HPLC-ESI-QTOF-MS 法測定減肥保健食品中16 種食欲抑制劑的研究

□ 宋 健 沈陽市食品藥品檢驗所

食欲抑制劑會對食用者的下丘腦攝食中樞產生影響，影響食用者食欲，使其產生飽腹感，進而控制進食，達到減肥的目的。長期食用食欲抑制劑使食用者產生依賴性，并出現頭暈、惡心、腹瀉等副作用，危害食用者的身體健康。就此，在減肥保健食品投入市場前，需做好食欲抑制劑檢測工作。

1 實驗方法

1.1 實驗儀器與試劑

實驗選擇高效液相色譜—電噴霧離子化—四級桿串聯飛行時間質譜儀、旋轉蒸發(fā)儀及離心機等。

實驗試劑包括甲醇、丙酮、16 種食欲抑制劑（包括氯卡色林、麻黃堿、辛伐他汀、西曲布明等）的標準溶液。

實驗樣品為市售減肥保健食品。

1.2 實驗參數優(yōu)化

選擇控制變量法，分析最佳實驗參數（包括對比色譜柱、流動相、質譜條件、提取溶劑、凈化柱），明確檢測方法的應用要點。

在色譜柱分析中，選擇迪馬鉆石一代C18柱、賽暢C18柱、沃特世XterraC18柱、沃特世CORTECS T3 柱4 種色譜柱，對比其對食欲抑制劑的分離效果，發(fā)現沃特世CORTECS T3 柱的響應值最高，將其選為色譜柱。

在流動相分析中，A 相的備選溶劑包括甲醇與乙腈；B 相的備選溶劑包括水、乙酸銨溶液及磷酸溶液等，對比洗脫獲得的色譜分離效果，發(fā)現A相為甲醇，B 相為乙酸銨溶液時，色譜峰分離效果最佳，且表現出較高的離子豐度，將其選為流動相。

在質譜條件分析中，選擇正離子與負離子兩種模式，以同樣參數進行掃描處理，設定相應質譜參數，對比兩者響應強度與峰形，發(fā)現正離子模式下離子豐度更高，食欲抑制劑的離子化效率最高。就此，選擇正離子掃描方式，合理設定霧化氣壓力、電壓、流速等參數。

在提取溶劑分析中，選擇甲醇、乙醇、丙酮及乙腈等溶劑為實驗對象，分別設定不同溶劑組合，對食欲抑制劑進行提取處理，對比提取效果，發(fā)現甲醇和丙酮混合提取效果最佳，將其混合比設定為6 ∶4（體積比）。

在凈化柱分析中，選擇WCX、WAX、SIL 及MCX 等固相萃取柱，進行凈化實驗，測定混合液的凈化回收率。結果顯示，MCX的凈化回收率最高，選定為凈化柱。

1.3 樣品處理

準確稱取5 g 減肥保健食品，置于50 mL 離心管中，向離心管內添加10 mL 甲醇，在頻率40 KHz 的條件下，進行超聲提??；將超聲提取后的物質置于離心機中離心處理5 min，離心條件為12 000 rpm；吸取上清液，向殘渣內添加10 mL 甲醇，以同樣參數進行超聲提取，將其與上清液混合；混合液置于旋轉蒸發(fā)儀中，將混合液濃縮至3 mL；通過混合型陽離子交換固相萃取柱（MCX）對濃縮液進行凈化處理，處理劑選擇丙酮、甲醇與水；凈化后的混合液進行淋洗處理，處理劑選擇鹽酸與甲醇；使用甲醇—水—氨水混合液（三者體積比為80 ∶12 ∶8）洗脫，置于氮吹儀中干燥處理，處理后的殘渣添加1 mL 乙腈溶解，使用0.22 μm 的膜過濾，完成樣品處理。

1.4 實驗條件

在色譜分析中，選擇沃特世CORTECS T3 型號的色譜柱，將柱溫設定為30 ℃；進樣量設定為10 μL；選擇甲醇為A 相，乙酸銨溶液為B 相；各相的流速設定為1 mL/min；色譜柱選擇梯度洗脫方式。

在質譜分析中，選擇ESI 源為離子源，采取ESI+掃描方式，全掃描參數設定為50 ～1 000 m/z；鞘氣溫度設定為400 ℃；干燥氣溫度設定為300 ℃；流速設定為10 L/min；毛細管電壓設定為4 000 V；霧化氣壓力設定為300 KPa，流速設定為1.5 L/min。

2 實驗結果與分析

在檢測的30 種減肥保健食品中，1 種檢測出豪莫西布曲明，檢測添加量為11.2 μg/L；1 種檢測出苯丙醇胺，檢測添加量為6.3 μg/kg。兩者均為非法添加非食用物質，會對人體造成損害。

以不含食欲抑制劑的減肥保健食品為樣品，對其進行前處理后，添加 低 濃 度（1、5、10、50 ng/mL 與100 ng/mL）的食欲抑制劑標準液，檢測后計算檢出限（信噪比設定為3）與定量限（信噪比設定為10）。檢測結果顯示，該方法的檢出限為0.03 ～0.3 μg/kg，定量限為0.1 ～1 μg/kg。同時，向不含食欲抑制劑的樣品添加1、50、100 μg/kg 的16 種 食 欲 抑制劑混合標準溶液，按照最佳實驗條件進行檢測，分析該檢測方法的回收率與精密度。檢測結果顯示，在1 ～100 μg/kg 的添加范圍內，該檢測方法的加標回收率為92.3%～99.4%，相對標準偏差為1%～4%，說明該檢測方法檢測準確性與靈敏度高。

3 結論

綜 上 所 述，HPLC—ESI—QTOF—MS法在減肥保健食品中食欲抑制劑檢測中，檢出限為0.03 ～0.3 μg/kg，定量限為0.1 ～1 μg/kg，具有檢測準確性高、檢測靈敏度高等優(yōu)勢，可推廣應用。檢測過程中，檢測人員需做好樣品前處理，按照合理色譜條件與質譜條件檢測，保障檢測方法優(yōu)勢的發(fā)揮。