NAA和6-BA濃度配比對(duì)鐵皮石斛原球莖增殖、分化組織培養(yǎng)的影響

李發(fā)良

摘 要：用鐵皮石斛原球莖做材料，以組織培養(yǎng)為基礎(chǔ)，研究?jī)煞N植物激素NAA和6-BA的不同濃度配比對(duì)鐵皮石斛增殖、分化的影響及最適濃度配比。結(jié)果顯示，在原球莖組織培養(yǎng)過程中，兩種激素濃度配比的不同使得石斛增殖、分化的效果也不同。鐵皮石斛原球莖增殖較為理想的培養(yǎng)基為MS+NAA 0.7mg/L+ 6-BA 1.5mg/L;鐵皮石斛原球莖分化較為理想的培養(yǎng)基為MS+NAA 0.3mg/L+6-BA 2.0mg/L。建議鐵皮石斛原球莖在增殖培養(yǎng)至兩個(gè)月時(shí)及時(shí)轉(zhuǎn)瓶以保證其繼續(xù)生長(zhǎng)。

關(guān)鍵詞：鐵皮石斛;原球莖;組織培養(yǎng);NAA;6-BA

鐵皮石斛（Dendrobiumcandidum）為蘭科石斛屬多年生常綠草本植物，是一種名貴藥材[1]。鐵皮石斛的藥用部分是新鮮或干燥莖，具有益胃生津、滋陰清熱的功效[2]。目前，有關(guān)鐵皮石斛原球莖的研究主要集中于無機(jī)鹽濃度、碳源以及有機(jī)附加物等對(duì)其增殖和分化的影響，而關(guān)于細(xì)胞分裂素和生長(zhǎng)素不同濃度配比對(duì)其增殖和分化影響的研究較少?，F(xiàn)以鐵皮石斛原球莖為研究材料，進(jìn)一步研究NAA和6-BA對(duì)其增殖和分化的影響，以期為鐵皮石斛原球莖的再生提供理論基礎(chǔ)。

一、材料及實(shí)驗(yàn)方法

（一）材料。鐵皮石斛原球莖（取自云南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院組培室），所有構(gòu)成MS培養(yǎng)基成分的原材料，以及實(shí)驗(yàn)所研究激素NAA和6-BA。

（二）培養(yǎng)基的配置。按照MS培養(yǎng)基配方，先分別配置出充裕的大量元素母液、微量元素母液、有機(jī)母液、鐵鹽母液以及激素母液;接著按配方配置足量的MS培養(yǎng)基并分裝到培養(yǎng)瓶中，每個(gè)培養(yǎng)瓶中約40ml;再分別按照預(yù)設(shè)的濃度梯度（見表1）向培養(yǎng)瓶中加入兩種激素，并對(duì)培養(yǎng)瓶封口、編號(hào)。將封好的培養(yǎng)基放入高溫高壓滅菌鍋中滅菌，取出靜止3天后，除凝固外無變化的即為可用。

（三）接種。選取相同條件下生長(zhǎng)良好的原球莖，切割成相同大小的小塊。在超凈工作臺(tái)上接種在之前滅完菌的培養(yǎng)基上。接種完后將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)架上培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光照時(shí)間14 h/d;光照強(qiáng)度1 000～2 000 lx;溫度（25±1）℃;濕度70%～80%。以上實(shí)驗(yàn)均在90 d之內(nèi)統(tǒng)計(jì)鐵皮石斛原球莖增殖和分化的情況（包括芽數(shù)、根數(shù)以及芽長(zhǎng)和原球莖增殖情況）。重復(fù)以上實(shí)驗(yàn)3次.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS軟件One-Way ANOVA 分析后進(jìn)行LSD法檢驗(yàn)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異顯著性。

二、結(jié)果與分析

（一）NAA和6-BA對(duì)鐵皮石斛原球莖增殖的影響。由表2可知：鐵皮石斛原球莖在25種培養(yǎng)基上均能增殖，添加NAA和6-BA均能促進(jìn)原球莖增殖;當(dāng)NAA為某一水平時(shí)，隨著6-BA濃度的增加，原球莖的增殖效果先增后減，當(dāng)6-BA濃度為某一水平時(shí)，隨著NAA濃度的增加，對(duì)石斛原球莖的分化影響先增后減。當(dāng)NAA濃度為0.7mg/L、6-BA濃度為1.5mg/L時(shí)，鐵皮石斛原球莖增殖效果相對(duì)比其他濃度配比要好，且原球莖的質(zhì)量更好，簇生，極易松散，色澤嫩綠;因此，鐵皮石斛原球莖較為理想的增殖培養(yǎng)基為MS+NAA0.7mg/L+ 6-BA 1.5mg/L。

（二）NAA和6-BA對(duì)鐵皮石斛原球莖分化的影響。為研究不同植物激素配比對(duì)石解原球莖分化的影響，以MS為基本培養(yǎng)基，附加NAA和6-BA進(jìn)行激素配比試驗(yàn)。培養(yǎng)兩個(gè)月后統(tǒng)計(jì)鐵皮石斛原球莖分化情況。由表3可知， MS 培養(yǎng)基無論添加或不添加激素， 鐵皮石斛原球莖均可分化， 但對(duì)照組分化程度最低， 添加 NAA 和6-BA均能促進(jìn)原球莖分化。當(dāng)NAA為某一水平時(shí)，隨著6-BA濃度的增加，原球莖的分化效果先增后減，當(dāng)6-BA濃度為某一水平時(shí)，隨著NAA濃度的增加，對(duì)石斛原球莖的分化有抑制作用。在從統(tǒng)計(jì)學(xué)的角度對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行雙因素分析并進(jìn)行作圖，如圖1、圖2所示，在NAA 濃度為0.3mg/L、6-BA濃度為2.0mg/L時(shí)，有利于鐵皮石斛原球莖的分化。由此得出， 鐵皮石斛原球莖較理想的分化培養(yǎng)基為 MS+NAA 0.3mg/L+6-BA 2.0mg/L

三、結(jié)論與討論

在植物快繁技術(shù)中，組織培養(yǎng)起到很大的作用， 外植體愈傷組織的形成及分化又與外源激素的作用密不可分， 其中適當(dāng)濃度配比的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素最為重要[3]。經(jīng)過該次試驗(yàn)結(jié)果表明， 當(dāng)培養(yǎng)基中不含激素時(shí)， 原球莖均可增殖與分化; 添加一定濃度的NAA和6-BA 后， 增殖程度、分化芽數(shù)增大;但隨著NAA 濃度的增大，有利增殖但不利于分化; 隨著6-BA濃度（在一定范圍內(nèi)）增大，不利增殖卻利于分化。同時(shí)，該試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)， 隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)， 培養(yǎng)基逐漸消耗， 原球莖得不到充足的養(yǎng)分， 生長(zhǎng)趨勢(shì)下降，逐漸出現(xiàn)變黑現(xiàn)象，甚至死亡。經(jīng)分析表明，從實(shí)驗(yàn)中獲得的數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

參考文獻(xiàn)

[1] 張紅梅， 劉建東， 王巖花，等.鐵皮石斛莖段快繁技術(shù)研究[J].山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2010， 30 （6）： 495-499.

[2] 包雪聲， 等. 中國(guó)藥用石斛[M].上海：上海醫(yī)科大學(xué)出版社，復(fù)旦大學(xué)出版社，2001：1-49.

[3] 王忠敏， 付淑琴， 張莉華， 等. 迎春花無菌體系的建立以及莖段和葉片愈傷組織的誘導(dǎo)[J] . 上饒師范學(xué)院學(xué)報(bào)， 2008， 28 （3）： 61-66.