婦炎康聯(lián)合物理因子治療慢性盆腔炎的療效及對微小RNA-224-3P及轉(zhuǎn)化生長因子β/Smad信號通路表達(dá)的影響

彭智聰 許美珍

(廣東省中山市中醫(yī)院康復(fù)科，中山市 528403，電子郵箱：rencheng1214@163.com)。

盆腔炎是一種由上生殖道多種微生物感染引起的炎癥，年輕、性活躍女性多見，美國每年有750 000名女性患盆腔炎，以15～29歲為主[1-2]。其中，慢性盆腔炎(chronic pelvic inflammatory disease，CPID)最為常見，因其易反復(fù)導(dǎo)致患者生活質(zhì)量下降，約有20%的CPID患者因輸卵管瘢痕導(dǎo)致不孕，9%發(fā)生異位妊娠，18%出現(xiàn)慢性盆腔疼痛[3]。目前，藥物治療是CPID的主要治療手段，但治療效果并不理想。微小RNA(microRNA，miRNA)是一種長度在19～24個核苷酸之間的小型非編碼RNA，其可調(diào)節(jié)特定靶點，參與多種生理和病理過程[4-5]。miRNA表達(dá)水平在循環(huán)系統(tǒng)中較為穩(wěn)定，可用于評估疾病情況及治療效果[6]。有研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-224-3P對炎癥反應(yīng)有一定的抑制作用[7]，但其與CPID的關(guān)系目前尚不清楚。轉(zhuǎn)化生長因子β(transforming growth factor beta，TGF-β)與炎癥、炎癥性損傷和上皮恢復(fù)有一定的關(guān)系[8-9]，在損傷組織的修復(fù)和細(xì)胞更新以及機(jī)體炎癥反應(yīng)的發(fā)生發(fā)展中有舉足輕重的作用[10]。本研究探討婦炎康聯(lián)合物理因子治療慢性盆腔炎的療效及其對miRNA-224-3P及TGF-β/Smad信號通路表達(dá)的影響。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2016年3月至2018年10月在我院治療的62例CPID患者作為研究對象，納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)患者及其家屬對本研究均知情同意，并簽署知情同意書；(2)患者符合《2010年美國疾病控制中心盆腔炎治療指南》CPID診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]；(3)經(jīng)影像學(xué)檢查顯示盆腔有積液。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并肝腎功能不全患者；(2)合并其他炎癥性疾病患者；(3)患有精神疾病患者；(4)中途退出研究者。按隨機(jī)數(shù)字表法將62例患者分為觀察組和對照組，每組31例，其中觀察組年齡24～45(35.31±4.29)歲，病程0.4～10.2(4.26±2.67)年；對照組年齡27～43(35.46±3.25)歲，病程0.3～10.6(4.38±2.59)年。兩組患者年齡、病程差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(均P>0.05)。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會審核通過。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：對照組給予口服諾氟沙星和甲硝唑抗感染治療，其中諾氟沙星片(上海新亞藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字：H20031181，批號：20190409)0.1 g/次，3次/d；甲硝唑(銀川生化制藥廠，國藥準(zhǔn)字：H64020094，批號：20190613)0.2 g/次，3次/d，28 d為一個療程。觀察組患者在對照組治療方案基礎(chǔ)上，給予口服婦炎康片(廣東德鑫制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字Z44023648，批號：201900714，規(guī)格：0.25 g×18片×6板)1.5 g/次，3次/d，28 d為一個療程，并給予物理因子(中頻電)治療，中頻電治療方法：患者取仰臥位，在下腹部放置2個帶襯墊的矩形電極，利用砂袋固定好，設(shè)置合適的電流強(qiáng)度，40 min/次，1次/d，20 d為一個療程。兩組均治療一個療程。

1.2.2 觀察指標(biāo)：(1)TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平：治療前、療程結(jié)束后3 d內(nèi)采集患者空腹靜脈血約3 mL，室溫下靜置1 h，3 500 r/min離心5 min后收集血清，儲存于-80℃?zhèn)溆?。采用酶?lián)免疫吸附測定試驗檢測血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平，其中TGF-β1試劑盒購自美國eBioscience公司(批號：70-EK1812)，Smad-3(批號：121201)和Smad-7(批號：121271)試劑盒均購自上海西塘公司，均按照試劑盒說明書步驟進(jìn)行操作。(2)miRNA-224-3P相對表達(dá)水平檢測：采集患者治療前、療程結(jié)束后3 d內(nèi)空腹靜脈血約3 mL，室溫下靜置1 h，3 500 r/min離心5 min后收集血清，儲存于-80℃?zhèn)溆?。采用RNA提取試劑盒(北京天根生化科技公司，批號：DP419)提取血清總RNA，DU800型分光光度計測定RNA的濃度及純度，隨即進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)(每15 μL反應(yīng)體系加入含3 μL逆轉(zhuǎn)錄引物和7μL Master，5 μL RNA樣品，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA)，以cDNA為模板，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)作為內(nèi)參，按照實時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR)試劑盒(北京天根生化科技公司，批號：KR113)說明書檢測miRNA-224-3P的相對表達(dá)水平，反應(yīng)條件：95℃ 15 min，94℃ 15 s，55℃ 30 s，70℃ 35 s，40個循環(huán)，采用2-ΔΔCt計算miRNA-224-3P的相對表達(dá)水平。miRNA-224-3P正向引物5′-AAAAUGGUGCCCUAGUGACUACA-3′；反向引物5′-UGAAGUCACUAGGGCACCAUUU U-3′，GAPDH正向引物5′-GTGCGTGTCGTGGAGTCG-3′，反向引物 5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′。引物由上海生工生物技術(shù)有限公司合成。

1.2.3 療效評價[12]：療程結(jié)束后3 d內(nèi)進(jìn)行療效評價。痊愈：盆腔腫塊、性交痛、下腹墜脹以及異常白帶等癥狀完全消失，機(jī)體炎癥水平恢復(fù)正常，婦科檢查無按壓痛；顯效:盆腔腫塊、性交痛、下腹墜脹以及異常白帶等癥狀基本消失,機(jī)體炎癥水平顯著降低,婦科檢查無按壓痛,B超檢查正常,3個月無復(fù)發(fā)；有效:盆腔腫塊、性交痛、下腹墜脹以及異常白帶等癥狀改善,機(jī)體炎癥水平降低,婦科檢查按壓痛情況、B超檢查情況均改善；無效:未達(dá)到“有效”標(biāo)準(zhǔn)?？傆行?(痊愈+顯效+有效)例數(shù)/總例數(shù)×100%。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以(x±s)表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗，組內(nèi)比較采用配對t檢驗；計數(shù)資料以例數(shù)(百分比)表示，組間比較采用χ2檢驗；等級資料比較采用秩和檢驗。以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者血清miRNA-224-3P相對表達(dá)水平比較 治療前，兩組miRNA-224-3P相對表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，治療后，兩組miRNA-224-3P相對表達(dá)水平較治療前升高，且觀察組高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 兩組患者血清miRNA-224-3P相對表達(dá)水平比較(x±s)

2.2 兩組患者血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平比較 治療前，兩組患者血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組患者血清TGF-β1、Smad-3水平均較治療前降低，Smad-7水平均較治療前升高，且觀察組TGF-β1、Smad-3水平低于對照組，Smad-7水平高于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 患者治療前后血清TGF-β1、Smad-3和Smad-7水平比較(x±s，pg/mL)

2.3 兩組患者療效比較 觀察組療效優(yōu)于對照組(P<0.05)，但兩組總有效率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 兩組患者療效比較[n(%)]

3 討 論

CPID是一種在盆腔或與盆腔相關(guān)的結(jié)構(gòu)中持續(xù)、非循環(huán)疼痛的炎癥，長期的炎癥狀態(tài)導(dǎo)致身體其他部位受到牽連[13]，加上CPID具有較高的發(fā)病率和容易復(fù)發(fā)的特點，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。研究顯示，CPID多為病原體感染所導(dǎo)致，主要表現(xiàn)為盆腔組織或周邊組織的炎癥反應(yīng)，而機(jī)體免疫損傷和炎癥相關(guān)細(xì)胞因子的異常表達(dá)與CPID的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[14-15]。目前CPID的治療以抗生素治療為主，但部分患者感染源不明確，導(dǎo)致抗生素的選擇受到一定的限制，病情嚴(yán)重者需進(jìn)行手術(shù)治療。物理因子治療是利用物理因子的物理能，調(diào)節(jié)機(jī)體的神經(jīng)、體液、內(nèi)分泌等生理機(jī)能，起到消散炎癥及清除殘留浸潤硬結(jié)的作用，同時還可以預(yù)防并發(fā)癥，故物理因子治療在CPID、頸椎病及多種炎癥性疾病的臨床治療中得到廣泛應(yīng)用[16-17]。婦炎康具有清熱解毒、軟堅散結(jié)、消炎止痛等功效，治療陰道炎、CPID等疾病有顯著的臨床效果[7,18]。本研究結(jié)果顯示，在常規(guī)抗感染治療基礎(chǔ)上，給予婦炎康聯(lián)合物理因子治療CPID的療效優(yōu)于單純常規(guī)抗感染治療(P<0.05)，提示婦炎康聯(lián)合物理因子治療CPID的臨床療效更好。

miRNA-224-3p是miRNA-224家族成員之一，研究顯示，miRNA-224-3p高表達(dá)可導(dǎo)致Toll樣受體4的激活受到抑制[19]，大鼠NRK-52E細(xì)胞的炎癥反應(yīng)減輕，缺氧無糖損傷誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡得到改善[9]。還有研究顯示，雷公藤甲素通過上調(diào)miRNA-224-3p表達(dá)水平改善高糖誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞炎癥反應(yīng)[20]。以上研究結(jié)果提示 miRNA-224-3p與機(jī)體炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，但miRNA-244家族成員與盆腔炎癥的相關(guān)性鮮見報告。本研究結(jié)果顯示，治療后兩組血清miRNA-224-3p相對表達(dá)水平均較治療前升高，且觀察組高于對照組(P<0.05)，提示低表達(dá)的miRNA-224-3p可能與盆腔炎的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，上調(diào)miRNA-224-3p表達(dá)水平有助于緩解盆腔炎癥狀，提高療效，而婦炎康聯(lián)合物理因子治療可以促進(jìn)miRNA-224-3p的表達(dá)。TGF-β/Smad通路在調(diào)節(jié)組織炎癥損傷以及修復(fù)中起著關(guān)鍵作用[21]，TGF-β1是細(xì)胞因子超家族的一員，其可調(diào)控細(xì)胞生長和分化、黏附以及凋亡的整個過程，還參與機(jī)體損傷的修復(fù)、炎癥的發(fā)生發(fā)展等多種病理過程，被認(rèn)為是調(diào)控組織炎癥和修復(fù)機(jī)體損傷的關(guān)鍵細(xì)胞因子之一。有研究顯示，機(jī)體發(fā)生炎癥損傷后TGF-β1表達(dá)增加，這與其參與上皮炎癥的損傷和修復(fù)有關(guān)[22]。Smad是目前發(fā)現(xiàn)的唯一存在細(xì)胞內(nèi)的TGF-β相應(yīng)酶激活物[23]，其可介導(dǎo)TGF-β在細(xì)胞內(nèi)的信號傳導(dǎo)，其中Smad3和Smad7在TGF-β/Smad信號通路的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中有著重要的作用，Smad7作為TGF-β蛋白的負(fù)調(diào)控因子，在整個信號通路中起著負(fù)調(diào)控的作用[24]。本研究結(jié)果顯示，治療后兩組TGF-β1、Smad-3的表達(dá)較治療前下降，Smad-7的表達(dá)較治療前上升，且觀察組變化更明顯(P<0.05)，提示藥物干預(yù)后TGF-β1/Smad信號通路表達(dá)受到抑制，而婦炎康聯(lián)合物理因子治療CPID可以提高療效可能與調(diào)節(jié)TGF-β/Smad信號通路作用相關(guān)。但有研究發(fā)現(xiàn)多種藥物具有上調(diào)CPID患者TGF-β1表達(dá)的作用[25-26]，與本研究結(jié)果存在差異，可能與納入的研究對象年齡及病程不同有關(guān)，且藥物對信號通路的影響是一個復(fù)雜的過程，本研究結(jié)果還有待進(jìn)一步驗證。

綜上所述，在常規(guī)抗感染基礎(chǔ)上，給予婦炎康聯(lián)合物理因子治療CPID患者療效優(yōu)于常規(guī)抗生素治療，這可能與其促進(jìn)miRNA-224-3P表達(dá)，調(diào)節(jié)TGF-β/Smad信號通路有關(guān)。