糖尿病足患者外周血TIM4蛋白水平的變化及臨床意義*

吳光秀，夏培金，孫建娟

(重慶市涪陵中心醫(yī)院內(nèi)分泌科，重慶 408000)

糖尿病足是臨床常見的糖尿病并發(fā)癥，是糖尿病患者致殘及死亡的重要原因之一[1]。明確糖尿病足發(fā)病機(jī)制，對(duì)病情進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)估與治療是提高該病治療效果的關(guān)鍵。近年來，已有研究表明，糖尿病足的發(fā)病與自身免疫功能紊亂、炎性反應(yīng)的激活密切相關(guān)，其中Th細(xì)胞異常分化在糖尿病足的發(fā)生、發(fā)展過程中扮演了重要角色[2]。TIM4蛋白作為一個(gè)免疫調(diào)節(jié)因子，參與了機(jī)體Th細(xì)胞分化及功能的調(diào)節(jié)，與糖尿病、過敏性哮喘等疾病的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切[3-4]。已有研究證實(shí)，糖尿病患者體內(nèi)TIM4蛋白水平明顯升高，并且隨著病情的進(jìn)展而變化，在糖尿病的臨床診斷及預(yù)后評(píng)估中發(fā)揮重要作用[5]。然而，TIM4蛋白水平與糖尿病足的關(guān)系如何目前尚未闡明。本研究通過觀察糖尿病足患者外周血TIM4蛋白水平變化，評(píng)估其與疾病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年1月至2019年6月于本院內(nèi)分泌科就診的糖尿病合并糖尿病足患者160例作為觀察組，其中男82例，女78例；年齡41～82歲，中位年齡58歲。所有患者均符合糖尿病和糖尿病足診斷與治療標(biāo)準(zhǔn)[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并惡性腫瘤；非糖尿病引起的足部相關(guān)潰瘍；合并其他部位感染；存在其他自身免疫性疾病和免疫缺陷；存在嚴(yán)重肝、腎功能不全。選取同期160例未合并糖尿病足的單純2型糖尿病患者為對(duì)照組，其中男80例，女80例，年齡39～81歲，中位年齡57歲。依據(jù)Wagner分級(jí)法[7]，將糖尿病足患者按病情嚴(yán)重程度進(jìn)行分級(jí)，分別為0～1級(jí)(50例)、2～3級(jí)(54例)、4～5級(jí)(56例)；依據(jù)是否合并感染，分為糖尿病足感染組(65例)和糖尿病足非感染組(95例)。觀察組與對(duì)照組、觀察組各亞組間在性別構(gòu)成比、年齡等方面比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。所有研究對(duì)象自愿參與本研究，并簽署知情同意書，本研究獲得本院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)后進(jìn)行。

1.2儀器與試劑 流式細(xì)胞儀購自美國(guó)Becton Dickinson公司，多功能酶標(biāo)儀購自美國(guó)Thermo Fisher公司。細(xì)胞裂解液購自美國(guó)GE公司，TIM4蛋白、CD14單克隆抗體購自美國(guó)Invitrogen公司；降鈣素原(PCT)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.3外周血單核細(xì)胞TIM4蛋白陽性率檢測(cè) 抽取所有研究對(duì)象外周血標(biāo)本3 mL，經(jīng)肝素抗凝后，提取單核細(xì)胞，振蕩混勻后加入CD14單克隆抗體10 μL，室溫避光孵育30 min后，加入1 mL破膜液，靜置離心后(1 000×g，5 min，室溫)，吸去上清液，加入TIM4蛋白單克隆抗體5 μL，振蕩混勻后，采用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，記錄TIM4蛋白陽性率。

1.4外周血TIM4蛋白及相關(guān)炎癥因子水平的檢測(cè) 抽取各組外周血標(biāo)本4 mL，離心后收集上清液，采用ELISA法檢測(cè)TIM4蛋白水平，具體操作參照試劑盒說明書。炎癥因子PCT和C反應(yīng)蛋白(CRP)水平的檢測(cè)分別采用ELISA法和免疫散射比濁法。

2 結(jié) 果

2.1對(duì)照組與觀察組外周血TIM4蛋白比較 與對(duì)照組比較，觀察組外周血TIM4蛋白陽性率、水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，見表1。

表1 對(duì)照組與觀察組外周血TIM4蛋白比較

2.2不同Wagner分級(jí)患者外周血TIM4蛋白及相關(guān)炎癥因子水平比較 不同Wagner分級(jí)患者外周血TIM4蛋白水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中4～5級(jí)患者外周血TIM4蛋白水平最高，2～3級(jí)次之，0～1級(jí)最低。4～5級(jí)患者外周血PCT和CRP水平明顯高于2～3級(jí)和0～1級(jí)患者，而2～3級(jí)與0～1級(jí)患者比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表2 不同Wagner分級(jí)患者外周血TIM4蛋白及相關(guān)炎癥因子水平比較

2.3糖尿病足感染組與糖尿病足非感染組間TIM4蛋白及相關(guān)炎癥因子水平比較 糖尿病足感染組外周血TIM4蛋白、PCT及CRP水平明顯高于糖尿病足非感染組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表3。

表3 糖尿病足感染組與糖尿病足非感染組外周血TIM4蛋白及相關(guān)炎癥因子水平比較

2.4相關(guān)分析 觀察組患者外周血TIM4蛋白水平與Wagner分級(jí)、PCT及CRP水平呈顯著正相關(guān)(r=0.784，P=<0.001；r=0.601，P=0.005；r=0.568，P=0.008)。

2.5ROC曲線分析 外周血TIM4蛋白水平預(yù)測(cè)糖尿病足患者病情嚴(yán)重程度的ROC曲線結(jié)果顯示，外周血TIM4蛋白水平的AUC為0.875(95%CI:0.814～0.936)，其OOP為2.70 ng/mL，提示按此OOP對(duì)糖尿病足患者病情嚴(yán)重程度進(jìn)行預(yù)測(cè)，其靈敏度和特異度分別為77.97%和87.04%，均明顯優(yōu)于PCT和CRP，見圖1及表4。

圖1 各指標(biāo)預(yù)測(cè)糖尿病足患者病情嚴(yán)重程度的ROC曲線

表4 各指標(biāo)預(yù)測(cè)糖尿病足患者病情嚴(yán)重程度的性能

3 討 論

隨著人口老齡化進(jìn)程的加快，糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生率正呈現(xiàn)逐年升高趨勢(shì)[8]。有研究顯示，約50%醫(yī)院截肢手術(shù)與糖尿病有關(guān)，同時(shí)，有25%的糖尿病患者會(huì)出現(xiàn)足部病變[9]。早期評(píng)估糖尿病足病情嚴(yán)重程度，并針對(duì)靶點(diǎn)進(jìn)行干預(yù)，對(duì)于降低患者致殘率，提高患者生活質(zhì)量具有重要的臨床意義。目前，對(duì)于糖尿病足病情嚴(yán)重程度，臨床常采用Wagner分級(jí)法進(jìn)行評(píng)估，但該方法往往存在一定的滯后性，無法進(jìn)行預(yù)測(cè)[10]。傳統(tǒng)的炎性反應(yīng)指標(biāo)，如CRP、PCT等，對(duì)于糖尿病足病情嚴(yán)重程度的評(píng)估有一定的參考價(jià)值，但特異度偏低[11-12]。因此，尋找特異性指標(biāo)準(zhǔn)確預(yù)測(cè)糖尿病足患者病情嚴(yán)重程度是臨床研究的重點(diǎn)。

已有研究表明，糖尿病是一種慢性炎癥性疾病，機(jī)體免疫功能異常是其重要原因[13]。在糖尿病患者及動(dòng)物模型中，均可發(fā)現(xiàn)炎性反應(yīng)指標(biāo)如白細(xì)胞介素(IL)-1β、NLRP3炎癥小體、CRP等升高，并且其水平與患者血糖控制情況密切相關(guān)[14-15]。TIM4蛋白作為磷脂酰絲氨酸受體，通過促進(jìn)巨噬細(xì)胞活化、遷移，以及促進(jìn)Th細(xì)胞分化，達(dá)到調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用[16]。在器官缺血再灌注損傷、過敏性哮喘及糖尿病等疾病中，機(jī)體TIM4蛋白水平可明顯升高，參與疾病的發(fā)生、發(fā)展過程[3,17-18]。外周血TIM4蛋白是否參與了糖尿病足的發(fā)病，同時(shí)與病情嚴(yán)重程度相關(guān)性如何，目前尚不清楚。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，觀察組外周血TIM4蛋白陽性率和TIM4蛋白水平明顯升高，表明糖尿病足的發(fā)生可能與TIM4蛋白水平增加關(guān)系密切。進(jìn)一步根據(jù)糖尿病足患者病情嚴(yán)重程度進(jìn)行分組，其結(jié)果顯示，糖尿病足患者外周血TIM4蛋白水平隨著病情嚴(yán)重程度的增加而明顯升高。在糖尿病患者及動(dòng)物模型中，單核細(xì)胞分泌的IL-1β明顯上調(diào)，可進(jìn)一步促進(jìn)下游炎性反應(yīng)和氧化應(yīng)激通路的激活，誘導(dǎo)胰島素抵抗和胰島β細(xì)胞的凋亡，而TIM4蛋白是誘導(dǎo)上述單核細(xì)胞活化的重要因子[19]。另外有研究顯示，TIM4蛋白可通過負(fù)反饋機(jī)制抑制單核巨噬細(xì)胞的進(jìn)一步活化，參與調(diào)節(jié)免疫內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[20]。本研究進(jìn)一步繪制ROC曲線，分析外周血TIM4蛋白對(duì)糖尿病足患者病情嚴(yán)重程度的預(yù)測(cè)價(jià)值，其結(jié)果顯示，AUC較大，預(yù)測(cè)價(jià)值較高。

4 結(jié) 論

外周血TIM4蛋白可能與糖尿病足患者的發(fā)病及病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)，但有關(guān)TIM4蛋白在其中的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。檢測(cè)外周血TIM4蛋白可能成為糖尿病足診斷及病情嚴(yán)重程度評(píng)估的有效指標(biāo)。