胃癌患者血清IL-37、ANOS1、GKN1水平檢測(cè)及其臨床意義*

朱 清，裴小紅，黃重發(fā)，卜全慧，馬小芬，張 芳，張海鳴

(1.中國人民解放軍東部戰(zhàn)區(qū)空軍醫(yī)院消化內(nèi)科,江蘇南京 210000；2.中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第九〇四醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇蘇州 215000；3.江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院普外科，江蘇鎮(zhèn)江 212000)

胃癌是一種起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，是全球因癌癥導(dǎo)致死亡的第三大主要原因。早期胃癌患者的5年生存率超過90%，晚期5年生存率不足50%[1]。早期診斷胃癌對(duì)提高患者治療效果，降低患者病死率，以及改善患者的預(yù)后具有重要意義。白細(xì)胞介素(IL)-37是IL-1家族的新成員，對(duì)于抑制先天免疫和炎性反應(yīng)至關(guān)重要，并且在抑制細(xì)胞因子、趨化因子和中性粒細(xì)胞浸潤中發(fā)揮重要作用[2]。有研究表明，IL-37在結(jié)腸癌、宮頸癌等惡性腫瘤中有抗腫瘤作用[3]。ANOS1作為一種相對(duì)分子質(zhì)量為100×103的糖蛋白，在細(xì)胞黏附和遷移中起關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)，ANOS1與腫瘤發(fā)展有關(guān)，ANOS1表達(dá)水平升高可促進(jìn)結(jié)腸癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移[4]。胃動(dòng)蛋白1(GKN1)是胃動(dòng)蛋白家族的成員之一，其可抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，并下調(diào) Wnt 信號(hào)通路中β-catenin 和cyclin D1的表達(dá)，發(fā)揮抑癌效應(yīng)[5]。研究發(fā)現(xiàn)，GKN1具有保護(hù)胃黏膜、促進(jìn)受傷黏膜修復(fù)、抑制腫瘤進(jìn)展等功能[6]。目前，關(guān)于IL-37、ANOS1、GKN1在胃癌患者血清中的研究較少。因此，本研究旨在分析血清IL-37、ANOS1、GKN1在胃癌患者中的表達(dá)及其對(duì)胃癌的診斷及預(yù)測(cè)價(jià)值。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月至2019年1月中國人民解放軍東部戰(zhàn)區(qū)空軍醫(yī)院消化內(nèi)科收治的胃癌患者145例納入研究組，其中男80例，女65例；年齡30～78歲，平均(58.93±10.62)歲；腫瘤最大徑>4 cm 92例，最大徑≤4 cm 53例；腫瘤高分化28例，中分化49例，低分化68例；TNM分期Ⅰ期29例，Ⅱ期45例，Ⅲ期53例，Ⅳ期18例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移84例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移61例。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的《胃癌規(guī)范化診治指南》診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；(2)術(shù)后患者病理檢查均確診為胃癌；(3)均為原發(fā)性胃癌；(4)入院前未行放療、化療及免疫學(xué)治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)存在其他器官的惡性腫瘤；(2)存在全身感染性疾病；(3)存在自身免疫性疾??；(4)存在造血系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾??；(5)存在急性胃穿孔及大出血；(6)臨床資料不完整。另選取體檢健康人員60例納入對(duì)照組，其中男30例，女30例；年齡30～78歲，平均(55.35±7.71)歲。兩組受試者的年齡、性別構(gòu)成比比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)中國人民解放軍東部戰(zhàn)區(qū)空軍醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)后進(jìn)行，所有受試者均簽署知情同意書。

1.2方法 所有受試者均在空腹?fàn)顟B(tài)下抽取外周靜脈血5 mL，3 000 r/min 離心10 min，分離血清，保存于-80 ℃冰箱中待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)血清IL-37、ANOS1、GKN1水平。血清IL-37 ELISA試劑盒購自上?？道噬锟萍加邢薰?；血清ANOS1 ELISA試劑盒購自上海騫億生物科技有限公司；血清GKN1 ELISA試劑盒購自上海信裕生物技術(shù)有限公司。所有操作均按照試劑盒說明書進(jìn)行。收集胃癌患者臨床資料，包括患者的年齡、性別、腫瘤最大徑、腫瘤分期、腫瘤組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等。

2 結(jié) 果

2.1研究組與對(duì)照組血清IL-37、ANOS1、GKN1水平比較 研究組血清IL-37、ANOS1水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；研究組血清GKN1水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 研究組與對(duì)照組血清IL-37、ANOS1、GKN1水平比較

2.2不同病理參數(shù)胃癌患者血清IL-37、ANOS1、GKN1水平比較 胃癌腫瘤最大徑>4 cm、低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清IL-37、ANOS1、GKN1水平與胃癌腫瘤最大徑≤4 cm、中-高分化、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同病理參數(shù)胃癌患者血清IL-37、ANOS1、GKN1水平比較

2.3血清IL-37、ANOS1、GKN1對(duì)胃癌患者的診斷價(jià)值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清IL-37診斷胃癌的AUC為0.736，靈敏度和特異度分別為0.719和0.767；ANOS1的AUC為0.772，靈敏度和特異度分別為0.807和0.791；GKN1的AUC為0.751，靈敏度和特異度分別為0.754和0.744；IL-37、ANOS1、GKN1聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.868，靈敏度和特異度分別為0.895和0.837，見表3、圖1。

圖1 血清IL-37、ANOS1、GKN1診斷胃癌發(fā)生的ROC曲線

表3 血清IL-37、ANOS1、GKN1對(duì)胃癌的診斷價(jià)值分析

2.4影響胃癌發(fā)生的單因素和多因素Logistic回歸分析 單因素Logistic回歸分析顯示，患者血清IL-37、ANOS1、GKN1水平變化與胃癌發(fā)生有關(guān)(P<0.05)。將上述相關(guān)因素進(jìn)行多因素Logistic回歸分析，結(jié)果顯示，血清IL-37、ANOS1水平升高和血清GKN1水平降低是影響胃癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表4。

表4 影響胃癌發(fā)生的單因素和多因素Logistic回歸分析

3 討 論

胃癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，我國胃癌患者的發(fā)病率和病死率分別為28/100 000和25/100 000[8]。近年來，隨著人們生活方式及飲食習(xí)慣的改變，胃癌的發(fā)病率逐年增加，且呈年輕化的趨勢(shì)?；颊咴缙诎Y狀不明顯，就診時(shí)常處于癌癥的中晚期，只能通過手術(shù)進(jìn)行治療，且患者的預(yù)后較差。胃鏡及病理活檢是診斷胃癌的金標(biāo)準(zhǔn)，但其為侵入性檢查，創(chuàng)傷性較大，不適合用于胃癌的大規(guī)模早期篩查。因此，尋找一種操作簡(jiǎn)單、創(chuàng)傷性小、診斷價(jià)值高的血清生物標(biāo)志物對(duì)胃癌的診斷及治療至關(guān)重要。

IL-37是IL-1家族的第7因子，包含11個(gè)具有β-barrel基序的結(jié)構(gòu)相關(guān)成員。IL-37是先天免疫、獲得性免疫及炎性反應(yīng)的抑制劑，與疾病的活動(dòng)有關(guān)，其可由促炎細(xì)胞因子IL-18、干擾素-γ、IL-1p和 Toll樣受體配體脂多糖等的刺激誘導(dǎo)表達(dá)[9]。IL-37也可通過調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞而達(dá)到抗腫瘤作用。IL-37從細(xì)胞中釋放或分泌，細(xì)胞外形式的IL-37與IL-18受體IL-18Rα結(jié)合并募集抑制性受體IL-1R8，從而傳遞抑制信號(hào)抑制核因子(NF)-κB途徑，并抑制炎性反應(yīng)及腫瘤的進(jìn)展[10]。有研究發(fā)現(xiàn)，IL-37可通過抑制β-catenin從而抑制結(jié)腸癌的進(jìn)展，而IL-37的缺乏與結(jié)腸癌生存率低有關(guān)[11]。有研究表明，血清IL-37水平升高與卵巢癌患者的不良預(yù)后有關(guān)[12]。ANOS1基因編碼細(xì)胞黏附蛋白，是細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的組成部分。有研究表明，ANOS1與細(xì)胞膜中的硫酸肝素蛋白聚糖具有高親和力，會(huì)影響細(xì)胞黏附、神經(jīng)突向外生長分支及細(xì)胞遷移[13]。同時(shí)，由于ANOS1位于ECM中，可能與腫瘤微環(huán)境的構(gòu)成有關(guān)。ANOS1基因在與腫瘤轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的細(xì)胞黏附、細(xì)胞遷移中起著重要作用[4]。ECM蛋白和細(xì)胞黏附分子在腫瘤細(xì)胞的增殖和侵襲特性中起著關(guān)鍵作用，如上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化是導(dǎo)致癌癥進(jìn)展的關(guān)鍵機(jī)制之一[14]。KANDA等[14]的研究表明，抑制ANOS1表達(dá)能夠降低胃癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移，升高的ANOS1水平與胃癌的表型、較短的無病生存期和總生存期關(guān)系密切。GKN1也稱胃竇黏膜蛋白-18或CAll蛋白fove-olin，是一種新型的胃黏膜保護(hù)蛋白[15]。GKN1對(duì)維持胃黏膜的生理功能很重要，在健康胃組織中高表達(dá)，但在胃腫瘤組織和衍生細(xì)胞系中卻下調(diào)或缺失。有研究發(fā)現(xiàn)，GKN1可通過調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生參與胃黏膜炎性反應(yīng)，特別是GKN1表達(dá)的恢復(fù)抑制了細(xì)胞遷移和侵襲性，從而廢除了PI3K/akt途徑蛋白的表達(dá)，并伴有E-鈣黏蛋白的表達(dá)[16]。GKN1在維持黏膜完整性和體內(nèi)平衡方面起著重要作用，并通過調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖和分化而起到抑癌作用[17]。YOON等[17]研究發(fā)現(xiàn)，胃癌患者的血清GKN1水平明顯低于健康對(duì)照者，血清GKN1是一種高特異度的診斷性生物標(biāo)志物，可快速檢測(cè)早期和晚期胃癌。

本研究結(jié)果顯示，研究組血清IL-37、ANOS1水平高于對(duì)照組，血清GKN1水平低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；胃癌腫瘤最大徑>4 cm、低分化、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者血清IL-37、ANOS1、GKN1水平與胃癌腫瘤最大徑≤4 cm、中-高分化、TNM分期Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明血清IL-37、ANOS1、GKN1可反映胃癌的發(fā)生、病情進(jìn)展及不良預(yù)后情況，與YOON等[17]和KANDA等[18]研究報(bào)道一致。ROC曲線分析結(jié)果顯示，IL-37、ANOS1、GKN1聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度和特異度均高于單獨(dú)檢測(cè)，表明三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)胃癌的診斷價(jià)值更高。多因素Logistic回歸分析顯示，血清IL-37、ANOS1水平升高和血清GKN1水平降低是影響胃癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。ZHANG等[19]的研究發(fā)現(xiàn)，血清IL-37是影響胃癌發(fā)生的獨(dú)立危險(xiǎn)因素和預(yù)測(cè)胃癌生存預(yù)后的潛在指標(biāo)。

4 結(jié) 論

胃癌患者血清IL-37、ANOS1水平升高，血清GKN1水平降低，并且與胃癌患者的腫瘤最大徑、腫瘤組織分化程度、TNM分期等臨床病理特征關(guān)系密切。血清IL-37、ANOS1、GKN1的檢測(cè)過程簡(jiǎn)單方便、重復(fù)性好，其聯(lián)合檢測(cè)能夠提高胃癌診斷的靈敏度和特異度，值得在臨床中推廣應(yīng)用。