食品微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

王美英

衡陽(yáng)縣市場(chǎng)監(jiān)督檢驗(yàn)檢測(cè)中心 湖南衡陽(yáng) 421000

1 培養(yǎng)基

（1）為保證干粉培養(yǎng)基質(zhì)量指標(biāo)，在實(shí)際工作中應(yīng)注意

①加強(qiáng)包裝的密封性能；

②使用時(shí)盡量縮短開(kāi)蓋時(shí)間；

③一般干性培養(yǎng)基放在低溫干燥的環(huán)境中保存，對(duì)于易受潮的品種，啟用后宜放入干燥器中保存；

④由于配制水分不同，啟用次數(shù)或時(shí)間增加，干粉培養(yǎng)基的pH 值可能會(huì)有所變化，應(yīng)隨時(shí)略加調(diào)整。

（2）培養(yǎng)基的配制應(yīng)嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法進(jìn)行操作，并做好原始記錄。

（3）為保證培養(yǎng)基必須在玻璃容器，搪瓷或鋁鍋中進(jìn)行，如用銅，鐵器皿，會(huì)對(duì)微生物生長(zhǎng)有毒害作用；

（4）配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)按檢驗(yàn)項(xiàng)目規(guī)定的配方添加，不得隨意增減或更改培養(yǎng)基成分。

（5）要用專用的角匙取藥品，避免交叉污染而影響檢驗(yàn)結(jié)果；

培養(yǎng)基配制最好用蒸餾水或去離子水，避免使用自來(lái)水，因其中含有氯等抗菌物質(zhì)；

（6）不同類型的微生物對(duì)pH 值的要求不同，配制培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)測(cè)調(diào)值，如測(cè)定結(jié)果與所要求的值不符，則用1NNaOH 或1NHCL 溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。

（7）效果試驗(yàn)是指按不同的培養(yǎng)基接種相應(yīng)的菌株，觀察細(xì)菌的發(fā)育，菌落形狀，色素，溶血等特征，據(jù)此判斷培養(yǎng)基是否符合要求[1]。

2 檢驗(yàn)質(zhì)量

除按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)所需檢驗(yàn)項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)外，在實(shí)際工作中還應(yīng)注意以下幾個(gè)方面，否則會(huì)影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性：

（1）在定量檢驗(yàn)時(shí)用重量法還是用體積法，檢驗(yàn)結(jié)果會(huì)有誤差，因?yàn)榇酥夭坏扔? 的樣品，1ml 和1g 的化驗(yàn)結(jié)果絕不會(huì)相等。一般固態(tài)的樣品宜用重量法，液體樣品宜用體積法。但對(duì)粘性液體(如酸奶），如用體積法，會(huì)粘附一定量的樣品在吸管上，因此此類樣品最好用重量法。

（2）如檢樣需用無(wú)菌水或無(wú)菌生理鹽水稀釋，則最好用均質(zhì)器或組織碎機(jī)，以8000-10000 轉(zhuǎn)/min 的轉(zhuǎn)速處理1min，制成均勻的菌懸液。

（3）樣品稀釋時(shí)，常會(huì)滯留少量樣品在吸管內(nèi)外，應(yīng)多加注意。吸入液體后，應(yīng)沿管壁慢慢注入遞增的稀釋中，特別注意此時(shí)吸管尖端切不可碰到稀釋液中。

（4）在培養(yǎng)基注入檢樣，菌懸液時(shí)，注意培養(yǎng)基溫度宜在45℃-50℃之間，并使培養(yǎng)基與檢樣，菌懸液充分混合。

（5）微生物培養(yǎng)時(shí)，應(yīng)根據(jù)要求選擇正確的培養(yǎng)溫度和時(shí)間。

（6）應(yīng)用無(wú)菌水或無(wú)菌生理鹽水作空白對(duì)照，如果在空白對(duì)照中檢出細(xì)菌，則可認(rèn)為培養(yǎng)基質(zhì)量存在問(wèn)題或在操作過(guò)程中存在污染情況。另外，采用標(biāo)準(zhǔn)菌種作陽(yáng)性對(duì)照，觀察培養(yǎng)基的質(zhì)量情況。

（7）整個(gè)檢驗(yàn)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。

（8）及時(shí)檢查結(jié)果，做好原始數(shù)據(jù)記錄[2]。

3 常見(jiàn)的參考菌株保存方法

3.1 細(xì)菌

（1）營(yíng)養(yǎng)要求不高的需氧細(xì)菌在胰胨大豆瓊脂斜面上能存活1 年。

（2）需氧或厭氧菌的長(zhǎng)期儲(chǔ)存需冷凍干燥，或存放在-70℃。

（3）營(yíng)養(yǎng)要求不高的凍干菌種每隔5 年要解凍分離重新凍干。

（4）細(xì)菌低溫冰凍保存時(shí)可懸浮于消毒去脂牛奶，含15%甘油的胰胨大豆肉湯或無(wú)菌馬血中。

3.2 真菌

（1）酵母菌按營(yíng)養(yǎng)要求不高的細(xì)菌同樣處理。

（2）霉菌在馬鈴薯葡萄糖瓊脂斜面上4℃儲(chǔ)存6 個(gè)月-1 年，斜面上覆蓋消毒石蠟油可在室溫下長(zhǎng)期存放。菌種保藏的方法

4 菌種保藏的方法

4.1 定期移植保藏方法

將菌種接種于適宜的斜面或液體培養(yǎng)基，也可進(jìn)行穿刺培養(yǎng)，等生長(zhǎng)成健壯的菌體（對(duì)數(shù)期細(xì)胞，有性孢子或無(wú)性孢子）后，將菌種放置4℃冰箱保藏，每間隔一定時(shí)間需要重新移植培養(yǎng)一次。芽孢桿菌3-6 個(gè)月移種一次，其它細(xì)菌每月移種一次。

4.2 液體石蠟保藏法

這種方法是定期移值保藏法的補(bǔ)充，在生長(zhǎng)良好的斜面表面覆蓋一層無(wú)菌的石蠟，液面高出培養(yǎng)基1cm，將其置試管架上以直立狀態(tài)低溫保藏，液體石蠟可以防止水分蒸發(fā)，隔絕氧氣，所以能延長(zhǎng)保藏的時(shí)間。

4.3 沙管保藏法，土壤保藏法

（1）取河沙加入10%稀鹽酸，加熱煮沸30 分鐘，以去除其中的有機(jī)質(zhì)。

（2）倒去酸水，用自來(lái)水沖洗至中性。

（3）烘干，用40 目篩子過(guò)篩，以去掉粗顆粒，備用。

（4）另取非耕作層的不含腐植質(zhì)的瘦黃土或紅土，加自來(lái)水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性。

（5）烘干，碾碎，通過(guò)100 目篩子過(guò)篩，以去除粗顆粒。

4.4 冷凍干燥保藏法

冷凍干燥保藏法一般過(guò)程

（1）安瓿管-酸洗，水洗-烘干-滅菌；

（2）配制保護(hù)劑-分裝-滅菌；

（3）菌種-培養(yǎng)-制備菌懸液（加入2）-分裝安瓿管-預(yù)凍-真空干燥-裝在歧管上抽真空-火焰上熔封安瓿管口-檢測(cè)真空-保藏。

5 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外質(zhì)量控制

5.1 內(nèi)部質(zhì)量控制

為保證實(shí)驗(yàn)室連續(xù)評(píng)價(jià)結(jié)果的可靠性和精密度，必須對(duì)所用方法的重復(fù)性及再現(xiàn)性定期測(cè)定。對(duì)于不同的控制系統(tǒng)，實(shí)驗(yàn)室必須建立限值，超過(guò)限值應(yīng)采取糾偏措施。實(shí)踐中內(nèi)部質(zhì)量控制可包括：

（1）系統(tǒng)地使用一式雙份的菌落計(jì)數(shù)測(cè)定；

（2）由同一檢驗(yàn)人員和幾個(gè)檢驗(yàn)人員作平行樣；

（3）定期或不定期進(jìn)行盲樣測(cè)試。

5.2 外部質(zhì)量控制

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)參加外部的質(zhì)量控制活動(dòng)，對(duì)其開(kāi)展的每一項(xiàng)檢測(cè)均應(yīng)參加相應(yīng)的室間質(zhì)量控制。對(duì)有關(guān)實(shí)驗(yàn)室或管理機(jī)構(gòu)發(fā)出的測(cè)試樣品應(yīng)嚴(yán)格地當(dāng)作普通樣品一樣處理，這樣一種方法有助于實(shí)驗(yàn)室每天測(cè)試的準(zhǔn)確性和重復(fù)性，是對(duì)實(shí)驗(yàn)室所用的方法、試劑、設(shè)備、人員能力的測(cè)試。從室間樣品測(cè)試中的錯(cuò)誤可以發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室的不足之處，對(duì)工作人員的教育改進(jìn)可以提高實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)質(zhì)量。對(duì)返回的室間測(cè)定評(píng)級(jí)中存在的問(wèn)題應(yīng)當(dāng)召集體員工討論，改進(jìn)措施（包括方法的改變，員工的改變，員工的再訓(xùn)練，培養(yǎng)基和試劑購(gòu)買來(lái)源的更換等）應(yīng)當(dāng)記錄在案。某些項(xiàng)目缺少室間質(zhì)量控制，實(shí)驗(yàn)室可以設(shè)置室內(nèi)質(zhì)量控制，每半年自行評(píng)估一次。經(jīng)常參加微生物實(shí)驗(yàn)室間質(zhì)控活動(dòng)，有助于加強(qiáng)檢測(cè)人員的基本功訓(xùn)練，增強(qiáng)樣品檢測(cè)過(guò)程中“量”的概念[3]。實(shí)驗(yàn)室間的質(zhì)控可在國(guó)內(nèi)外范圍進(jìn)行，有能力的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)力爭(zhēng)參加國(guó)家際間質(zhì)控活動(dòng)，樹(shù)立良好的檢驗(yàn)信譽(yù)。

6 結(jié)語(yǔ)

微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制比較復(fù)雜，目前尚無(wú)統(tǒng)一規(guī)范，國(guó)內(nèi)各實(shí)驗(yàn)室條件參差不齊，要使微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制日臻完善，仍需廣大微生物檢驗(yàn)人員共同努力。