HPLC 同時(shí)測定食品中7 種添加劑

□ 高 慧 汪 洋 邢 燕 馬小涵 朱 莎 淄博市疾病預(yù)防控制中心

糖精鈉、阿斯巴甜、安賽蜜、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸、咖啡因也是常用的添加劑，上述7 種添加劑在諸多產(chǎn)品中都有使用。上述7 種添加劑的測定均有國家標(biāo)準(zhǔn)方法，但較為分散，且每種添加劑的前處理方法均不一致，需分別測定，使得檢測過程繁瑣。本研究建立的方法將各項(xiàng)目的前處理方法和檢測條件整合在一起，可以使用同一個(gè)方法檢測7種添加劑，以達(dá)到高效、簡便、快速測定的目的。

1 實(shí)驗(yàn)方法

1.1 材料與試劑

安賽蜜標(biāo)準(zhǔn)溶液、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、咖啡因標(biāo)準(zhǔn)溶液、阿斯巴甜標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度均為1 000 μg/mL，北京海岸鴻蒙有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

Waters e2695 高效液相色譜儀，二極管陣列檢測器，冷凍高速離心機(jī)，渦旋振蕩器。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

1.3.1.1 液體樣品

準(zhǔn) 確 稱 取1.000 g 于15 mL 離心管中，加入0.1 mol/L 硫酸鋅溶液5 mL、0.2 mol/L 氨水5 mL，渦旋混勻后，超聲5 min，以5 000 r/min 離心5 min。將上清液過濾到25 mL 容量瓶中，沉淀加色譜流動相洗滌2 次，每次6 mL，洗滌液也過濾到同一容量瓶中，用流動相定容至刻度，混勻后，離心取上清液經(jīng)0.22 μm 濾膜過濾后進(jìn)樣測定。

1.3.1.2 固體樣品

準(zhǔn)確稱取2.000 g，加水10 mL，渦旋混勻后同液體樣品處理。

1.3.2 儀器條件

色譜柱：Waters X—Bridge C18（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流動相：甲醇+磷酸鹽緩沖溶液（0.1 mol/L 磷酸二氫銨溶液用氨水調(diào)節(jié)至pH=5）=18+82， 流 速1.0 mL/min； 柱 溫：30 min；測定波長（nm）：糖精鈉210、安賽蜜225、阿斯巴甜210、苯甲酸222、山梨酸250、脫氫乙酸228與咖啡因272。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液

配制7 種添加劑濃度在1.00 ～50.0 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)系列溶液，按照上述色譜條件進(jìn)行測定，以保留時(shí)間和二極管陣列的響應(yīng)值建立校正曲線。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的優(yōu)化

本研究分別比較了亞鐵氰化鉀和乙酸鋅、三氯乙酸、硫酸鋅和氨水3種試劑沉淀蛋白質(zhì)的效果，結(jié)果表明使用傳統(tǒng)的亞鐵氰化鉀和乙酸鋅、三氯乙酸分別為沉淀蛋白質(zhì)試劑時(shí)，其在210 nm 處產(chǎn)生的紫外吸收較為明顯，出峰時(shí)間跟目標(biāo)物保留時(shí)間一致或較接近，干擾目標(biāo)物的測定，故選用了硫酸鋅和氨水作為沉淀蛋白質(zhì)試劑，不會干擾目標(biāo)物的測定。

2.2 色譜條件的優(yōu)化

2.2.1 pH 的優(yōu)化

pH 是影響目標(biāo)物分離的主要條件，本研究分析的7 種目標(biāo)物，苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸屬于弱酸性物質(zhì)，糖精鈉、安賽蜜屬于強(qiáng)酸性物質(zhì)，咖啡因?qū)儆谌鯄A性物質(zhì)，阿斯巴甜屬于兩性物質(zhì)，隨著流動相pH 的變化，其保留時(shí)間也會隨之發(fā)生改變。本實(shí)驗(yàn)比較了pH 在4 ～6 時(shí)的檢測效果，pH 增大時(shí)，相關(guān)鹽的比例變高，保留時(shí)間變小，分離效果不好；pH 變小時(shí)，目標(biāo)物以羧酸形式為主，因此保留時(shí)間會增大，有些目標(biāo)物會拖尾。研究表明，在pH 為5 時(shí)7 種目標(biāo)物的分離效果最為理想。

2.2.2 檢測波長的選擇

用二極管陣列檢測器進(jìn)行定性檢測，找出7 種目標(biāo)物的最大吸收波長，其中糖精鈉和阿斯巴甜的最大吸收波長都在較低波段，易受到樣品基質(zhì)和試劑背景吸收的影響，故選用了210 nm 作為其測定波長，雖然靈敏度有所下降，但消除了干擾，滿足檢測靈敏度的需要。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)

按照1.3.3 方法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，其相關(guān)系數(shù)均在0.999 5 以上，檢出限均小于0.1 μg/mL。分別進(jìn)行了0.5、1.0、2.0 g/kg 3 個(gè)添加水平的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)，其回收率在95.5%～101.2%，以3 倍信噪比計(jì)算，檢出限均小于0.1 μg/mL，結(jié)果滿意。

3 實(shí)際樣品的測定

本研究測定了150 份樣品，其中飲料（包括可可飲料）、糕點(diǎn)、醬腌菜各50 份，其中醬腌菜中添加劑檢出率最高，達(dá)90%，超標(biāo)率為60%，苯甲酸和山梨酸使用率最高；飲料類阿斯巴甜檢出率最高，為68%，超標(biāo)率為20%；糕點(diǎn)類脫氫乙酸和甜蜜素檢出率最高，分別為35%和59%。

4 結(jié)論

本研究通過對糖精鈉、甜蜜素、阿斯巴甜、苯甲酸、山梨酸、脫氫乙酸和咖啡因7 種添加劑提取方法和儀器條件的優(yōu)化，實(shí)現(xiàn)了等度洗脫條件下7 種目標(biāo)物的完全分離，操作簡便，快速高效，干擾物少，適用于7 種食品添加劑的分析測定。