枇杷苯醚甲環(huán)唑和多菌靈殘留分析方法的探討

張亮，付巖，王全勝，凌淑萍，胡晨雷，陳紅霞

(寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江 寧波 315040)

枇杷別名蘆橘、金丸、蘆枝等[1]，原產(chǎn)于中國(guó)東南部，如今長(zhǎng)江以南地區(qū)均有種植。成熟的枇杷味道甜美，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，含有多種果糖、葡萄糖、鉀、磷、鐵、鈣以及維生素A、B、C等[2-3]。枇杷果實(shí)有潤(rùn)肺止咳的功效，再加上枇杷成熟期恰逢一年中新鮮水果匱乏季節(jié)，因此，深受消費(fèi)者的厚愛(ài)。浙江地區(qū)的枇杷一般在5月成熟，恰逢高溫高濕的梅雨季節(jié)，病害極易發(fā)生，為保證枇杷的產(chǎn)量和品質(zhì)，不可避免的要使用苯醚甲環(huán)唑及多菌靈等殺菌劑，這也給枇杷的食用安全帶來(lái)一定的風(fēng)險(xiǎn)。

苯醚甲環(huán)唑是一種安全性較高的三唑類殺菌劑，具有保護(hù)和治療作用，廣泛應(yīng)用于果樹、蔬菜等作物，能有效防治黑星病、黑痘病、白腐病、斑點(diǎn)落葉病、白粉病、褐斑病、銹病、條銹病、赤霉病等[4-6]。多菌靈是一種高效低毒的苯并咪唑類殺菌劑，可通過(guò)干擾病原菌有絲分裂中紡錘體的形成，影響細(xì)胞分裂，起到殺菌作用，能有效防治大田作物、蔬菜、水果等作物上的多種病害[7-9]。

目前，我國(guó)關(guān)于苯醚甲環(huán)唑和多菌靈的檢測(cè)方法主要有酶聯(lián)免疫法[10-14]、氣象色譜法[15-19]、高效液相色譜法[20-24]和液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法[25-30]等，但鮮見(jiàn)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)檢測(cè)枇杷中苯醚甲環(huán)唑和多菌靈的研究報(bào)道，也未見(jiàn)有關(guān)其貯藏穩(wěn)定性的報(bào)道。本研究建立采用UPLC-MS/MS技術(shù)同時(shí)測(cè)定枇杷中苯醚甲環(huán)唑和多菌靈殘留量的方法，操作簡(jiǎn)單、快捷，定性定量準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，并對(duì)其在枇杷中的穩(wěn)定性進(jìn)行了考察研究，以期為苯醚甲環(huán)唑和多菌靈在枇杷中的進(jìn)一步研究提供分析方法和數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

乙腈、甲酸為色譜純，無(wú)水硫酸鎂為分析純；PSA填料40～63 μm，購(gòu)于安普公司；苯醚甲環(huán)唑、多菌靈標(biāo)準(zhǔn)品濃度均為100 μg·mL-1，均購(gòu)自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所；LC-MS/MS(Waters)，備色譜柱Acquity UPLC BEH C18 (2.1 mm×100 mm，1.7 μm)柱；恒溫振蕩器(IKA KS4000ic)，高速離心機(jī)(Sigma 3K15)，旋渦混合器(IKA GENIUS3)，電子天平(MettlerQuintix124)。

1.2 樣品前處理

稱取勻漿后的枇杷樣品5 g(精確至0.01 g)置于50 mL離心管中，加入10.0 mL乙腈，以350 r·min-1振蕩提取30 min后，加入5 g氯化鈉劇烈震蕩1 min，再以9 500 r·min-1離心3 min，吸取2 mL上清液于裝有150 mg PSA和300 mg無(wú)水硫酸鎂的5 mL塑料離心管中，漩渦振搖1 min，9 500 r·min-1離心3 min。吸取凈化上清液1.0 mL至另一試管中，并加入1.0 mL 0.1%甲酸溶液混合均勻，過(guò)0.22 μm濾膜后供LC-MS/MS測(cè)定。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)液配制

分別吸取100 μL濃度為100 mg·L-1的苯醚甲環(huán)唑和多菌靈標(biāo)準(zhǔn)品，用色譜純乙腈稀釋成10 mg·L-1混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；分別吸取10 μL濃度為100 mg·L-1的苯醚甲環(huán)唑和多菌靈標(biāo)準(zhǔn)溶液，用枇杷空白基質(zhì)液和0.1%甲酸溶液(5∶5，V∶V)逐級(jí)稀釋成1.000、0.500、0.100、0.050、0.010、0.005、0.001 mg·L-1的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液。

1.4 檢測(cè)條件

流動(dòng)相為0.1%甲酸溶液(A)和乙腈(B)，采用梯度洗脫，0～1.0 min，維持50%B；1.0～2.0 min，50%B線性變化至80%B；2.0～4.00 min，維持80%B，4.00～4.10 min，80%B線性變化至50%B；4.10～5.00 min，維持50%B。色譜柱柱溫35 ℃，樣品室溫度10 ℃，流速為0.3 mL·min-1，進(jìn)樣體積10 μL。

采用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)分析，電噴霧離子源，正離子電離模式(ESI+)，電離電壓2.50 kV，去溶劑氣(N2)流速1 000 L·h-1，錐孔氣流速50 L·h-1，源溫150 ℃，霧化溫度500 ℃。苯醚甲環(huán)唑母離子406.10m/z，子離子分別為337.00m/z和251.00m/z(定量離子)，駐留時(shí)間為0.081 s，錐孔電壓為40 V，碰撞電壓分別為13和22 eV；多菌靈母離子191.97m/z，子離子分別為132.00m/z和159.93m/z(定量離子)，駐留時(shí)間為0.081 s，錐孔電壓為24 V，碰撞電壓分別為283和18 eV。

1.5 貯藏穩(wěn)定性試驗(yàn)

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的線性范圍與靈敏度

基質(zhì)匹配外標(biāo)法定量分析。結(jié)果表明，苯醚甲環(huán)唑和多菌靈在0.001～1.000 mg·L-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)均呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，兩者線性回歸方程分別為Y=1 028 747X+3 038，r=0.999 7(苯醚甲環(huán)唑)；Y=421 355X+4 900，r=0.994 8(多菌靈)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線最低濃度0.001 mg·L-1，進(jìn)樣體積10 μL，計(jì)算苯醚甲環(huán)唑和多菌靈的最小檢出量均為1.0×10-11g，最低檢出濃度為0.001 mg·L-1。

2.2 添加回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

表1表明，在0.005、0.100、0.500、1.000、6.000 mg·kg-1添加水平下，苯醚甲環(huán)唑在枇杷中的平均回收率為77%～108%，多菌靈在枇杷中的平均回收率為87%～105%，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均≤5%(n=5)，表明方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度，符合農(nóng)藥殘留分析要求。其典型色譜圖(圖1)顯示，添加水平為0.5 mg·kg-1苯醚甲環(huán)唑和多菌靈的保留時(shí)間分別在3.06和0.81 min左右。

表1 枇杷中農(nóng)藥的添加回收率

圖1 枇杷樣品添加兩種殺菌劑的典型色譜圖

2.3 貯藏穩(wěn)定性

表2表明，在枇杷基質(zhì)中，苯醚甲環(huán)唑和多菌靈30 d的平均降解率分別為11%和4%，90 d的平均降解率分別為16%和6%，180 d的平均降解率分別為20%和9%。由此可見(jiàn)，苯醚甲環(huán)唑和多菌靈在枇杷樣品中的貯藏穩(wěn)定性至少為180 d。

表2 苯醚甲環(huán)唑和多菌靈在枇杷基質(zhì)中貯藏的穩(wěn)定性

3 小結(jié)與討論

本研究在QuEChERS方法基礎(chǔ)上，建立UPLC-MS/MS同時(shí)測(cè)定枇杷中苯醚甲環(huán)唑和多菌靈的殘留分析方法，在0.001～1.000 mg·L-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，苯醚甲環(huán)唑和多菌靈線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)大于0.994 8，最小檢出量均為1.0×10-11g，在0.005～6.000 mg·kg-1添加水平下，苯醚甲環(huán)唑和多菌靈在枇杷中的回收率為77%～108%和87%～105%，且相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均≤5%。該方法前處理簡(jiǎn)單快速，靈敏度和精密度均符合農(nóng)藥殘留檢測(cè)要求，可為枇杷中苯醚甲環(huán)唑和多菌靈殘留的檢測(cè)提供方法依據(jù)。通過(guò)貯藏穩(wěn)定性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在-20 ℃條件下，苯醚甲環(huán)唑和多菌靈在枇杷樣品中的貯藏穩(wěn)定性至少為180 d，說(shuō)明兩者在枇杷樣品中的穩(wěn)定性良好。本研究可為短期冷凍枇杷樣品中的苯醚甲環(huán)唑和多菌靈的檢測(cè)數(shù)據(jù)的有效性和真實(shí)性以及兩者在枇杷上的深入研究提供數(shù)據(jù)支持和參考。