鋅加VC復(fù)合配方緩解環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的幼齡小鼠免疫抑制

陳瓊，陳朋，徐旻珺，李俊穎

(仙樂健康科技股份有限公司，廣東 汕頭，515041)

人體的免疫器官從出生開始發(fā)育，至青春期基本完善。人體的免疫系統(tǒng)由免疫器官、免疫細(xì)胞和免疫分子組成，與成人相比，兒童免疫系統(tǒng)有以下發(fā)育特點[1]：(1)非特異性免疫的屏障功能低下；(2)單核細(xì)胞因缺乏輔助因子，其趨化、吞噬、產(chǎn)生細(xì)胞因子和抗原提呈能力低下；(3)胸腺在發(fā)育過程中逐漸增大，到青春期才發(fā)育成熟，此過程中易發(fā)生細(xì)胞免疫缺陷[2-3]； (4)分泌免疫球蛋白G(immunoglobulin G,IgG)和免疫球蛋白A(immunoglobulin A，IgA)的B細(xì)胞數(shù)量分別在2歲和5歲時達(dá)到成人水平。上述特點均可造成幼兒免疫力低下。

鋅是人體中含量僅次于鐵的第二大微量金屬元素，是蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的重要組成部分，是涵蓋6大類(水解酶、轉(zhuǎn)移酶、氧化還原酶、連接酶、裂解酶和異構(gòu)酶)近2 000個酶的催化組件[4]。更重要的是，鋅指轉(zhuǎn)錄因子能夠激活下游基因轉(zhuǎn)錄，而鋅對于維持鋅指蛋白的結(jié)構(gòu)至關(guān)重要[5]。因此，鋅是RNA轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞生長代謝等生理過程中必不可少的營養(yǎng)元素。據(jù)估計，全球缺鋅的患病率為17%～20%，其中絕大多數(shù)發(fā)生在非洲和亞洲的發(fā)展中國家[6-7]。缺鋅會導(dǎo)致免疫系統(tǒng)功能低下，表現(xiàn)為胸腺萎縮，淋巴細(xì)胞數(shù)量減少和淋巴細(xì)胞應(yīng)答障礙[8]。因此在兒童生長過程中，鋅對于免疫系統(tǒng)的發(fā)育是至關(guān)重要的。

微量元素在免疫反應(yīng)的每個階段都發(fā)揮著重要的協(xié)同作用，充足的劑量對維持屏障功能以及免疫細(xì)胞的正常功能至關(guān)重要。早在1753年就有文獻(xiàn)記載,補(bǔ)充含豐富VC的柑橘水果的男性壞血病患者康復(fù)率較普通飲食患者有顯著增高[9]。之后陸續(xù)有研究發(fā)現(xiàn)VC還可以促進(jìn)免疫細(xì)胞分化和增殖[10-12]，增強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)活性和趨化性[11,13-14]，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬作用。此外VC還具有抑制活性氧生成，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子分泌，清除壞死的中性粒細(xì)胞等多種提高免疫的功效[12]。然而，支持免疫功能所必需的每日VC起效量普遍高于目前推薦的膳食攝入標(biāo)準(zhǔn)，諸如有研究表明10～18歲的男性VC的攝入量往往達(dá)不到免疫系統(tǒng)發(fā)育要求[15]，因此通過營養(yǎng)補(bǔ)充劑攝取充足的微量元素是促進(jìn)免疫系統(tǒng)發(fā)育的有效途徑。綜上所述鋅和VC單獨攝取均有助于增強(qiáng)免疫功能。然而，對于兒童發(fā)育期間的免疫力低下問題，有關(guān)鋅與VC復(fù)合作用的研究還較為匱乏。

環(huán)磷酰胺是化療中常用的烷基化劑，具有骨髓抑制和細(xì)胞毒性，并且可以通過使輔助性T細(xì)胞1(thelper-1 cell，Th1)/輔助性T細(xì)胞2(thelper-2 cell，Th2)發(fā)生細(xì)胞偏倚，誘導(dǎo)免疫抑制[16-17]。還有研究表明，環(huán)磷酰胺可以通過抑制T細(xì)胞的增殖，降低Th1細(xì)胞分泌細(xì)胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-12)和Th2細(xì)胞分泌細(xì)胞因子(IL-4、IL-6、IL-10)水平，誘導(dǎo)免疫抑制[18-19]。此外，環(huán)磷酰胺還可降低免疫球蛋白(IgA、IgM、IgG)及血清血紅蛋白水平，導(dǎo)致脾臟和胸腺的損傷。

因此，本研究為了開發(fā)可作為功能食品成分的潛在免疫增強(qiáng)劑，基于幼齡小鼠，以環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)免疫抑制動物模型，研究鋅與VC復(fù)合配方在緩解免疫抑制功能方面的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 實驗動物

BALB/c小鼠，3周齡，體重(13.13±2.0) g，由廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證號SCXK(粵)2013—0002，實驗動物質(zhì)量合格證號No.44007200058796。動物實驗環(huán)境：廣東省中醫(yī)藥工程技術(shù)研究院SPF級動物實驗室，設(shè)施使用許可證號SYXK(粵)2015—0059。飼養(yǎng)條件為12 h/12 h明暗節(jié)律、溫度22 ℃、相對濕度55%、換氣次數(shù)16 次/h，小鼠自由攝食、飲水。

1.1.2 材料及試劑

VC(含量≥99%)和檸檬酸鋅(鋅含量≥31.5%)復(fù)合配方由仙樂健康科技股份有限公司提供。

ELISA試劑盒，天津安諾瑞康生物技術(shù)有限公司，抗體，Affymetrix Inc.公司。

JJ3000動物電子秤，G&G公司；Class II Type B2型生物安全柜，新加坡Esco公司；Cellometer Mini型自動細(xì)胞計數(shù)儀，美國Nexcelom公司；BSA224S型電子分析天平，德國Sartorius公司；5424型小型高速離心機(jī)，德國EPPendorf公司；Milli Q Plus型超級純水儀，美國MilliPore公司；3111型CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱、702型超低溫冰箱、Varioskan Flash型全波長多功能酶標(biāo)儀，美國Thermo公司；Cytomics FC500MPL型流式細(xì)胞儀，美國Beckman Coulter公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 模型建立與分組

3周齡BALB/c小鼠36只，適應(yīng)1周后隨機(jī)分為空白組(control)、模型組(CTX)、復(fù)合配方組(CTX+complex)，每組各12只，雌雄各半。飼養(yǎng)期間，小鼠自由進(jìn)食、飲水。復(fù)合配方組按檸檬酸鋅(以鋅計)5.3 mg/(kg·d)、VC50.5 mg/(kg·d)混合而成。復(fù)合配方組小鼠按照20 mL/(kg·d)的體積進(jìn)行灌胃，空白組和模型組以等體積蒸餾水進(jìn)行灌胃，每日灌胃1次，實驗周期為28 d。在給藥的第14天，模型組及復(fù)合配方組小鼠進(jìn)行環(huán)磷酰胺[40 mg/(kg·d)]腹腔注射，連續(xù)注射2 d。在第29天，用戊巴比妥鈉(50 mg/kg)麻醉后采血，采血后，在麻醉狀態(tài)下頸椎脫臼法處死，摘取臟器組織(圖1)。

圖1 實驗日程計劃Fig.1 Experimental protocol

1.2.2 取材

一部分全血在4 ℃ 7 500 r/min離心15 min，收集上清液用于檢測血清IL-2、IL-4、TNF-α及IFN-γ含量，剩余全血在24 h內(nèi)檢測淋巴細(xì)胞數(shù)。

取血完畢后，完整解剖摘取胸腺、肝臟、脾臟，去除脂肪和筋膜組織后稱重，并清點派氏結(jié)數(shù)量。取出靠近十二指腸段的空腸約5 cm，刮取腸黏膜內(nèi)容物，溶于磷酸緩沖鹽溶液(phosphate buffer saline，PBS)中，所得溶液用于分泌型免疫球蛋白A(secretory immunglobulin，SIgA)含量的測定。根據(jù)公式(1)～公式(3)計算胸腺系數(shù)、肝臟系數(shù)、脾臟系數(shù)：

(1)

(2)

(3)

1.2.3 脾臟細(xì)胞懸液制備方法

無菌取脾，置于盛有適量無菌Hank′s液的小平皿中，并在脾上面放置一塊紗布，用大號注射器內(nèi)芯輕輕將脾磨碎，制成單個細(xì)胞懸液。經(jīng)200目篩網(wǎng)過濾，用Hank′s液洗2次，每次離心10 min(1 000 r/min)。棄上清將細(xì)胞漿彈起，加入0.5 mL滅菌水20 s，裂解紅細(xì)胞后再加入0.5 mL 2倍Hank′s液及8 mL Hank′s液，1 000 r/min，離心10 min，然后將細(xì)胞懸浮于2 mL的完全培養(yǎng)液中，用全自動細(xì)胞計數(shù)儀計數(shù)脾細(xì)胞數(shù)量。

1.2.4 脾臟淋巴細(xì)胞檢測

將脾臟淋巴細(xì)胞稀釋至1×107個/mL，取100 μL加入流式管中。在流式管中再加入CD3+、CD4+和CD8+單克隆抗體各2 μL，旋渦混勻，于4 ℃避光染色后，用PBS洗滌2次，棄去上清，再用PBS重懸細(xì)胞，使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測,檢測結(jié)果用FlowJo軟件進(jìn)行分析。

1.2.5 NK細(xì)胞活性測定方法

取靶細(xì)胞(YAC-1細(xì)胞)和效應(yīng)細(xì)胞(脾臟細(xì)胞)各100 μL(效靶體積比50∶1)，加入U型96孔培養(yǎng)板中；靶細(xì)胞自然釋放孔加靶細(xì)胞和培養(yǎng)液各100 μL，靶細(xì)胞最大釋放孔加靶細(xì)胞和1%(體積分?jǐn)?shù))NP40或2.5%(體積分?jǐn)?shù))Triton各100 μL；上述各項均設(shè)3個復(fù)孔，于37 ℃、5%(體積分?jǐn)?shù))CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h，然后將96孔培養(yǎng)板以1 500 r/min離心5 min，每孔吸取上清100 μL置平底96孔培養(yǎng)板中，同時加入LDH基質(zhì)液100 μL，反應(yīng)3 min，每孔加入1 mol/L的HCl 30 μL，在酶標(biāo)儀490 nm處測定光密度值(OD)。

NK細(xì)胞活性計算如公式(4)所示：

(4)

1.2.6 溶血空斑數(shù)檢測方法

參照《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》中方法取小鼠脾細(xì)胞進(jìn)行溶血空斑試驗[17]。

1.2.7 外周血淋巴細(xì)胞

全血在24 h內(nèi)用全血細(xì)胞分析儀檢測淋巴細(xì)胞數(shù)。

1.2.8 外周血細(xì)胞因子及SIgA檢測

血清和腸黏膜內(nèi)容物溶液采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA) 測定。按照說明書取適量血清(無需稀釋)和腸黏膜內(nèi)容物溶液按說明書要求用量依次加入ELISA微孔板中。將微孔板置于37 ℃保溫箱中孵育60 min后棄去孔中液體并反復(fù)沖洗5次，充分拍打棄盡孔中殘液。分別向孔中依次加入TMB Ⅰ和TMB Ⅱ各50 μL，室溫下避光反應(yīng)20 min，加入終止液50 μL，充分混勻，終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀在450 nm下讀取各孔吸光度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用單因素方差分析進(jìn)行差異分析，判斷出方差齊性時采用Bonferroni分析，方差不齊時采用Dunnett T3分析。統(tǒng)計結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。當(dāng)P<0.05時，說明數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 鋅加VC復(fù)合配方對小鼠體重及免疫器官重量的影響

如表1所示，小鼠體重、肝臟質(zhì)量、肝臟系數(shù)各組間無顯著差異。模型組對比空白組，小鼠的脾臟質(zhì)量有減輕趨勢；脾臟系數(shù)顯著降低；復(fù)合配方組有緩解脾臟系數(shù)降低的趨勢，與空白組和模型組比較均無顯著差異。模型組胸腺質(zhì)量和胸腺系數(shù)較空白組均顯著降低，復(fù)合配方組顯著緩解了環(huán)磷酰胺造成胸腺質(zhì)量及胸腺系數(shù)降低。以上結(jié)果表示鋅加VC復(fù)合配方部分緩解了環(huán)磷酰胺造成的免疫器官萎縮。

表1 鋅加VC復(fù)合配方對小鼠體重及免疫器官重量的影響Table 1 The effect of zinc and VC compound formula on body weight and viscera coefficient in immature mice

2.2 鋅加VC復(fù)合配方對外周血細(xì)胞因子含量的影響

如圖2所示，與空白組相比，模型組外周血中的Th1細(xì)胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ，Th2細(xì)胞因子IL-4在外周血中的含量均顯著降低；與模型組相比，復(fù)合配方組中IL-2和TNF-α的含量顯著升高，IFN-γ含量呈上升趨勢；而復(fù)合配方組外周血中IL-4的含量，與空白組相比顯著降低，和模型組相比無顯著差異(圖2-d)。

以上結(jié)果表明鋅加VC復(fù)合配方抑制了環(huán)磷酰胺造成的Th1細(xì)胞因子分泌障礙，對Th2不起效果。

a-IL-2;b-TNF-d;c-IFN-γ;d-IL-4圖2 鋅加VC復(fù)合配方對外周血細(xì)胞因子含量的影響Fig.2 The effect of zinc and VC compound formula on cytokines content in immature mice serum注：n=12/組; *, P<0.05; **, P<0.01; ***,P<0.001(下同)

2.3 鋅加VC復(fù)合配方對脾臟T細(xì)胞數(shù)量的影響

如圖3-a所示，標(biāo)記脾臟T細(xì)胞數(shù)量的CD3+比例在模型組顯著降低，但由于復(fù)合配方的攝入得到顯著恢復(fù)。標(biāo)記輔助性T細(xì)胞的CD3+、CD4+、CD8-比例，對比空白組，模型組顯著降低；對比模型組，復(fù)合配方組顯著升高(圖3-b)。標(biāo)記細(xì)胞毒性T細(xì)胞的CD3+、CD4-、CD8+比例，對比空白組，模型組有降低趨勢但無顯著差異；復(fù)合配方組對比空白組和模型組未見顯著差異(圖3-c)。

以上結(jié)果表明鋅加VC復(fù)合配方通過抑制輔助性T細(xì)胞的減少，緩解了環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的脾臟T細(xì)胞減少。

a-CD3+比例；b-CD3+、CD4+、CD8-比例；c-CD3+、CD4-、CD8+比例圖3 鋅加VC復(fù)合配方對脾臟T細(xì)胞含量的影響Fig.3 The effect of zinc and VC compound formula on T cells content in immature mice spleen

2.4 鋅加VC復(fù)合配方對脾臟NK細(xì)胞活性的影響

如圖4所示，與空白組比較，復(fù)合配方組和模型組的脾臟NK細(xì)胞的活性顯著下降，且復(fù)合配方組和模型組之間無顯著性差異。

以上結(jié)果表明鋅加VC復(fù)合配方未能有效逆轉(zhuǎn)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的NK細(xì)胞活性降低。

圖4 鋅加VC復(fù)合配方對幼齡小鼠脾臟NK細(xì)胞活性的影響Fig.4 The effect of zinc and VC compound formula on NK cells activity in immature mice spleen

2.5 鋅加VC復(fù)合配方對腸道B細(xì)胞功能的影響

腸道中B細(xì)胞重要的生發(fā)中心派氏結(jié)的數(shù)量如圖5-a所示，對比空白組，模型組顯著減少；對比模型組，復(fù)合配方組顯著增多。表明B細(xì)胞功能的溶血空斑數(shù)于模型組顯著降低，由于復(fù)合配方的攝入顯著回升(圖5-b)。維持腸道黏膜穩(wěn)態(tài)的重要物質(zhì)SIgA同樣在模型組顯著降低，但由于復(fù)合配方的攝入得到部分回升(圖5-c)。

以上結(jié)果表明鋅加VC復(fù)合配方有效抑制了環(huán)磷酰胺造成的腸道B細(xì)胞功能障礙。

圖5 鋅加VC復(fù)合配方對腸道B細(xì)胞功能的影響Fig.5 The effect of zinc and VC compound formula on B cells function in immature mice intestine

2.6 鋅加VC復(fù)合配方對淋巴細(xì)胞增殖的影響

外周血淋巴細(xì)胞增殖如圖6所示，對比空白組，模型組和復(fù)合配方組顯著降低，且模型組和復(fù)合配方組未見顯著差異。

以上結(jié)果表明鋅加VC復(fù)合配方未能逆轉(zhuǎn)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的外周血淋巴細(xì)胞增殖障礙。

圖6 鋅加VC復(fù)合配方對淋巴細(xì)胞增殖的影響Fig.6 The effect of zinc and VC compound formula on proliferation ability of lymphocytes in immature mice serum

3 結(jié)論與展望

3.1 結(jié)論

鋅和VC在自然界中分布廣泛，工業(yè)生產(chǎn)成熟、成本低廉，并且二者功能繁多，因此作為營養(yǎng)補(bǔ)充劑的重要功效成分被廣泛應(yīng)用。然而，將鋅與VC聯(lián)用以抵抗兒童青少年發(fā)育期間的免疫力低下，目前還未發(fā)現(xiàn)相關(guān)研究。本研究首次發(fā)現(xiàn)鋅加VC復(fù)合配方具有逆轉(zhuǎn)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的幼齡小鼠免疫力低下的作用。

環(huán)磷酰胺是一種廣泛應(yīng)用于各種癌癥治療的臨床化療藥物，也是一種免疫抑制的誘導(dǎo)劑，可以通過破壞脾臟和胸腺功能來誘導(dǎo)免疫抑制。胸腺是T細(xì)胞分化場所，胚胎時期開始形成，出生后完成分化，于青春期達(dá)到活動高峰，之后開始萎縮，因此青春期是胸腺發(fā)育，建立T細(xì)胞庫的重要時期。本研究結(jié)果顯示鋅加VC復(fù)合配方顯著逆轉(zhuǎn)了環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的幼齡小鼠胸腺萎縮。T細(xì)胞分化成熟后經(jīng)循環(huán)系統(tǒng)分布至外周免疫器官。其中Th1和Th2細(xì)胞分泌的不同類型的細(xì)胞因子是決定細(xì)胞功能的重要因素。Th1細(xì)胞分泌IL-2、TNF-α和IFN-γ，參與細(xì)胞免疫應(yīng)答[20-21]。IFN-γ是一種天然免疫介質(zhì)，通過激活單核/巨噬細(xì)胞促進(jìn)主要組織相容性復(fù)合配方分子的表達(dá)[22-23]。IL-2由活化的T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生，可誘導(dǎo)未成熟T細(xì)胞的生長、增殖和分化為效應(yīng)T細(xì)胞[24]。TNF-α由T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，通過抑制細(xì)菌感染和抑制急性應(yīng)激來調(diào)節(jié)炎癥和宿主防御[25]。我們的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)外周血中Th1分泌的細(xì)胞因子IL-2、TNF-α、IFN-γ含量也由于鋅加VC復(fù)合配方的攝入恢復(fù)至接近正常水平。然而由Th2細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-4并未由于攝入復(fù)合配方而得到恢復(fù)。Th1和Th2細(xì)胞均是由前體細(xì)胞Th0極化而來，Th0細(xì)胞受某一種亞群極化受細(xì)胞因子、抗原種類及濃度、抗原呈遞細(xì)胞(antigen-presenting cells，APC)類型等多種因素的影響[26]。有文獻(xiàn)報道，鋅可以通過上調(diào)Th1細(xì)胞分泌細(xì)胞因子，增強(qiáng)Th1細(xì)胞應(yīng)答，并促進(jìn)Th0向Th1極化[11]。還有研究表明IFN-γ可以活化巨噬細(xì)胞為專職APC，當(dāng)巨噬細(xì)胞為專職APC時，會促進(jìn)Th0向Th1極化。與此同時IFN-γ還可以通過抑制IL-4的表達(dá)，抑制Th0向Th2極化[27]。因此我們推測有可能是由于復(fù)合配方介導(dǎo)IFN-γ促進(jìn)了Th0向Th1的極化，并抑制了IL-4的分泌。當(dāng)IL-2、IFN-γ細(xì)胞因子上調(diào)時會加速抗原向T細(xì)胞呈遞，激活CD4+T細(xì)胞。與此相對應(yīng)，本研究的結(jié)果證明了鋅加VC復(fù)合配方通過逆轉(zhuǎn)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的脾臟中CD3+T細(xì)胞和CD4+T細(xì)胞比例的減少，使脾臟輔助型T細(xì)胞數(shù)量顯著回升。因此，我們推測鋅加VC復(fù)合配方通過促進(jìn)Th1細(xì)胞的免疫應(yīng)答，逆轉(zhuǎn)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制。

除了輔助型T細(xì)胞以外，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(cytotoxic T lymphocyte，CTL)和NK細(xì)胞是存在于脾臟中參與早期免疫應(yīng)答的2種主要淋巴細(xì)胞，CTL細(xì)胞和NK細(xì)胞被細(xì)胞因子和趨化因子激活，在調(diào)節(jié)腫瘤生長和轉(zhuǎn)移以及消除病毒[28]中發(fā)揮核心作用。我們的實驗結(jié)果顯示鋅加VC復(fù)合配方對緩解環(huán)磷酰胺造成的脾臟CTL細(xì)胞數(shù)量減少和NK細(xì)胞活性降低均無顯著的影響。有研究報道人體在攝取500 mg/d VC的條件下會有效提升體內(nèi)CTL細(xì)胞數(shù)量和NK細(xì)胞活性[29]，在我們的實驗中，每只小鼠每天攝入VC的含量為50 mg/kg，相當(dāng)于人類250 mg/d，因此我們推測CTL細(xì)胞數(shù)量及NK細(xì)胞活性的恢復(fù)有可能依賴于VC的攝取量。

腸道黏膜免疫系統(tǒng)是一個結(jié)構(gòu)獨立、功能復(fù)雜的免疫網(wǎng)絡(luò)。派式結(jié)是腸道B細(xì)胞的生發(fā)中心，聚集了大量的活化B細(xì)胞，涵蓋了人體近80%的漿母細(xì)胞和漿細(xì)胞，生成大量的SIgA[30]。IgA是人體內(nèi)含量最多的免疫球蛋白，有著中和毒素、細(xì)菌或病毒，補(bǔ)體活化的作用。近年來，大量研究報道，天然提取物可通過促進(jìn)IgA、IgM和IgG的產(chǎn)生來增強(qiáng)體液免疫[31]。我們的結(jié)果表明，鋅和VC復(fù)合配方可以提高環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制小鼠B細(xì)胞的活性，同時提升腸道SIgA含量。這一結(jié)果表明鋅和VC復(fù)合配方在增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答中發(fā)揮了作用。

成熟血細(xì)胞如白細(xì)胞、紅細(xì)胞和血小板是由造血干細(xì)胞產(chǎn)生的，這些造血干細(xì)胞具有多能性和自我再生能力。有研究表明環(huán)磷酰胺降低了白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞數(shù)量，殺傷增殖期的淋巴細(xì)胞，減少循環(huán)系統(tǒng)中的淋巴細(xì)胞數(shù)目。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，環(huán)磷酰胺治療降低了外周血中淋巴細(xì)胞的增殖，與之前報道一致[32]。但鋅加VC復(fù)合配方攝入后淋巴細(xì)胞的增殖能力并未得到顯著恢復(fù)。在今后的實驗規(guī)劃中，我們將檢測外周血中紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板、中性粒細(xì)胞數(shù)量以及骨髓紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、巨核細(xì)胞的數(shù)量，以明確此鋅加VC復(fù)合配方是否對環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的骨髓抑制有影響。

綜上所述，我們的結(jié)果初步驗證了鋅加VC復(fù)合配方通過促進(jìn)Th1細(xì)胞的免疫應(yīng)答和提升腸道B細(xì)胞功能，增強(qiáng)體液免疫應(yīng)答逆轉(zhuǎn)由環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制(圖7)。

圖7 鋅加VC復(fù)合配方逆轉(zhuǎn)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的免疫抑制示意圖Fig.7 The schematic of reversion of cyclophosphamide-induced immunosuppression by zinc and VC compound formula

3.2 展望

提升兒童免疫力，綜合強(qiáng)化兒童及青少年的身體健康素質(zhì)一直是為社會所聚焦的公共衛(wèi)生問題。上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院兒童醫(yī)學(xué)中心童世廬團(tuán)隊對2 143例新冠肺炎患兒進(jìn)行統(tǒng)計研究，結(jié)果表明中度患者占38.8%，兒童重癥和危重癥的病例為5.9%。除了疫情的影響，許多難民兒童也長期面臨著生活衛(wèi)生條件差、營養(yǎng)不良、傳染性疾病、疫苗接種活動推遲等一系列災(zāi)難性健康影響。因此開發(fā)一種價格低廉，可以大規(guī)模生產(chǎn)的營養(yǎng)補(bǔ)充劑以提高兒童的基礎(chǔ)免疫力可以在一定程度上緩解社會醫(yī)療壓力，為兒童的健康提供保障。因此為開發(fā)切實有效的可以提高免疫力的營養(yǎng)補(bǔ)充劑提供充分的理論依據(jù)，對于實現(xiàn)全球性健康是至關(guān)重要的。