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    電針大鼠天樞穴抑制西沙必利促進胃運動效應的觀察

    2020-12-07 06:16:48余芝龐婷婷賈新新梁超徐斌
    世界中醫(yī)藥 2020年21期
    關鍵詞:天樞針藥西沙

    余芝 龐婷婷 賈新新 梁超 徐斌

    摘要?目的:采用不同電針強度,觀察電針天樞穴對西沙必利誘發(fā)的大鼠胃運動的影響,探索電針天樞與西沙必利聯合應用的相互作用規(guī)律和量效關系。方法:SD大鼠24只,按照隨機數字表法,隨機分為0.5 mA組,1 mA組和3 mA組,每組8只。在動物胃竇放置球囊,連接壓力感受器和多導生理記錄系統并記錄胃內壓,記錄基線、干預后(二甲基亞砜溶劑對照、西沙必利和電針)胃內平均壓力值和每只大鼠的西沙必利藥量。觀察電針不同強度天樞結合西沙必利對大鼠胃運動的影響。結果:1)與二甲基亞砜溶劑對照比較,腹腔注射西沙必利后大鼠胃運動明顯增強(P<0.01)。2)與注射西沙必利效應比較,采用0.5 mA,1 mA和3 mA的電針強度刺激天樞能明顯抑制西沙必利誘發(fā)的胃運動增強(P<0.01),并且隨著電針強度增加,抑制效應更加明顯,0.5 mA和3 mA之間效應差異有統計學意義(P<0.05)。3)計算電針與西沙必利之間的效力關系,在當前藥物濃度狀態(tài)下,0.5 mA天樞產生的效應相當于抑制(1.15±0.24)μg的西沙必利;1 mA相當抑制(3.56±1.31)μg的西沙必利;3 mA相當于抑制(4.03±0.95)μg的西沙必利,0.5 mA和3 mA之間的差異有統計學意義(P<0.05)。結論:不同強度電針大鼠天樞能抑制西沙必利誘發(fā)的胃運動增強效應,這一效應呈現強度依賴性。這一結果首次提示,在采用針藥結合調節(jié)胃運動抑制狀態(tài)時,選用天樞穴可能會產生拮抗效應,降低藥物效應,在選穴時應該慎重考慮。

    關鍵詞?電針;天樞;針藥結合;強度依賴;西沙必利;5-羥色胺;胃運動;胃腸動力障礙

    Abstract?Objective:To observe the effect of ST25 combined with cisapride on gastric motility in rats by using different electroacupuncture(EA)intensities,and to explore the law of interaction and efficacy of the combined application of ST25 and cisapride.According to the random number table.Methods:A total of 24 SD rats were randomly divided into 0.5 mA group,1 mA group and 3 mA group,with 8 rats in each group.Placeing a balloon in the gastric antrum of the rats,connecting the baroreceptor and the multi-conduction physiological recording system and record the intragastric pressure,the value of baseline and the average intragastric pressure after intervention(vehicle control,cisapride and EA)was calculated and the amount of cisapride in each rat was recorded to observe the effect of EA at ST25 combined with cisapride on gastric motility in rats.Results:1)Compared with the vehicle control,the gastric movement of rats was significantly enhanced after intraperitoneal injection of cisapride(P<0.01).2)Compared with the cisapride,the stimulation of EA at ST25 with 0.5 mA,1 mA and 3 mA could significantly inhibit the gastric movement induced by cisapride(P<0.01),and as the intensity of the EA increases,the suppression effect was more obvious.The difference in effect between 0.5 mA and 3 mA was statistically significant(P<0.05).3)The efficacy relationship between EA and cisapride was calculated.At the current concentration,the effect of 0.5 mA ST25 is equivalent to(1.15±0.24)μg of cisapride; 1 mA is equivalent to(3.56±1.31)μg of cisapride; 3 mA is equivalent to(4.03±0.95)μg of cisapride.There was a statistically significant difference in the effect between 0.5 mA and 3 mA(P<0.05).Conclusion:EA at ST25 with different intensities can inhibit the enhanced gastric motility induced by cisapride in rats,which is intensity-dependent.

    Keywords?Electroacupuncture; ST25; Combination of acupuncture and medicine; Intensity-dependence; Cisapride; Serotonin; Gastric motility; Gastrointestinal dysmotility

    中圖分類號:R245.31+9文獻標識碼:Adoi:10.3969/j.issn.1673-7202.2020.21.004

    胃腸動力障礙可引起嘔吐、腹痛、便秘等癥狀,是臨床多種疾病的共同病理生理機制,見于食管反流、胃輕癱、功能性消化不良、腸易激綜合征和功能性便秘等疾病[1-4],給患者造成巨大的痛苦,嚴重影響了患者的生命質量[5],已成為一個嚴重的公共衛(wèi)生問題,給社會帶來了沉重負擔,然而由于藥物的不良反應,目前針對胃腸動力障礙的治療選擇有限。西沙必利是5-HT4受體激動劑[6],通過結合腸道中的的5-HT4受體,增加下食管括約肌壓力,食管底部平滑肌的蠕動收縮,減少胃酸反流,加快胃排空,協調胃竇和十二指腸的運動,加快小腸和大腸的推進,從而發(fā)揮其全胃腸動力的作用,可用于功能性消化不良、便秘等多種胃腸動力障礙性疾病的治療[7-10],但是也存在心律失常等不良反應。

    針藥結合是臨床常用的治療手段之一,有研究表明,針灸聯合西沙必利應用于食管反流、便秘等胃腸動力異常疾病[11-12],能夠明顯提高臨床療效,減輕藥物的不良反應,其效果優(yōu)于單純應用西沙必利。針藥二者相結合具有增效減毒的優(yōu)勢,但是目前存在應用規(guī)律不清晰等問題。以胃腸運動為例,天樞是臨床治療功能性消化不良,胃輕癱,便秘等胃腸動力障礙疾病的常用穴之一[13-14],用以促進胃腸運動,并結合5-HT4受體激動劑類藥物(如莫沙必利、西沙必利等)應用[12,15]。另一方面,來自動物實驗結果表明,針刺單穴天樞對不同節(jié)段的胃腸運動表現出不同的調節(jié)作用:對胃和空腸運動表現為抑制效應,對遠端結腸運動表現為促進效應[16-17]。從基礎實驗結果來看,天樞和西沙必利對胃運動的調節(jié)具有相反的效應方向,二者結合應用時能否產生增效或者減毒的效應,其影響因素是什么?明確針灸和藥物對單一靶器官的相互作用特點與效力大小是進行針藥結合研究與應用的基礎,故本文以大鼠胃運動為觀察指標,探索了天樞和西沙必利結合應用對胃運動的影響及電針效應量關系,以期為針藥結合的合理化應用提供研究思路。

    1?材料與方法

    1.1?材料

    1.1.1?動物?24只SPF級健康成年SD雄性大鼠,體質量180~250 g,購于上海西普爾-必凱實驗動物有限公司[許可證號:SCXK(滬)2013-0016,倫理審批號:201809A015],飼養(yǎng)于南京中醫(yī)藥大學實驗動物中心,控制室溫(22±2)℃,相對濕度40%~60%,12 h/12 h晝夜交替,自由飲食飲水。

    1.1.2?藥物?烏拉坦(Sigma-Aldrich,美國,貨號:U2500);西沙必利(Sigma-Aldrich,美國,貨號:CDS021610);二甲基亞砜(Sigma-Aldrich,美國,貨號:34869)。

    1.1.3?試劑與儀器?多道生理信號采集系統(成都儀器廠,型號:RM6240型);壓力換能器(成都儀器廠,型號:YPJ01型);韓氏電針儀(北京華衛(wèi)產業(yè)開發(fā)公司,型號:LH202H型);恒溫板(成都儀器廠,型號:ST-1型);自制雙極聯體針灸針2根[華佗牌針灸針(0.18 mm×13 mm),針柄分別套上PE50聚乙烯管(直徑1 mm,長度10 mm)后,用醫(yī)用膠布纏繞,針柄末端連接電針儀正負極]。

    1.2?方法

    1.2.1?分組?24只大鼠適應性飼養(yǎng)1周后,將動物隨機分為3組,分別為0.5 mA組,1 mA組和3 mA組,每組8只。

    1.2.2?給藥方法?采用生理鹽水配制10%的二甲基亞砜溶液,隨后用10%的二甲基亞砜配制西沙必利溶液(0.01 mg/mL,0.02 mg/kg),藥物采用腹腔注射的方式。

    1.2.3?檢測指標與方法?實驗前禁食12 h,自由飲水,大鼠用20%的烏拉坦(0.8 g/kg,腹腔注射)麻醉后固定于實驗操作臺上,在距腹部劍突1 cm下切開皮膚,距胃竇約0.5 cm處行縱行切口,將自制的水囊測壓探頭放入胃竇,荷包縫合,通過三通連接注射器及壓力換能器,采集的信號輸入多道生理信號采集系統。實驗過程中用電熱板加熱維持動物體溫(37±0.5)℃。手術完成后休息1 h,等待胃內壓力波形穩(wěn)定。干預前先記錄1 min胃內壓力值作為基線對照,然后腹腔注射二甲基亞砜作為溶劑對照,觀察30 min,無反應后注射相同體積的西沙必利溶液,波形穩(wěn)定后電針左側天樞穴(0.5、1、3 mA,2~15 Hz,1 min),進針深度為3~4 mm。各組基線值、給藥后(溶劑/西沙必利)、電針時各取1 min胃內平均壓力值,并記錄每只大鼠的西沙必利藥量。1)計算藥物/電針變化率,用于評估不同藥物或電針對胃運動的影響,藥物/電針變化率(%)=(干預值-基線值)/基線值×100%;2)計算單位藥物效應,用于評估每單位西沙必利(μg)對胃運動的效應,藥物效應(%/μg)=藥物變化率/西沙必利藥量;3)計算電針效應,用于電針效應與藥量之間的轉換,即每次電針產生的效應相當于多少藥量,電針效應(μg)=電針變化率/藥物效應。

    1.3?統計學方法?采用SPSS 22.0統計軟件進行數據分析,計量資料以均數±標準誤(±s)表示。

    數據經正態(tài)分布、方差齊性檢驗符合條件的,組間采用單因素方差分析及LSD檢驗;不符合正態(tài)、方差齊性則采用秩和檢驗;干預(電針/藥物)前后采用配對t檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

    2?結果

    2.1?正常大鼠胃運動特征及西沙必利調節(jié)胃運動的效應?球囊放入大鼠胃竇,穩(wěn)定后可觀測到規(guī)律的胃蠕動波,頻率4~10次/min,振幅波動范圍在0.08~0.28 kPa之間,平均振幅為(0.17±0.02)kPa。腹腔注射二甲基亞砜溶劑后,胃蠕動的頻率4~9次,振幅在0.09~0.27 kPa之間,平均振幅為(0.18±0.02)kPa,和基線比較差異無統計學意義(P>0.05)。注射西沙必利后大鼠胃運動逐漸增強,約60 min后達到峰值并穩(wěn)定,振幅波動范圍在0.21~0.5 kPa之間,平均振幅為(0.35±0.03)kPa,和溶劑比較,差異有統計學意義(P<0.01)。見圖1。

    2.2?不同強度電針天樞聯合西沙必利對大鼠胃運動的效應?注射西沙必利后大鼠胃運動明顯增強,隨后采用0.5 mA強度電針刺激天樞,結果表明電針天樞能夠抑制西沙必利誘發(fā)的胃運動增強效應,差異有統計學意義(P<0.01)。1 mA組和3 mA的的效應與0.5 mA相類似,均能明顯抑制胃運動(P<0.01)。見圖2。

    2.3?不同強度電針天樞聯合西沙必利對大鼠胃運動效應的比較?計算電針變化率,進一步比較不同電針強度刺激天樞對西沙必利誘發(fā)的胃運動增強效應的影響,結果顯示,0.5 mA的效應量最低,1 mA居中,3 mA的效應量最強,和0.5 mA比較,差異有統計學意義(P<0.05),結果提示不同電針強度之間對胃運動呈現出電針強度依賴的量效關系。見圖3。

    2.4?不同強度電針天樞聯合西沙必利對大鼠胃運動的電針效應分析?計算藥物變化率等指標,給大鼠腹腔注射西沙必利后,不同組之間的藥物變化率波動在110%~118%范圍,西沙必利的藥量波動在9.06~9.46 μg之間,計算相應的藥物效應,西沙必利對胃運動的產生的促進效應波動在12.61%~13.21%/μg,各組之間比較,差異無統計學意義。給電針干預后,0.5 mA組大鼠電針變化率抑制了(12.65±1.77)%,計算其電針效應,相當于抑制了(1.15±0.24)μg的西沙必利;相同方法計算獲得電針1 mA天樞的效應相當于抑制了(3.56±1.31)μg的西沙必利;電針3 mA天樞的效應相當于抑制了(4.03±0.95)μg的西沙必利,0.5 mA組和3 mA組之間比較,差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

    3?討論

    胃腸動力異常是多種疾病的共同病理生理基礎,常見的為胃腸動力障礙性疾病及功能性胃腸病,目前無較理想的藥物應用于臨床。5-羥色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)是大腦和腸道中重要的神經遞質,參與胃腸道運動,分泌及感知功能的調節(jié)。胃腸道5-HT合成異常、再攝取與失活障礙及信號通路的異常等可能參與胃腸動力異常的發(fā)生。5-HT受體目前分為5種亞型,其中5-HT4受體表達于腸神經系統肌間神經叢中的膽堿能神經元,活化后促進乙酰膽堿從運動神經元釋放,從而增加胃腸平滑肌活動,刺激胃腸蠕動,其中西沙必利是非選擇性5-HT4受體激動劑,應用于胃食管反流和消化不良等胃腸動力障礙疾病[18],不過存在心律失常等不良反應,甚至可能造成猝死,采用針藥結合的手段則有可能減輕這一不良反應,實現增效減毒。一項Meta分析檢索近10年來針藥結合治療功能性消化不良的臨床隨機對照試驗[19],結果表明,采用針藥結合的有效率優(yōu)于單純使用藥物治療,并能減少不良反應的發(fā)生,證實了針藥結合應用于胃腸動力障礙疾病的優(yōu)勢,這一機制可能和針灸能夠全面調節(jié)5-HT信號系統有關。電針不僅能下調IBS模型小鼠血清及結腸組織中增加的5-HT含量[20],還能上調結腸5-HT4受體蛋白含量及mRNA表達,另外,電針還能調節(jié)5-HT信號系統其他成員受體的表達,通過5-HT信號系統調節(jié)胃腸動力系統[21],提示針灸具有整體調整的特點,并為針刺聯合5-HT4受體激動劑西沙必利應用時,減輕藥物的用量,從而減輕藥物不良反應提供了可能。

    針藥結合作用的影響因素繁多[22],尋找針藥結合的方式、方法和途徑,揭示其內在的相互作用規(guī)律和機制,才能實現針灸與藥物的最佳結合。前期不同研究工作表明,針刺單穴天樞對胃和空腸運動表現為抑制效應,其效應方向和西沙必利相反。在臨床應用中天樞又作為常用穴位之一,聯合5-HT4受體激動劑治療胃腸動力障礙性疾病[12,15],面對這一治療方案,針藥結合是否能達到增效減毒的作用,有無可能是電針刺激量不同引起的效應方向的不同?目前尚無該方面的研究報道。本實驗以大鼠胃運動為觀察指標,以西沙必利為工具藥,觀察不同電針強度天樞聯合西沙必利對大鼠胃運動的效應,初步探索了二者的相互作用規(guī)律與量效關系,結果表明,不同電針強度刺激天樞,均對西沙必利誘發(fā)的胃運動增強作用具有抑制效應,并且不同電針強度之間對胃運動呈現出強度依賴的量效關系,具體而言,0.5 mA電針天樞的效應相當于抑制了(1.15±0.24)μg的西沙必利的效應;1 mA電針天樞相當抑制(3.56±1.31)μg的西沙必利;3 mA電針天樞相當于抑制了(4.03±0.95)μg的西沙必利,初步闡明了電針天樞穴和西沙必利之間的藥物效應量與電針效應量關系,為探索針藥結合的規(guī)律提供研究思路。

    胃腸動力障礙的病理機制及其復雜,不同腸段,其神經支配特點也各不相同,食管和胃以外源性神經支配為主,而空腸、回腸則更多得依賴于內源性腸神經系統支配,結腸則又增加了盆底神經控制[23];不同部位腧穴對不同節(jié)段胃腸運動,其調節(jié)作用也有自身的效應特點。因此采用針藥結合治療手段時,應明確其病理生理機制,充分了解藥物和針刺自身的作用特點,才有可能獲得優(yōu)勢互補的效果,從而達到提高療效,減輕藥物不良反應的目的。本研究結果提示,在針對功能性消化不良、胃輕癱等胃運動障礙的患者,采用針藥結合治療時,選用腹部腧穴可能會產生拮抗效應,降低藥物效應,在選穴時應該慎重考慮。

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