乏對NEC 早期診斷的可靠實驗室指標，故其早期診斷率較低，往往延誤了患兒救治的最佳時機。因此，尋找一種能早期診斷NEC 的敏感度及特異度高的實驗室指標對本病的診治具有重要意義。IL-12 是重要的促炎介質，能激發(fā)炎癥的級聯(lián)反應，介導機體的免疫功能，與小兒腸道炎癥性疾病的發(fā)生發(fā)展相關[7]。IL-17 是一種前炎癥細胞因子，通過誘導多種細胞釋放促炎因子參與NEC 的發(fā)病[8]。

本研究顯示，病例組血清IL-12 及IL-17 水平明顯高于對照組，提示血清IL-12 及IL-17 水平在NEC 患兒中呈高表達，可能參與NEC 的發(fā)生發(fā)展。目前臨床常以修正Bell 分期診斷標準對NEC 進行分期，其中Ⅰ期為輕癥NEC，病情較少進展；Ⅱ期為NEC 確診期；Ⅲ期為重癥NEC，病情進展迅速、危重，死亡率極高。NEC 的預后與分期密切相關，若能在I期識別，及時給予禁食、抗生素治療等處理，則有阻斷病情進展的可能。反之，病情快速進展，腸道炎癥加重，進入Ⅲ期出現(xiàn)穿孔、腹膜炎表現(xiàn)，此時保守治療則無效，只能外科手術處理。本研究顯示，Ⅲ期血清IL-12 及IL-17 水平均明顯高于Ⅰ期和Ⅱ期，且Ⅱ期血清IL-12 及IL-17 水平均明顯高于Ⅰ期，提示血清IL-12 及IL-17 水平與NEC 患兒的病情嚴重程度有關，其水平越高，NEC 患兒病情進展越快，發(fā)生死亡的風險越大。李曉霞等[9]研究發(fā)現(xiàn)，NEC 患兒血清IL-12 呈高表達，對NEC的病情進展可能有促進作用，在NEC 診斷中有一定價值。邱玉芬等[10]研究表明，血清IL-17 水平在NEC 患兒中顯著升高，與重癥NEC 患兒預后顯著相關，可能是NEC診斷或預后判斷的一個預測因素。本研究進一步應用ROC 曲線分析顯示，血清IL-12及IL-17 水平診斷新生兒NEC 的最佳截值分別為48.75ng/L，15.60 ng/L，兩項聯(lián)合診斷新生兒NEC的曲線下面積（0.902，95%CI：0.845 ～0.963）最大，其敏感度和特異度較高。胡利霞等[11]研究表明，抗炎或促炎細胞因子水平與NEC 的臨床分期及腸道菌群豐富度密切相關，可作為NEC 病情診斷的輔助指標。亦有研究認為，促炎細胞因子IL-12 在新生兒NEC 發(fā)病過程中起著重要作用，利用促炎細胞因子的拮抗劑，可為新生兒NEC 的防治提供新的方向[12]。

綜上所述，血清IL-12 及IL-17 水平在NEC 患兒中明顯升高，與患兒病情嚴重程度相關，有望作為新生兒NEC 早期診斷的實驗室指標，兩項聯(lián)合檢測對新生兒NEC 診斷具有一定的價值。